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罗剑: 作品数：26 被引量：76H指数：5; 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>; 发文基金：国家高技术研究发展计划国家教育部博士点基金国家自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生更多>>

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化疗药物对胆管癌细胞的敏感性及PTEN蛋白表达的影响被引量：3: 2006年; 目的探讨化疗药物体外对胆管癌细胞系QBC 939作用的敏感性及对PTEN蛋白表达的影响。方法采用M TT法和流式细胞术检测常用的六种化疗药物体外对胆管癌细胞株QBC 939的敏感性,并运用W est-ern B lot法检测药物体外作用于胆管癌细胞系QBC 939后PTEN蛋白的表达。结果六种化疗药物对于胆管癌细胞的敏感性依次为5-氟脲嘧啶、丝裂霉素、长春新碱、阿霉素、顺铂、氨甲蝶呤。与对照组比较,六种化疗药物体外作用于胆管癌细胞系QBC 939 48h后,PTEN的表达量有不同程度的增高。结论化疗药物体外作用于QBC 939细胞系,可通过上调PTEN的表达最终达到抗癌的作用。; 刘民锋罗剑邹声泉; 关键词：胆管肿瘤药物评价 PTEN蛋白

p27^(kip1)基因在人胆管癌细胞化疗增敏效应中的作用被引量：4: 2006年; 目的探讨外源性p27kip1在人胆管癌细胞系QBC939中高表达对胆管癌细胞化疗敏感性的影响。方法通过携带人p27kip1基因的重组腺病毒载体Ad-p27mt转染人胆管癌细胞系QBC939。经逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot检测p27kip1在胆管癌细胞中的表达;经MTT比色法及流式细胞术检测5-氟尿嘧啶(5-FU)、丝裂霉素(MMC)、环磷酰胺(CTX)对转染p27kip1前后的QBC939细胞生长抑制及凋亡的影响。结果Ad-p27mt转染后5-FU、MMC和CTX对QBC939细胞生长抑制率,分别由转染前的41.89%、45.59%和38.91%显著增加为56.15%、55.65%和51.69%;凋亡率也由13.76%、11.76%和10.46%,明显升高为41.39%、35.94%、34.46%,差异均有显著性意义(均P<0.05)。结论p27kip1在QBC939细胞中高表达,能显著增强胆管癌细胞对化疗药物的敏感性,为基因联合化疗药物治疗胆管癌提供了参考依据。; 罗剑曹治华刘民锋左石董泾青邹声泉; 关键词：腺病毒化疗敏感性胆管癌

靶向去唾液酸糖蛋白受体多功能分子的构建及抗肝癌效应被引量：1: 2011年; 目的构建具有靶向去唾液酸糖蛋白受体、溶酶体逃逸、DNA结合的多功能融合蛋白，并对表达产物进行功能鉴定。方法合成编码Melittin的两条寡核苷酸单链（GenBank：X02007），退火形成寡核苷酸双链；双酶切含抗去唾液酸糖蛋白单链抗体（ASGPRseFv）c1基因的载体C1／plT2，0．7％低融点琼脂糖凝胶回收C1；以pSW50．Gal4为模板，通过聚合酶链反应（PCR）扩增Gal4基因；采用分子克隆技术将其定向克隆至载体pGC4C26H中，获得重组质粒C1MG／pGC4C26H；双酶切载体C1MG／pGCAC26H，胶回收片段C1MG定向克隆至载体pET-32c中，将含C1MG／pET-32c的B121单菌落1：100接种至1000mlLB肉汤培养基中培养，并通过IPTG诱导表达。表达产物用Ni“螯合柱亲和纯化，免疫印迹技术（Western blot）和免疫组织化学分析重组蛋白C1MG的抗原结合能力，溶血实验分析C1MG的生物学活性，肿瘤细胞生长抑制实验分析C1MG的DNA结合能力。结果成功构建原核表达质粒C1MG!pET．32e，并经测序证实：在大肠杆菌BL21中有效表达重组融合蛋白C1MG；表达产物以包涵体形式存在；纯化的C1MG大小为64．1kDa，浓度为0．6g／L；Westernblot结果说明C1MG能有效识别重组ASGPR，免疫组织化学结果证实C1MG能结合到鼠肝细胞表面；溶血实验显示C1MG具有裂解红细胞膜功能；肿瘤细胞生长抑制实验证实C1MG将pEBAF／tk-GAL4rec质粒有效地导入表达ASGPR的细胞中并表达TK基因，氯喹对肿瘤细胞生长抑制无明显影响。结论在大肠杆菌中成功表达和纯化得到单链抗体一蜂毒肽一酵母转录因子（C1MG）的融合蛋白，该融合蛋白至少具有以下功能：ASGPR靶向识别能力、溶酶体膜裂解功能、以及DNA特异性结合功能，提示对肝癌的靶向治疗有潜在的应用价值。; 王炜煜曹利民罗剑曾建平徐立宁易继林董家鸿; 关键词：基因治疗融合蛋白

PTEN和mTOR信号转导通路在胆管癌发展中作用的研究被引量：14: 2006年; 目的研究PI3K/PTEN/AKT/mTOR信号转导通路中mTOR和PTEN蛋白在胆管癌中的表达及其在胆管癌发生、发展中的作用。方法用免疫组织化学方法和RT-PCR法,检测胆管癌中mTOR和PTEN的表达。结果与正常组织相比,免疫组化法和RT-PCR两种方法结果均显示,胆管癌中的mTOR表达明显增加,而PTEN的表达明显下降;两者呈负相关(r=-0.8 6 2,P<0.0 1)。结论PI3K/PTEN/AKT/mTOR信号转导通路中重要的调节位点和节点PTEN在胆管癌中的表达明显降低,而mTOR的表达明显增高。提示该信号转导通路在介导胆管癌的发生、发展的过程中起重要作用。; 刘民锋罗剑余险峰唐启彬陈勇军邹声泉; 关键词：胆管肿瘤信号传导 MTOR PTEN

反义DNMT1、DNMT3b基因真核表达载体联合转染对人胆管癌细胞增殖和凋亡的影响被引量：3: 2006年; 目的观察联合转染反义DNMT1、DNMT3b基因真核表达载体对人胆管癌细胞株QBC-939的增殖能力和细胞凋亡的影响。方法分别构建反义DNMT1基因和反义DNMT3b基因真核表达载体,脂质体介导法将二者先后转染入QBC-939,经G418筛选和荧光细胞克隆挑选得到稳定转染细胞株,并用Western blot检测转染前后的蛋白表达变化;用MTT法和软琼脂克隆形成试验观察各组细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞生长周期及凋亡率的变化。结果Western blot检测证实转染反义基因能使相应蛋白表达水平降低;联合转染反义DNMT1、DNMT3b基因和单独转染反义DNMT1基因能影响QBC-939的生长曲线,使细胞增殖减慢,并以前者为甚;联合转染反义DNMT1、DNMT3b基因和单独转染反义DNMT1基因的细胞克隆形成率分别为(6.78±0.89)%和(14.86±2.13)%,明显低于未转染组;联合转染反义DNMT1、DNMT3b基因和单独转染反义DNMT1能影响QBC-939的细胞周期,使之阻滞于G1期,细胞凋亡率从(1.63±0.27)%分别增加到(18.47±1.46)%和(6.19±0.78)%;在上述效应检测中,单独转染反义DNMT3b基因实验组对QBC-939细胞的生长无明显影响。结论通过联合转染反义DNMT1和DNMT3b基因真核表达载体,能抑制胆管癌细胞的生长和增殖,并促进凋亡的发生,其效果明显优于单独转染DNMT1反义基因;在DNA甲基化的过程中,DNMT1起着主要的作用,DNMT3b扮演着协同的角色,二者通过甲基化途径对胆管癌的发生发挥作用。; 左石邹声泉刘民锋董泾青郭伟罗剑徐立宁; 关键词：DNMT1基因胆管癌

缝隙连接蛋白43对双自杀基因系统旁观者效应的影响: 2006年; 目的观察双自杀基因胞嘧啶脱氨酶基因(CD)和单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(HSV-tk)对胆管癌细胞的抑制作用以及转染缝隙连接蛋白43(Cx43)基因对旁观者效应的影响。方法四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定双自杀基因系统作用下和/或Cx43基因转染后胆管癌QBC939细胞的细胞抑制率及旁观者效应。RT-PCR检测双自杀基因和Cx43基因的表达。Westernblot检测Cx43蛋白的表达。结果CD和tk基因在QBC939/CD+tk细胞和QBC939/CD+tk+Cx43细胞中获得稳定表达。mRNA和蛋白水平均显示转染Cx43基因的QBC939/CD+tk+Cx43细胞的Cx43的表达量明显增加。双自杀基因系统对QBC939/CD+tk+Cx43细胞组的抑制作用较QBC939/CD+tk细胞组高。结论双自杀基因系统对胆管癌细胞有明显的抑制作用,Cx43基因的导入可明显增强旁观者效应,提高对肿瘤细胞的抑制作用。; 董泾青刘茂玲罗剑刘民峰邹声泉; 关键词：缝隙连接蛋白43 自杀基因旁观者效应胆管肿瘤基因疗法

跨膜结合蛋白occludin在血吸虫病肝硬化小鼠结肠上皮细胞中的表达及其意义: 2010年; 目的:探讨跨膜结合蛋白occludin在血吸虫病肝硬化小鼠结肠上皮细胞中的表达变化及其意义。方法:将40只健康小鼠随机分成对照组(N组)和模型组(M组)各20只,M组采用腹部敷贴法制作血吸虫病模型;造模后120 d处死动物,用鲎试验法测定门静脉血内毒素水平;免疫组化和半定量Western印迹方法测定结肠上皮紧密连接蛋白occludin的表达;透射电镜观察结肠上皮细胞的超微结构。结果:M组门静脉血内毒素水平高于N组(P<0.01);M组结肠上皮occludin蛋白的表达水平低于N组(P<0.01);两者之间呈显著正相关。结论:血吸虫病肝硬化可发生肠源性内毒素易位、内毒素血症,可能与紧密连接蛋白occludin表达下降和紧密连接蛋白结构异常有关。; 李岽健杨镇乌剑利王超罗剑; 关键词：血吸虫病肝硬化肠屏障功能 OCCLUDIN蛋白

G9a特异性siRNA表达载体的构建及在QBC939细胞中对G9a基因表达的影响被引量：1: 2007年; 目的构建特异性组蛋白甲基转移酶G9a基因的siRNA表达载体并检测QBC939细胞对G9a表达的抑制作用。方法设计、合成G9a特异性的短链寡核苷酸,经退火形成双链DNA片段.克隆到pSilencer neo^TM2.1-U6载体中,构建G9a特异性siRNA的表达载体。EcoRⅠ＋BamHⅠ和EcoRⅠ＋HindⅢ双酶切及测序鉴定重组体,并转染QBC_（939）细胞,G418筛选出稳定表达细胞株,半定量RT-PCR方法和Western印迹法检测G9a mRNA和蛋白的表达水平。结果双酶切与测序鉴定证实成功构建了G9a-siRNA表达载体,转染人胆管癌细胞株QBC939后,在mRNA和蛋白表达水平对G9a的抑制率分别为55.2%和54.8%。结论运用pSileneer neo^TM2.1-U6载体构建的G9a-siRNA表达载体可有效抑制G9a在胆管癌细胞株QBC939中的表达。; 陈勇军罗剑郑建伟陈波王剑明邹声泉; 关键词：胆管肿瘤基因组蛋白甲基转移酶 SIRNA

反义DNA甲基化酶3b基因片断真核表达载体的构建及鉴定: 2005年; 目的构建反义DNA甲基化酶3b(DNM T 3b)基因片断真核表达载体,为研究DNM T 3b基因功能提供工具。方法根据DNM T 3b基因cDNA序列中编码序列设计PCR引物,在上下游引物5′端分别添加X baⅠ和K pnⅠ酶切位点,RT-PCR从胆管癌细胞QBC-939中获得485bp的DNA片断;将该片断反向插入真核表达载体pcDNA 3.1(+)的多克隆位点,构建反义DNM T 3b基因片断真核表达载体,并用PCR、酶切法和DNA测序鉴定。结果PCR鉴定得到467bp特异条带,双酶切鉴定得到471bp片断和5.4kb载体片断,DNA测序说明插入片断序列正确。结论本研究构建的反义DNM T 3b基因片断真核表达载体可为进一步研究DNM T 3b基因功能提供实验工具。; 左石罗剑刘民锋徐立宁董泾青郭伟邹声泉; 关键词：DNMT3B 反义技术 DNA甲基化

生物蛋白胶联合大网膜包肾在门静脉高压症手术治疗中的应用: 2008年; 目的:评价医用生物蛋白胶(BFG)联合大网膜包肾(ORP)对门静脉高压症患者断流术后近期和远期疗效的影响。方法:将我院3年内(2003年11月～2006年5月)收治的118例门静脉高压症接受选择性贲门周围血管离断术(sPCDV)患者分成两组,即应用BFG联合ORP组(A组,n=72)和对照组(B组,n=46),比较两组手术后近期(一月)脾窝渗液、发热和远期上消化道再出血、肝性脑病和胃病等并发症的发生率。结果:A组手术近期脾窝渗液和发热率明显低于B组(P<0.05);A组和B组随访期间上消化道再出血率分别为1.3%和10.8%(P<0.05)、门静脉高压性胃病发生率分别为30.6%和65.2%(P<0.05);A组肝性脑病发生率与B组无明显差异(P>0.05)。结论:BFG联合ORP可有效降低选择性断流术后近期和远期并发症的发生,提高门静脉高压症患者断流术的疗效。; 王超肖亮乌剑利魏卫卫李岽健罗剑杨镇; 关键词：门静脉高压症手术治疗生物蛋白胶贲门周围血管离断术手术创伤止血作用

罗剑

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