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乙肝病毒DNA疫苗双表达载体的构建及其诱导小鼠的免疫应答: 目的:构建乙肝表面抗原基因(HBsAg)与细胞因子GM-CSF基因的双表达载体,利用GM-CSF的免疫佐剂作用,提高乙肝病毒DNA疫苗的免疫效果. 方法:将微小病毒内部核糖体进入位点(IRES)基因克隆到质粒p...; 冷梅吴晓鹃赵大鹏韩顺子汪春义; 关键词：乙肝病毒 DNA疫苗粒细胞巨噬细胞集落刺激因子免疫佐剂免疫应答; 文献传递

甲型流感病毒DNA疫苗双表达载体的构建及表达被引量：1: 2008年; 目的:构建含有甲型流感病毒M2基因与GM-CSF基因的DNA疫苗双表达载体,为研究甲型通用流感疫苗奠定基础。方法:将甲型流感病毒(H1N1)接种鸡胚后收获尿囊液,提取流感病毒总RNA,RT-PCR法扩增M2基因;将微小病毒内部核糖体进入位点(IRES)基因插入到质粒pVAXⅠ多克隆位点,再将M2基因和GM-CSF基因依次克隆到IRES的上、下游多克隆位点,构建出甲型流感病毒双表达载体pMIG,酶切鉴定后测序;脂质体法转染COS7细胞并检测目的蛋白的表达。结果:成功扩增出M2基因(约300bp)、IRES基因(约580bp)和GM-CSF基因(约400bp),酶切鉴定结果表明构建出甲型流感病毒双表达载体pMIG,Western blotting检测证明流感病毒M2蛋白的表达。结论:成功构建出流感病毒DNA疫苗双表达载体pMIG。; 彭丽萍赵大鹏戚凤春汪春义张雪梅贾媛匡科伟陈云波宋泽民赵晓红徐建国; 关键词：流感病毒A型 DNA疫苗

表达人胰岛素的人参愈伤组织细胞系的建立被引量：6: 2007年; 目的建立表达人胰岛素的人参愈伤组织细胞系。方法将已构建成的植物表达载体pBI121/(CTB-BA)转入农杆菌LBA4404中,通过农杆菌与人参愈伤组织细胞的共培养,将人胰岛素基因整合到人参愈伤组织细胞中,对其表达产物进行检测,并用小鼠进行降糖试验。结果表达产物的基因组DNA测序结果与设计完全相同。Westernblot检测显示,在相对分子质量约17000处有特异蛋白反应带。ELISA法检测人胰岛素表达量为5.31μIU/ml。小鼠降糖试验表明人参愈伤组织细胞有降血糖的作用,而转化的人参愈伤组织细胞降血糖作用更明显。结论人胰岛素已在人参愈伤组织细胞中成功表达。; 汪春义戚凤春陈桂玲申镇维王宣军谢英林盛军; 关键词：人胰岛素农杆菌共培养

CpG-ODN对乙肝核酸疫苗及重组疫苗免疫效果的影响被引量：4: 2005年; 目的研究CpG寡聚脱氧核苷酸(CpGODN)对乙肝核酸疫苗及重组(CHO细胞)疫苗免疫效果的影响。方法核酸疫苗实验组用CpGODN与乙肝核酸疫苗联合免疫BALBc小鼠,阳性对照组注射核酸疫苗,阴性对照组注射质粒pVAX1;重组疫苗分4个实验组,用CpGODN与不同剂量的重组疫苗配伍后分别免疫BALBc小鼠,阳性对照组注射重组疫苗,阴性对照组注射生理盐水。应用ELISA检测小鼠血清中的抗HBs水平。结果CpG与乙肝核酸疫苗组抗体阳转率比阳性对照组提高3倍,抗体水平提高2倍。CpG与重组疫苗组的阳转率和阳转时间均高于或早于CpG与核酸疫苗实验组。加入CpGODN后,即使重组疫苗用量减少3倍,诱导抗体水平和阳转率均无明显改变。结论CpGODN可提高乙肝核酸疫苗和重组疫苗的免疫效果,并使抗体产生的时间提前。; 吴晓娟赵大鹏冷梅刘丹戚凤春汪春义王佳凤岳丹王华齐影付学奇; 关键词：CPG-ODN 核酸疫苗重组疫苗免疫效果乙肝寡聚脱氧核苷酸疫苗用量

HBsAg与GM-CSF基因双表达载体的构建及其免疫效果被引量：1: 2008年; 目的构建乙型肝炎表面抗原基因(HBsAg)与GM-CSF基因的双表达载体,提高乙肝病毒DNA疫苗的免疫效果。方法将微小病毒内部核糖体进入位点(IRES)基因克隆到质粒pVAXⅠ多克隆位点,再将HBsAg基因和GM-CSF基因依次克隆到IRES的上、下游多克隆位点处,构建双表达载体pHIG。将pHIG转染到COS-7细胞中,检测瞬时表达情况,并用双表达质粒pHIG免疫BALB/c小鼠,检测免疫后小鼠血清中抗-HBs及其脾脏T细胞表面CD4+、CD8+分子的数量。结果在转染pHIG质粒的COS-7细胞上清液中有HBsAg的表达,pHIG双表达质粒组比pVAX/HBs组抗体产生时间提前2周,抗体阳转率提高2倍,小鼠脾脏T细胞表面CD4+分子数量及CD4+/CD8+值均高于pVAX/HBs组。结论HBsAg与GM-CSF基因双表达质粒能引起小鼠特异性免疫应答,并可提高免疫效果。; 冷梅闫刚迟春萍韩顺子吴晓娟赵大鹏汪春义郑全莉李鑫李雨桐张秀霞姜崴; 关键词：乙型肝炎表面抗原 DNA疫苗粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子内部核糖体进入位点

带有IL-2基因佐剂的乙肝病毒DNA疫苗构建及其免疫效果的观察: ：构建带有白细胞介素Ⅱ蛋白佐剂基因的乙肝病毒DNA疫苗. 方法：将微小病毒内部核糖体进入位点基因克隆到质粒pVAX1栽体多克隆位点，构建出DNA疫苗双表达载体pVAX1.将PCR扩增出的白细胞介素Ⅱ基因和HBsA...; 吴晓娟冷梅赵大鹏崔颖杰张岩汪春义戚凤春郭新付学奇; 关键词：乙肝病毒免疫效果

昆虫细胞的培养和尿激酶原表达的研究: 汪春义李云富姜海平陈万革叶世德; 关键词：昆虫细胞

含IL-2基因的乙型肝炎病毒DNA疫苗的构建及其免疫效果被引量：5: 2006年; 目的构建含白细胞介素-2(IL-2)基因的乙型肝炎病毒DNA疫苗,并考察免疫效果。方法将微小病毒内部核糖体进入位点(Internal ribosomal entry site,IRES)基因克隆到质粒pVAX1载体多克隆位点处,再将乙肝病毒表面抗原(HB-sAg)基因和IL-2基因分别连接在IRES基因的两侧,构建出乙肝病毒DNA疫苗pHII。将pHII转染COS-7细胞,进行瞬时表达。大量提取质粒后,按0、2、4周程序免疫BALB/c小鼠,以pVAX1质粒为阴性对照,pVAX/HBsAg质粒为阳性对照。第1针免疫1周后开始眼眶采血,检测血清中HBsAg和HBsAb含量。第1针免疫13周后处死小鼠,用流式细胞仪检测其脾脏T细胞表面CD4+、CD8+分子数量。结果在转染pHII质粒的COS-7细胞上清液中检测到HBsAg和IL-2的表达。实验组和阳性对照组小鼠分别于第1针免疫2、4周后,在血清中检测出HBsAb,但阴性对照组未测出。以上3组均未检测出HBsAg。实验组与阳性对照组相比,产生抗体的时间提前2周,抗体阳转率提高2.5倍,产生抗体的量也提高了近3倍。实验组CD4+分子数量和CD4+/CD8+值均高于阳性对照组。结论乙肝病毒DNA疫苗pHII成功诱导出小鼠的免疫应答,其免疫效果明显优于不含分子佐剂的乙肝DNA疫苗。; 吴晓娟赵大鹏冷梅崔颖杰张岩汪春义戚凤春郭新陈云波何伟徐建国付学奇; 关键词：乙型肝炎 DNA疫苗白细胞介素-2 佐剂

甲型流感病毒DNA疫苗的小鼠免疫效果: 2009年; 目的观察甲型流感病毒M2基因与GM-CSF基因DNA疫苗的小鼠免疫效果。方法提取甲型流感病毒DNA疫苗质粒。将BALB/c小鼠随机分成流感裂解疫苗对照组、空载体pVAXI对照组、pVAX/GM-CSF对照组、pVAX/M2实验组、pMIG实验组,按0、2、4程序免疫BALB/c小鼠,第一针免疫后1周,定期对小鼠眼眶采血。用血凝抑制(HI)试验检测特异性抗体,流式细胞术双标法检测脾脏T细胞表面CD4+、CD8+分子数量,ELISA方法检测细胞因子IL-4和IFN-γ的含量,并进行保护性试验。结果流感裂解疫苗对照组HI平均值均>40,产生了特异性血凝素抗体,其余各组均未检测到抗体;流感裂解疫苗组具有较强的刺激淋巴细胞增殖的作用,各组间T淋巴细胞表面CD4+及CD4+/CD8+的水平比较,差异有统计学意义;DNA疫苗组可刺激机体产生较高水平的细胞因子,且保护率较流感裂解疫苗对照组提高了一倍。结论甲型流感病毒DNA疫苗可诱导小鼠的免疫应答,且细胞免疫水平显著高于流感裂解疫苗。; 孙洋张雪梅赵大鹏汪春义戚凤春赵虹刘岩松任琦辛暨华徐建国; 关键词：甲型流感病毒 DNA疫苗免疫效果

流行性感冒病毒裂解疫苗安全性与免疫原性研究被引量：4: 2009年; 目的评价流行性感冒(流感)病毒裂解疫苗的安全性和免疫原性。方法按随机抽样原则,采用单一中心、开放式、接种1剂流感病毒裂解疫苗免疫的方法,开展临床试验。结果观察对象接种1剂后局部反应发生率为0.6%;发热反应发生率4.52%,且以轻度发热为主。血清学检测结果表明,接种疫苗后,流感病毒甲1、甲3、乙(亚)型的血凝抑制(Haemagglutination Inhibition,HAI)抗体总阳转(≥1:40)率分别为95.0%、87.1%、88.1%;HAI抗体几何平均滴度(Geometric Mean Titer,GMT)增长倍数分别为33.28倍、7.76倍、26.04倍;抗体保护率分别为100.0%、99.7%、98.4%。三个型别之间抗体阳转率、GMT增长倍数、保护率的差异有显著的统计学意义。结论国产流感病毒裂解疫苗应用于≥3岁人群是安全的,免疫效果显著。; 张雪梅戚凤春汪春义赵大鹏王亚军李晓波惠琦孙金海; 关键词：流行性感冒病毒裂解疫苗安全性免疫原性

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汪春义

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