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凌云: 作品数：22 被引量：106H指数：6; 供职机构：浙江中医药大学生物工程学院动物实验研究中心更多>>; 发文基金：浙江省自然科学基金国家自然科学基金浙江省教育厅科研计划更多>>; 相关领域：医药卫生生物学社会学经济管理更多>>

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电转系统介导的荧光素酶稳定表达PANC-1细胞的构建及其生物发光成像检测被引量：1: 2016年; 在构建稳定表达荧光素酶的人胰腺癌PANC-1细胞的基础上,建立适合活体成像研究的胰腺癌动物模型,为深入研究胰腺癌发病机制打下基础。该研究运用Lonza NucleofectorTM核转染系统将携带有荧光素酶基因(firefly luciferase,luc)的质粒(GV258)稳定转染PANC-1细胞,利用嘌呤霉素筛选出能稳定表达荧光素酶的细胞株PANC-1-LUC,并应用活体成像系统对其体内外生物发光进行检测。进一步构建PANC-1-LUC裸鼠皮下移植瘤,同样方法接种慢病毒载体构建的PANC-1-luc细胞作为对照,观察成瘤率、瘤体积,检测生物发光强度。体内外生物发光检测结果均显示,光通量值与细胞数之间呈显著的直线相关(P<0.01)。PANC-1-LUC细胞皮下接种裸鼠,1周成瘤率即达80%以上,瘤体积可达平均100 mm3。观察6周,裸鼠皮下肿瘤生长符合Gompertzian曲线。每周的生物发光检测结果均显示,PANC-1-LUC移植瘤的光强度与瘤体积有显著的线性关系(P<0.05)。以上结果说明,该文所构建的PANC-1-LUC细胞株能够稳定、长期地表达荧光素酶,更适合构建活体成像研究的裸鼠胰腺癌模型。; 屠珏黄宇凌云齐月寒陈民利; 关键词：荧光素酶 PANC-1细胞生物发光

小檗胺选择性诱导FLT3突变急性髓系白血病细胞MV4-11凋亡及其机制研究被引量：3: 2018年; 目的探讨小檗胺选择性诱导FMS样酪氨酸激酶3(FMS-like tyrosine kinase 3,FLT3)基因突变急性白血病细胞凋亡及其可能作用机制。方法应用MTT法比较小檗胺对FLT3突变阳性急性髓系白血病细胞株MV4-11和野生型FLT3肿瘤细胞胰腺癌细胞株PANC-1、淋巴瘤细胞株Pfeiffer、肺癌细胞株A549增殖的影响;流式细胞术检测小檗胺处理MV4-11后细胞凋亡和细胞周期的变化;Western blotting法检测FLT3及下游信号分子磷酸化STAT5(p-STAT5)蛋白的变化。结果 MTT结果显示,小檗胺作用于MV4-11细胞24、48、72 h的半数抑制浓度(IC50)值分别是(7.039±0.700)、(4.840±0.271)、(2.088±0.376)μmol/L,明显低于野生型FLT3肿瘤细胞株;小檗胺作用于MV4-11细胞48 h后,随着小檗胺浓度增加,凋亡细胞比例增高,细胞周期停滞在G0/G1期。小檗胺呈浓度依赖性下调FLT3突变蛋白和p-STAT5蛋白的表达。结论小檗胺能选择性下调FLT3突变蛋白及其下游信号分子p-STAT5,诱导FLT3突变急性髓系白血病MV4-11细胞凋亡和生长抑制。; 黄宇余庆峰徐荣臻凌云; 关键词：小檗胺急性髓系白血病凋亡

解毒化浊方对HER-2阳性乳腺癌细胞PI3K/Akt信号通路相关蛋白表达的影响被引量：6: 2018年; 目的观察解毒化浊方血清对HER-2阳性乳腺癌细胞PI3K/Akt信号通路相关蛋白表达的影响,探讨解毒化浊方治疗HER-2阳性乳腺癌的作用机制。方法将雌性Wistar大鼠分为对照组、中药组、西药组、联合组4组,分别给药制备含药血清,再以给药血清干预SK-BR-3细胞,采用Western blot检测HER-2、p-HER-2蛋白表达以及PI3K/Akt通路相关蛋白p-Akt、Bad、p-Bad表达。结果 Western blot检测显示,中药组、西药组、联合组HER-2、p-HER-2灰度比较对照组均降低;西药组、联合组HER-2、p-HER-2、p-Akt灰度比较对照组明显降低,西药组、联合组较对照组HER-2、p-HER-2、p-Akt表达含量差异有统计学意义(P<0.05)。中药组、西药组、联合组Bad、p-Bad灰度比较对照组降低,总Bad表达含量各组间差异无统计学意义(P>0.05)。西药组、联合组p-Bad表达含量差异有统计学意义(P<0.05)。结论解毒化浊方具有下调PI3K/Akt信号通路中相关蛋白表达,协同抑制剂发挥减毒增效的抗肿瘤作用。; 胡升芳谷焕鹏凌云屠珏王大维; 关键词：HER-2阳性 PI3K/AKT 乳腺癌

活体生物发光示踪术观察中国被毛孢抑制小鼠4T1-luc乳腺癌肺转移作用被引量：3: 2013年; [目的]利用活体生物发光成像技术,探讨中国被毛孢菌丝体对小鼠乳腺癌肺转移的影响。[方法]4T1-luc乳腺癌细胞原位接种于50只BALB/c小鼠2周后,取40只荷瘤小鼠,分成4组,即模型组(10mL.kg-1NS)、HSM低剂量组(1.0g.kg-1HSM)、HSM高剂量组(2.0g.kg-1HSM)、阳性组(20mg.kg-1CTX),每组10只,连续给药21d;测定各组小鼠原位肿瘤体积和重量,并用活体生物发光成像仪观察各组小鼠乳腺癌肺转移情况。[结果]小鼠灌胃给予1.0g.kg-1、2.0g.kg-1HSM后,原位肿瘤体积和重量明显降低(P<0.05,P<0.01),原位肿瘤抑瘤率分别为22.92%和32.50%;给予2.0g.kg-1HSM的小鼠乳腺癌肺转移明显减少(P<0.01),乳腺癌肺转移的抑制率为51.77%。[结论]中国被毛孢菌丝体具有较好的抑制小鼠乳腺癌肺转移作用。; 傅惠英屠珏凌云张利棕寿旗扬陈民利; 关键词：肺转移

卵白蛋白诱导的WHBE兔树突状细胞甘露糖受体的表达及功能研究: 2017年; 该文研究了卵白蛋白诱导的WHBE(white hair black eyes)兔外周血来源树突状细胞(dendritic cells,DCs)甘露糖受体(mannose receptor,MR)的表达及功能,以阐明其对变应原易感的机制。分离WHBE兔外周血单核细胞,以20 ng/m L粒细胞–巨噬细胞集落刺激因子(granulocytemacrophage colony stimulating factor,GM-CSF)和20 ng/m L IL-4(interleukin-4)在体外联合诱导培养6 d,获得的细胞显示典型的树突状细胞形态特征。流式细胞术检测DCs表面分子CD86和人白细胞DR抗原(human leukocyte antigen-DR,HLA-DR)的表达,结果显示,WHBE兔和日本大耳白(Japanese white,JW)兔外周血DCs经卵白蛋白(ovalbumin,OVA)诱导后,CD86和HLA-DR表达水平均升高,其中,WHBE兔CD86水平高于JW兔。荧光定量PCR检测结果显示,OVA诱导后,两个品系兔外周血DCs的MR m RNA相对水平均显著升高(P<0.05),且WHBE兔显著高于JW兔(P<0.05)。抗原摄取实验发现,DCs经OVA刺激24 h后,抗原摄取能力低于对照组,MR抑制剂能显著降低DCs的抗原摄取率(P<0.05,P<0.01)。WHBE兔DCs抗原摄取率和平均荧光强度(mean flourscence indensity,MFI)均高于JW兔相同处理组,其中MFI值呈现极显著性差异(P<0.01)。该研究结果表明,OVA诱发后,WHBE兔DCs可能通过其表面共刺激分子CD86、抗原识别受体MR的高表达,使抗原递呈功能增强,介导Th2型细胞过度活化,导致气道变态反应性炎症。WHBE兔MR的表达及功能特点可能是影响WHBE兔DCs对变应原敏感性的关键因素。; 屠珏谷焕鹏蔡月琴凌云刘军平徐剑钦; 关键词：卵白蛋白树突状细胞甘露糖受体

高脂环境下雄激素缺乏对小型猪内脏脂肪蓄积和炎症基因表达的影响被引量：4: 2017年; 目的探讨高脂环境下雄激素缺乏对小型猪内脏脂肪沉积、血清激素以及炎症相关基因表达的影响。方法将性成熟的雄性五指山小型猪随机分成三组,即不去势组(SHAM),去势组(CAS)和去势加睾酮组(CAS+T),每组6只,所有动物均饲喂高脂饲料。12周实验结束时,采血检测血清激素水平变化,分离内脏脂肪并进行称重,采用荧光定量PCR技术检测脂肪合成与脂肪分解基因以及炎症相关基因的表达。结果 (1)去势显著减少高脂饮食小型猪血清睾酮含量但增加其血清瘦素含量,给予外源性睾酮处理能够恢复去势小型猪血清睾酮和瘦素水平;(2)去势导致高脂饮食小型猪内脏脂肪大量沉积,给予睾酮处理后,去势小型猪内脏脂肪含量显著降低;(3)去势和睾酮处理对高脂饮食小型猪内脏脂肪组织FAS、ACC、HSL和ATGL等脂肪代谢基因的表达没有显著影响;(4)去势显著上调高脂饮食小型猪内脏脂肪组织Leptin、CD68、CCL16、CCL23和SAA等炎症基因的表达,采用外源性睾酮处理去势小型猪则能降低上述基因的表达。结论去势诱导的雄激素缺乏促进高脂饮食小型猪内脏脂肪沉积,并上调其内脏脂肪组织中炎症基因的表达,采用睾酮处理则能够改善去势小型猪内脏脂肪蓄积和炎症反应。; 蔡兆伟凌云蔡月琴朱科燕陈诚; 关键词：雄激素小型猪脂肪沉积

社会资本在健康管理中的作用认识与方法探讨被引量：5: 2007年; 主要从健康管理的角度探讨社会资本构成要素与人群健康的关系、社会资本在健康管理工作中的功能及其实现途径等问题。开发社会资本对健康管理的潜在功效不仅有益于增进人群健康水平,同时也有助于发掘并有效利用卫生资源,为卫生工作注入新的活力。; 孙顺根俞志新李水根凌云邱渊磊; 关键词：社会资本健康管理

睾酮缺乏对高脂诱导小型猪内脏脂肪组织DNA甲基化的影响: 2021年; 为探讨DNA甲基化在睾酮缺乏促进高脂饮食诱导的小型猪肥胖中的作用,本研究采用甲基化DNA免疫共沉淀测序(MeDIP-Seq)技术分析高脂饲喂的不去势、去势和去势+睾酮3组小型猪内脏脂肪组织DNA甲基化差异,对筛选出的差异甲基化基因进行注释和功能富集分析,并运用RT-qPCR技术检测差异甲基化基因的表达。结果表明,不去势、去势和去势+睾酮3组样本在基因组上的甲基化分布情况相似,即Gene body区的甲基化水平高于3'UTR和5'UTR区。另外,在去势vs.不去势和去势vs.去势+睾酮两组样本中分别筛选得到2839个和2510个差异甲基化基因,这些基因主要富集在脂肪细胞因子转导、抗原处理以及呈递、脂肪酸代谢和氨基酸代谢等通路。睾酮缺乏导致高脂饲喂小型猪内脏脂肪组织LEP以及NCF1内含子区甲基化和SLC-27A1启动子区甲基化水平升高,并且LEP和NCF1 mRNA表达与甲基化呈正相关,而SLC27A1 mRNA表达与甲基化呈负相关。本研究推测,睾酮缺乏可能通过影响脂质代谢和炎症反应等多个途径基因DNA甲基化参与调控脂肪沉积和肥胖发生。; 李庆海邓利群凌云蔡月琴黄俊杰章学东蔡兆伟; 关键词：睾酮小型猪脂肪沉积 DNA甲基化

鳖甲煎丸不同提取物对TGF-β1诱导的HSC-T6细胞的影响被引量：13: 2016年; 目的:探讨鳖甲煎丸不同提取物对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的HSC-T6细胞增殖及相关细胞因子的影响作用,并探究水提物与醇提物抗肝纤维化作用的异同。方法:建立TGF-β1诱导HSC-T6细胞增殖模型,采用MTT法观察水提物与醇提物对HSC-T6细胞增殖的量效和时效关系来探讨鳖甲煎丸提取物对TGF-β1诱导HSC-T6细胞增殖的影响;并采用RT-PCR、ELISA法测定不同提取物对HSC-T6细胞相关细胞因子的影响。结果:鳖甲煎丸水提物在0.125-2.000mg/m L浓度范围,抑制效果随剂量增加而降低,呈线性负相关关系,醇提物未见明显的剂量依赖关系。水提物抑制作用随时间延长表现为先增强后减弱,醇提物则表现出一定的时间依赖性,随时间延长而增强。与空白对照组比较,模型组细胞相关细胞因子α-SMA、Col-Ⅲ、CTGF和PDGF m RNA含量增高(P<0.05)。与模型组比较,鳖甲煎丸水提物使HSC-T6细胞COL-Ⅲ、COL-Ⅳ、PDGF m RNA含量和蛋白表达降低。醇提物使HSC-T6细胞COL-Ⅲ、COL-Ⅳm RNA含量和蛋白表达降低,而PDGF m RNA含量升高促进其蛋白表达。结论:鳖甲煎丸水提物与醇提物对TGF-β1诱导的HSC-T6细胞增殖均有一定的抑制作用,但其抑制作用表现有一定差异;同时均可抑制胶原COL-Ⅲ、COL-Ⅳ的合成;对PDGF表达调控亦有所不同。; 付玲珠屠珏凌云郑婷盛云杰张永生; 关键词：鳖甲煎丸水提物醇提物

不同的人癌裸鼠移植瘤模型中磷脂酶A2的表达被引量：2: 2019年; 目的观察磷脂酶A2(PLA2)在不同的人癌裸小鼠移植瘤模型中的蛋白表达及特征。方法分别采用肺癌、鼻咽癌、肝癌、胰腺癌、胃癌、结肠癌、食管癌和卵巢癌肿瘤细胞株构建裸小鼠皮下移植瘤模型,待肿瘤生长至瘤体积达1 cm3后,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测肿瘤组织、正常组织及血清中4种主要类型PLA2(cPLA2、sPLA2、iPLA2和lp-PLA2)的蛋白表达,并以正常裸小鼠血清作对照。结果在呼吸系统、消化系统和生殖系统的8种人肿瘤细胞裸小鼠移植瘤模型中,肿瘤组织cPLA2、sPLA2、lp-PLA2的蛋白表达均显著或极显著高于正常组织(P<0.05,P<0.01),肿瘤组织iPLA2的蛋白表达均高于正常组织,除人结直肠癌细胞HT-29移植瘤模型外,均呈现极显著性差异(P<0.01)。8种移植瘤模型中,荷瘤小鼠血清中4种类型PLA2的蛋白含量均极显著高于正常小鼠(P<0.01)。结论 4种类型PLA2在呼吸系统、消化系统和生殖系统不同的裸小鼠移植瘤模型的肿瘤组织和血清中均呈现高表达,无肿瘤类型特异性,表明磷脂酶A2可能参与肿瘤的发生、发展。; 屠珏周卫民蔡月琴凌云陈民利; 关键词：裸小鼠移植瘤模型

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