方斌
- 作品数：4 被引量：4H指数：2
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- 利用CRISPR/Cas9技术构建ACE2基因修饰的猪胎儿成纤维细胞系
- 2022年
- 目的:利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建血管紧张素转换酶2(angiotensin converting enzyme 2,ACE2)基因编辑的长白猪胎儿成纤维细胞(porcine fetal fibroblast,PFF)细胞系,为构建新型冠状病毒即严重急性呼吸综合征冠状病毒2型(severe acute respiratory syndrome coronavirus type 2,SARS-CoV-2)不易感猪模型提供实验材料。方法:(1)利用生物信息学方法对大鼠和鸡的ACE2氨基酸序列进行比对,将大鼠ACE2与SARS-CoV-2 S蛋白相互作用的关键氨基酸残基替换为鸡ACE2的氨基酸残基,设计嵌合的ACE2基因并构建ACE2基因敲入供体。(2)设计并合成靶向猪ACE2基因的sgRNA,克隆到p X330载体上构建ACE2基因打靶载体。(3)将ACE2打靶载体和ACE2基因敲入供体以及Neomycin抗性质粒共转染至长白猪PFF细胞,筛选G418抗性单细胞克隆并进行测序鉴定。结果:根据氨基酸序列比对结果,将大鼠ACE2蛋白的第19、31、34、35、42、353、354位氨基酸残基替换为鸡ACE2的氨基酸残基,设计合成了嵌合的ACE2基因。G418抗性单细胞克隆基因型分析结果显示获得了阳性单细胞克隆。结论:利用CRISPR/Cas9技术成功获得了内源ACE2基因敲除、嵌合ACE2敲入的长白公猪PFF细胞系,为构建SARS-CoV-2不易感猪模型奠定了基础。
- 张成霖方斌刘晓蕊李琳王盈杨海元戴一凡
- 关键词：ACE2
- GGTA1/CMAH/β4GalNT2三基因敲除猪作为异种心脏瓣膜供体
- 张润洁王荣根方斌李楚陈雷任雪洋厉小雪熊强张立宁金永张曼玲刘晓蕊王盈杨海元李荣凤戴一凡
- ApoE基因敲除巴马猪动脉粥样硬化模型的建立及表型分析
- 研究背景:随着心血管疾病发病率逐年升高,作为心脑血管疾病基础病因的动脉粥样硬化也受到广泛关注。动脉粥样硬化初期动脉血管壁内膜及内膜下脂质及糖类异常聚集,血管内皮隆起形成粥样病灶或纤维性脂质病变,造成血管管壁变厚,管腔狭窄...
- 方斌
- 关键词：动脉粥样硬化APOE
- 文献传递
- 成年小鼠神经干细胞培养、鉴定以及多不饱和脂肪酸含量的测定被引量：2
- 2017年
- 目的 :探讨成年小鼠大脑室下区神经干细胞(neural stem cells,NSCs)体外分离培养和鉴定的方法 ,测定体外培养的神经干细胞多不饱和脂肪酸n6/n3的比例和二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,DHA)含量。方法:取8~10周龄的C57BL/6小鼠室下区细胞,进行体外悬浮培养,观察NSCs形成情况,免疫荧光鉴定NSCs干细胞特性及体外分化能力,气相色谱鉴定NSCs的多不饱和脂肪酸含量中n6/n3比例及DHA含量。结果:体外培养的细胞可以增殖,并可以连续传代;免疫荧光显示神经干细胞呈抗巢蛋白阳性,神经干细胞在分化培养基培养时可分化为NeuN、TuJ1、GFAP、O4阳性细胞;神经干细胞的多不饱和脂肪酸含量较鼠尾高。结论:采用无血清培养基成功获得成年小鼠室下区的神经干细胞,具有增殖、自我更新和分化的能力;神经干细胞的n3多不饱和脂肪酸含量明显高于鼠尾中的含量,且DHA多不饱和脂肪酸占较高比例。
- 张正卫俞俊峰王荣根阮苗苗张润洁方斌王冠王盈戴一凡
- 关键词：神经干细胞神经球脑室下区多不饱和脂肪酸
