目的:构建人snail基因真核表达载体并鉴定。方法:使用RT-PCR法获取人snail基因全长c DNA,经Bam H I、Eco R I双酶切、连接,插入pc DNA3.1(+)真核表达载体,转化TOP10感受态细胞,用含氨苄青霉素的LB培养基筛选阳性克隆,提取质粒双酶切电泳及测序鉴定,瞬时转染siha细胞Western-blot从蛋白水平鉴定重组质粒在真核细胞内的表达。结果:pc DNA3.1-snail重组质粒经酶切电泳符合预期片段,测序鉴定插入片段与NCBI Gen Bank文库中人snail序列一致,重组质粒瞬时转染后snail蛋白表达量明显增高。结论:成功构建pc DNA3.1-snail重组质粒载体,为进一步探讨snail基因生物学功能奠定了基础。
目的研究T细胞型急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)患者HOX11L2基因的表达及其临床意义。方法采用回顾性分析方法对50例患者性别、年龄、白细胞数量、FAB分类(L1,L2 and L3)、分子生物学特点以及生存时间进行分析,观察HOX11L2基因表达与临床特点及预后关系。结果50例T细胞型急性淋巴细胞白血病患者中,表达HOX11L2基因患者为12例(24%),其中男性7例(58.3%),女性5例(41.7%),HOX11L2基因表达者在男女性别之间的比较,差异无统计学意义(χ^2=0.119,P=0.730)。表达HOX11L2基因患者年龄在5~10岁间居多,表达率为58.3%,与其它年龄组之间的比较,差异有统计学意义(χ^2=11.577,P=0.018)。HOX11L2基因表达患者中白细胞计数≤50×10^9/L的患者10例(83.3%),白细胞计数>50×10^9/L的患者2例(16.7%),两组比较差异有统计学意义(χ^2=5.469,P=0.019)。FAB分类中,有75%的HOX11L2基因表达患者为L1型,与L2和L3组相比较,差异有统计学意义(χ^2=8.766,P=0.008)。其中34例获得随访资料的患者,HOX11L2基因表达组比非表达组生存时间短(中位生存时间分别为8.0个月和11.0个月),两组差异具有统计学意义(P<0.05)。结论研究结果表明HOX11L2基因主要表达于T-ALL患者,且以L1型儿童T-ALL为主,HOX11L2基因表达者预后不良,生存时间短。临床上通过HOX11L2基因检测结果与常规细胞形态学、遗传学、荧光原位杂交等技术检测结果相结合,将对急性淋巴细胞白血病的鉴别诊断、分型、预后及微小残留病检测等具有十分重要的意义。
