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殷玉和: 作品数：61 被引量：64H指数：4; 供职机构：长春工业大学化学与生命科学学院更多>>; 发文基金：吉林省科技发展计划基金博士科研启动基金广东省科技计划工业攻关项目更多>>; 相关领域：生物学医药卫生农业科学轻工技术与工程更多>>

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一种犬细小病毒基因工程抗体的制备: 2019年; 本研究旨在利用HEK-293细胞系制备鼠源犬细小病毒(canine parovirus,CPV)基因工程抗体并检测其生物活性。通过抗体亚型检测试剂盒检测CPV单克隆抗体亚型;采用间接ELISA检测CPV单克隆抗体的亲和力和特异性;经RACE-PCR获得CPV单克隆抗体的可变区序列,将可变区序列与鼠源抗体恒定区序列连接;分别构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-L和pcDNA3.1(+)-H,将载体共转染HEK-293细胞,采用血凝抑制与中和试验的方法检测鼠源CPV基因工程抗体生物活性;采用HEK-293F细胞悬浮表达并用间接ELISA方法检测鼠源CPV基因工程抗体的表达量;用Protein A亲和层析柱纯化鼠源CPV基因工程抗体后进行SDS-PAGE鉴定;间接免疫荧光检测纯化后鼠源CPV基因工程抗体的活性。结果显示,CPV单克隆抗体亚型为IgG 2b,亲和力常数6个Ka平均值为1.02×10^11 L/mol,只与CPV VLPs发生反应。琼脂糖凝胶电泳结果显示,试验成功构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-L和pcDNA3.1(+)-H;HEK-293和HEK-293F细胞培养上清液血抑效价分别为1∶2^4和1∶2^6,中和试验结果显示,HEK-293和HEK-293F细胞培养上清液中和效价分别为1∶152和1∶1 290;鼠源CPV基因工程抗体在HEK-293F细胞中的表达量为5.97 mg/L,SDS-PAGE分析在55和25 ku处出现条带,表明鼠源CPV基因工程抗体成功在HEK-293F细胞中表达并纯化。间接免疫荧光检测结果表明,纯化后鼠源CPV基因工程抗体具有良好的生物活性。本研究在HEK-293F细胞中成功表达具有中和活性、纯度较高的鼠源CPV基因工程抗体,为今后CPV基因工程抗体药物的研发奠定基础。; 李希辰雷欢李雪石晶殷玉和吴丛梅; 关键词：基因工程抗体共转染

生物工程专业学生新培养模式: 2012年; 生物工程产业是目前国家重点支持的领域,新技术的快速发展也带动了生物工程成为最有前途和希望的产业。但是由于我国生物工程方面起步较晚,基础比较薄弱,对毕业生的需求没有形成规模,造成就业形势紧张。在目前情况下,我们根据对人才市场需求的跟踪和了解,改变相关的教学模式,尽力适应行业发展需要,使学生更好掌握专业知识的同时,有更好的发展前景。; 吴丛梅殷玉和高冷李东风; 关键词：生物工程

含金属硫蛋白3内置佐剂的破伤风毒素C片段重组抗原的构建及其免疫原性分析: 2025年; 将金属硫蛋白3(MT-3)基因序列与破伤风毒素C片段(HC)基因序列通过连接子进行融合,构建pET30a-MT-3-HC重组质粒,转化至大肠杆菌E.coli BL21(DE3)感受态细胞中,重组质粒经双酶切鉴定。诱导M_(3)C重组蛋白表达,经SDS-PAGE和Western blot鉴定,Ni-NTA亲和层析纯化。将PBS、HC、TT(破伤风类毒素)、M_(3)C、M_(3)C+CpG(复合佐剂)5组疫苗肌肉注射小鼠,每隔7 d进行1次免疫,共3次,定期从尾静脉采集血样。采用ELISA法测定血清中特异性IgG抗体滴度的变化,并在第28天测定抗体分型(IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3和IgM)和细胞因子(IL-4、IFN-γ)水平。结果显示,pET30a-MT-3-HC重组质粒构建成功,超声破碎诱导的细菌培养上清液中M_(3)C重组蛋白高表达,纯化后观察到单条带;ELISA结果显示,M_(3)C+CpG组特异性IgG抗体滴度在第3次免疫后14 d达到峰值,为3.54×10~5,分别是HC组、TT组和TT组的141、70和6.6倍;抗体分型分析显示,与PBS、HC和TT组相比,M_(3)C组和M_(3)C+CpG组特异性抗体分型滴度显著升高(P<0.05),其中M_(3)C组IgG1/IgG2a比值大于1,而M_(3)C+CpG组IgG1/IgG2a比值约为1;M_(3)C组和M_(3)C+CpG组血清中IFN-γ和IL-4浓度也显著高于其他试验组(P<0.05)。结果表明,含有MT-3内置佐剂和破伤风毒素C片段的抗原成功表达,并表现出较强的免疫原性,为这种重组疫苗的研制奠定了试验基础。; 张玉蝶刘冰刘冬禹郭巾玲吴丛梅殷玉和; 关键词：重组疫苗

水貂肠炎病毒VP2基因原核表达及病毒样颗粒制备被引量：4: 2021年; 试验旨在制备水貂肠炎病毒(Mink enteritis parvovirus,MEV)可溶性VP2蛋白及其病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)。优化并合成MEV VP 2基因,克隆至原核表达载体pET-30a(+),将重组质粒pET-30a-VP2与分子伴侣pTf16共同转化到宿主菌ER2566中,以不同培养温度、L-阿拉伯糖浓度和IPTG浓度进行诱导表达,收集样品进行SDS-PAGE和Western blotting分析。通过硫酸铵沉淀结合蔗糖密度梯度离心法对表达产物进行纯化,由SDS-PAGE进行鉴定,透析去除蔗糖,通过动态光散射技术(DLS)和透射电子显微镜(TEM)观察不同组装条件下VLPs的粒径和形态。用制备的MEV VLPs疫苗免疫水貂评价其免疫原性。结果显示,以2 g/L L-阿拉伯糖、0.2 mmol/L IPTG、25℃培养16 h为诱导条件时,VP2蛋白在大肠杆菌中可溶性表达,分子质量约为65 ku。经Western blotting鉴定VP2蛋白具有良好的抗原特异性。将此表达产物利用硫酸铵沉淀结合蔗糖密度梯度离心法纯化后,纯度可达90%以上。在pH 8.0,150 mmol/L NaCl的透析液中,VP2经自组装可形成与天然MEV形状和粒径相似且具有血凝特性(1∶214)的VLPs。VLPs疫苗免疫水貂21 d后,测得水貂血清中的血凝抑制(HI)抗体水平均相对最高,可达1∶211,说明该VLP疫苗有较好的免疫原性,能有效预防MEV的感染。本试验结果表明,将pET-30a-VP2与pTf16在原核表达系统中共表达,可获得具有高免疫原性的VLPs,为后期MEV VLPs疫苗的研发奠定基础。; 吴铭洁夏霖亚王蕾张宁罗国良殷玉和吴丛梅; 关键词：VP2 原核表达病毒样颗粒

异柠檬酸裂解酶肽类抑制剂结构的修饰: 2014年; 利用Fmoc固相多肽合成法,按已知异柠檬酸裂解酶抑制剂的直链肽氨基酸序列合成首尾相连的环肽抑制剂.经色谱纯化和质谱鉴定,其相对分子质量的实测值与理论值相符.抑制率实验结果表明,合成的环肽对异柠檬酸裂解酶有明显抑制作用,抑制率大于50%.采用高效液相色谱法分别检测直链肽和环肽在血浆中的半衰期,实验结果表明,环肽在血浆中的半衰期为11min,比直链肽的半衰期延长175%.; 刘志远张爱臣刘新涛关晓侠李玲玲殷玉和; 关键词：肽类抑制剂环肽

发酵诺丽果汁对高尿酸血症细胞模型的保护作用及其机制研究被引量：1: 2023年; 目的:探究发酵诺丽果汁(fermented noni(Morinda citrifolia)fruit juice,FNJ)对高尿酸血症人肾皮质近曲小管上皮细胞(Human renal proximal tubular epithelial cells,HK-2)的保护作用并阐述其机制。方法:制备诺丽果浆,果胶酶和植物乳杆菌发酵处理后获得发酵诺丽果汁。利用腺苷联合黄嘌呤氧化酶(Xanthine oxidase,XO)建立HK-2细胞高尿酸血症模型;通过CCK-8实验检测发酵诺丽果汁对HK-2细胞的细胞毒性;检测发酵诺丽果汁干预后HK-2细胞培养液上清中尿酸含量以及通过Western blot法检测细胞中尿酸盐转运蛋白1(Urate anion transporter 1,URAT1)和葡萄糖转运蛋白9(glucose transporter 9,GLUT9)的表达水平,验证发酵诺丽果汁对高尿酸血症HK-2细胞的降尿酸作用;通过检测HK-2细胞中白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)的表达水平,确定发酵诺丽果汁对高尿酸血症HK-2细胞中炎症反应的作用;通过检测HK-2细胞中磷酸化核转录因子-κB(Nuclear transcription factor kappa B,NF-κB)p-p65/p65的表达水平,验证发酵诺丽果汁对NF-κB信号通路的抗炎作用。结果:处理浓度低于60μL/mL时,发酵诺丽果汁不表现细胞毒性;发酵诺丽果汁干预后细胞培养液上清中的尿酸含量显著下降并呈剂量依赖性;发酵诺丽果汁干预组的URAT1、GLUT9表达较模型组显著降低;发酵诺丽果汁可以显著抑制高尿酸血症HK-2细胞模型中IL-1β和TNF-α的表达水平;发酵诺丽果汁可以显著抑制疾病模型中p-p65/p65的表达。结论:发酵诺丽果汁对高尿酸血症HK-2细胞起到降尿酸作用,进而通过调控NF-κB信号通路抑制了炎症反应,从而发挥保护作用。; 柳越毕樱馨殷玉和陈长武孟祥龙王梦媛王铭传陈昕莹李占东刘咸筠李皓; 关键词：高尿酸血症 HK-2细胞 NF-ΚB信号通路

一种利用大肠杆菌表达猫细小VP2蛋白自主组装病毒样颗粒的制备: 本发明属于疫苗制备技术领域，涉及一种新型猫细小病毒疫苗，公开了一种猫细小病毒VP2蛋白的编码基因，通过基因工程技术编码优化FPV VP2蛋白序列，构建重组质粒，利用大肠杆菌表达重组蛋白，并分别与四种分子伴侣共表达FPV ...; 赵林烨王博夏霖亚吴丛梅殷玉和; 文献传递

一种犬重组干扰素α及制备方法: 本发明公开了一种犬重组干扰素α，同时还提供了犬重组干扰素α的制备方法，将犬干扰素α的重组基因在大肠杆菌中进行表达，通过复性和纯化过程，获得了纯度大于98％的犬干扰素α。利用MDCK（犬肾细胞）-VSV（水泡性口炎）病毒体...; 殷玉和李莹莹刘新涛; 文献传递

异柠檬酸裂解酶肽类抑制剂的优化筛选被引量：3: 2012年; 利用噬菌体肽库筛选与计算机模拟分子对接技术,优化异柠檬酸裂解酶肽类抑制剂的筛选.先通过噬菌体肽库筛选出与异柠檬酸裂解酶(ICL)具有高亲和力的结合肽,再利用Discovery Studio 2.1模拟多肽与ICL蛋白晶体(1F8I)的分子对接,最后用Fmoc固相合成法合成多肽,并对其生物活性进行检测.实验结果表明,通过噬菌体肽库筛选得到了29条七肽序列,其中12条可与ICL蛋白晶体成功对接.体外生物活性检测结果显示,得到的12条七肽均对ICL的活性有明显抑制作用(抑制率均超过50%).; 吴丛梅赵韫慧李莹莹孙宝娲殷玉和; 关键词：噬菌体肽库分子对接

犬干扰素α制备工艺的优化被引量：1: 2012年; 根据Genbank的犬干扰素α序列,经密码子优化后,设计并合成了编码CaIFN-α蛋白的基因片段。CaIFN-α基因与pBV220温度诱导表达载体连接,转化大肠杆菌BL21。经培养、升温诱导表达,目的蛋白以包涵体的形式存在,蛋白分子量约为18000,蛋白表达量为25%。菌体经超声破碎、变性、复性后,目的蛋白纯度为69%,收率为28%;疏水层析后,目的蛋白纯度87%,收率为81%;分子筛层析后,目的蛋白纯度为96%,收率为90%。纯化的CaIFN-α蛋白的生物学比活性为3×107 IU/mg,内毒素≤10 EU/mg,符合兽用药要求。此制备工艺总产率高达20%、重现性好,适用于大规模生产。; 殷玉和李莹莹刘新涛吴丛梅; 关键词：原核表达纯化

殷玉和

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