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毕赤酵母木糖还原酶定点突变改善其对双辅酶的亲和力被引量：2: 2009年; 通过毕赤酵母(Pichia stipitis)木糖还原酶(xylose reductase,XR)基因定点突变,获得NADH高亲和力的毕赤酵母木糖还原酶(PsXR),改善了辅酶不同而导致的酿酒酵母胞内氧化还原失衡.同时克隆了PsXR编码基因,通过BLAST工具进行同源性搜索,并用生物软件进行序列比对和结构分析,确定突变位点.用融合PCR方法进行定点突变,并在大肠杆菌表达系统中进行融合表达,且对表达产物进行HIS-TAG亲和纯化,分光光度法检测酶活性,计算比活力.本研究成功获得突变XR编码基因,并收集了纯化的突变蛋白.酶活性检测和比活力计算显示,3种突变酶对2种辅酶的亲和力在一定程度上都发生了变化.与未突变的PsXR相比,3种突变酶对辅酶NADPH的亲和力均显著下降,突变酶M3对辅酶NADH的亲和力未发生变化,而突变酶M1和M4对辅酶NADH的亲和力显著升高,其中突变酶M1对NADH的亲和力明显提高,对NADPH的亲和力明显下降,其活性主要依赖辅酶NADH,提示K270R位点在XR与辅酶结合中起关键作用.; 董莉莉邓小昭钟辉姚文娟于娟杨静静; 关键词：木糖木糖还原酶

H3型流感病毒血凝素空间构象模拟抗原表位及其应用: 本发明属于多肽生物技术领域，公开了H3型流感病毒血凝素空间构象模拟抗原表位及其应用。该H3型流感病毒血凝素空间构象模拟抗原表位肽的序列为SEQ ID No.1。本发明利用抗重组HA1兔血清IgG筛选噬菌体12肽库，用噬菌...; 钟辉邓小昭姚文娟董莉莉于娟储春丽刁振宇张云; 文献传递

猪囊虫DNA疫苗pPCV的生物安全性: 2008年; 以猪囊虫DNA疫苗pPCV为研究对象,其生物安全性问题。将DNA疫苗pPCV以肌注方式免疫仔猪,分别于接种后1d、7d、4周、8周分离各组织,提取组织总DNA,利用PCR技术分析了质粒DNA在各组织的分布,以及与细胞基因组整合的可能性;同时采集环境样品,PCR法分析DNA疫苗上的CMV启动子基因、抗性基因和抗原基因在环境中发生转移和扩散的可能性。结果表明,在疫苗接种后第1天几乎所有组织都能检测到质粒DNA,随着时间的延续,仅在注射部位检测到质粒的存在,并且未发现质粒DNA整合入细胞基因组以及转化环境细菌。实验结果表明肌注DNA疫苗在注射部位以外组织中很快被清除,在注射部位组织及环境细菌中均未发现整合现象,因此认为该DNA疫苗对猪体和环境都是安全的。; 姚文娟邓小昭刁振宇孔晶钟辉周宗安; 关键词：DNA疫苗生物安全性

H3型流感病毒血凝素空间构象模拟抗原表位及其应用: 本发明属于多肽生物技术领域，公开了H3型流感病毒血凝素空间构象模拟抗原表位及其应用。该H3型流感病毒血凝素空间构象模拟抗原表位肽的序列为SEQ ID No.1。本发明利用抗重组HA1兔血清IgG筛选噬菌体12肽库，用噬菌...; 钟辉邓小昭姚文娟董莉莉于娟储春丽刁振宇张云; 文献传递

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钟辉