孙晓璐
- 作品数：2 被引量：0H指数：0
- 供职机构：苏州大学更多>>
- 发文基金：艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 结核分枝杆菌Ag85A在毕赤酵母中的表达、纯化及酶联免疫斑点试验研究
- 2012年
- 目的利用毕赤酵母表达和纯化结核分枝杆菌Ag85A蛋白,以期得到高效刺激T淋巴记忆细胞产生γ-干扰素的特异性抗原。方法用PCR扩增得到Ag85a基因,构建出重组质粒pPic9k-85a,通过电转化进入毕赤酵母,经遗传霉素G418抗性筛选、硫酸铵沉淀浓缩及离子交换层析纯化得到目的蛋白。最后以大肠杆菌和毕赤酵母表达的Ag85A分别为抗原刺激物进行酶联免疫斑点(Elispot)试验,分析其刺激BCG免疫小鼠T淋巴细胞产生γ-干扰素(IFN-γ)的能力。结果在毕赤酵母中成功克隆并稳定表达了Ag85A蛋白,Elispot检测结果表明,毕赤酵母比大肠杆菌产生的Ag85A蛋白,对小鼠T淋巴细胞的刺激效果更加明显(P<0.05),能产生更多的免疫斑点。结论毕赤酵母表达的Ag85A蛋白可以更高效的刺激T淋巴细胞,可用于检测结核杆菌感染诱导的细胞免疫应答。
- 冯丽萍张平静汪成富孙晓璐樊小英李忠明
- 关键词：毕赤酵母细胞免疫
- 毕赤酵母对不同细菌抗原的差异性表达
- 2011年
- 利用毕赤酵母研究真核细胞对不同的原核细菌可溶性蛋白抗原的差异性表达。用PCR技术扩增3种不同的结核杆菌抗原基因Ag85a、ESAT6、以及rdESAT6和1种肺炎链球菌抗原基因PsaA。将它们分别连接到pPic9k载体中,在毕赤酵母中进行表达。然后采用离子交换柱或镍柱(Ni-NTA)分别纯化这4种可溶性蛋白抗原。在这些表达的原核可溶性抗原中,肺炎球菌的PsaA蛋白抗原表达量最高,约200 mg/L;然而,3种结核杆菌抗原的表达量差异性不大,rdESAT6约2 mg/L,Ag85a约1 mg/L,而ESAT6低于0.5 mg/L且不稳定。另外,ESAT6和rdESAT6蛋白分别有不同程度的糖基化现象。在相似的条件下,不同的原核抗原在毕赤酵母系统中的表达在难易程度与产量等方面存在很大的差异姓。
- 孙晓璐张平静汪成富冯丽萍樊小英李忠明
- 关键词：毕赤酵母
