马秀英
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 弓形虫Rop46基因敲除虫株的构建及其生长复制能力评价被引量：3
- 2016年
- 棒状体蛋白(Rops)是弓形虫的一类与侵入、复制相关的重要分泌蛋白。Rop46蛋白在弓形虫急性感染阶段和慢性感染阶段的表达存在显著差异。为探究Rop46的生物学功能,本研究采用CRISPR/Cas9技术构建了Rop46基因敲除重组质粒,制备了Rop46基因缺失虫株。序列分析表明,基因缺失虫株中的Rop46基因的编码序列缺失了82个碱基,证明本研究构建的基因敲除重组质粒能够有效的在弓形虫PLK虫株中敲除目的基因。利用流式细胞术对Rop46基因缺失虫株的生长特性进行检测和分析,结果显示Rop46基因缺失虫株的侵入和复制效率显著降低,表明缺失Rop46基因可能对PLK虫株的侵入及复制能力具有显著影响。
- 王成双马秀英郑君贾洪林王新
- 关键词：弓形虫
- 弓形虫Rop32与宿主细胞相互作用蛋白的初步筛选被引量：1
- 2016年
- 弓形虫棒状体蛋白32(Rop32)是由弓形虫棒状体在感染细胞中分泌于宿主细胞中的磷酸激酶,但其功能尚不清楚。为筛选与Rop32相互作用的宿主蛋白,本研究利用构建的p GBKT7-Rop32诱饵质粒转化酵母菌株Y2H,通过表型从人包皮成纤维细胞文库中筛选与Rop32相互作用的宿主蛋白。结果表明p GBKT7-Rop32诱饵质粒无自激活和细胞毒性作用。通过酵母双杂交,共筛选到12个与Rop32具有相互作用的宿主细胞蛋白。将筛选的阳性克隆进行序列分析结果表明,筛选到的蛋白包括1个参与蛋白转运相关蛋白、1个凋亡相关蛋白、1个细胞骨架蛋白、1个参与能量转化的磷酸转移酶以及8个其它蛋白。利用免疫共沉淀试验进一步验证了Rop32和SEC63蛋白之间的特异性相互作用。Rop32与参与蛋白转运的SEC63的相互作用提示Rop32可能在弓形虫对营养物质和代谢物的运输过程中发挥作用。
- 马秀英郑君王成双贾洪林
- 关键词：刚地弓形虫酵母双杂交技术
