叶秀峰
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
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- 人IgE-Fc结构域的基因克隆、原核表达及单克隆抗体的制备被引量：1
- 2016年
- 目的通过制备小鼠抗人IgE单克隆抗体,为过敏性疾病的研究及诊断打下基础。方法以CRL8033细胞的cDNA为模板扩增人IgE Fcε3-4段基因序列并将其连接到p ET-32a(+)载体中,转化BL21(DE3)大肠杆菌并进行表达。然后将表达所得包涵体进行变复性,把复性所得蛋白进行亲和纯化,通过SDS-PAGE验证纯化效果。最后将纯化的蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠,经三次免疫后取小鼠脾脏细胞与SP2/0细胞融合。用ELISA法筛选出能结合人IgE蛋白的阳性克隆,并应用ELISA、Western blot等手段对杂交瘤所分泌单克隆抗体的特异性进行鉴定。结果成功构建p ET-32a(+)-IgE Fcε3-4载体并纯化IgE Fcε3-4蛋白。用该蛋白作为免疫原免疫小鼠,成功制备了杂交瘤细胞株,其分泌的单克隆抗体能够特异性结合人IgE蛋白,可用于ELISA、Western blot等手段对人IgE的检测。结论成功获得了可用于特异性检测人IgE蛋白的单克隆抗体,为人IgE的检测及哮喘等过敏性疾病的研究、诊断及治疗奠定了基础。
- 崔璐璐毕嘉成李俊鑫刘绿艳叶秀峰郑明星万晓春于广
- 关键词：免疫球蛋白E过敏性疾病
