颜冰
- 作品数：16 被引量：51H指数：4
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：北京市自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 抗人转铁蛋白受体人源抗体及其应用
- 本发明涉及抗人转铁蛋白受体人源抗体及其应用，属于分子生物学领域。抗人转铁蛋白受体人源抗体，具有序列表SEQ ID No.1所示的单链抗体(scFv)氨基酸序列。本发明的优点是：人源抗体解决了靶向抗体的免疫原性问题，使其能...
- 颜冰黄培堂赵莉霞
- 文献传递
- 转铁蛋白受体介导脑源性神经营养因子通过血脑屏障的研究
- 蛋白质,多肽等大分子脑治疗药物因不能透过血脑屏障,无法进入脑中发挥疗效.利用血脑屏障上特异性富含转铁蛋白受体这一特点,在国内首次采用基因工程方法合成扩增了抗大鼠转铁蛋白受体的单链抗体基因（ox26-scFv),在大肠杆菌...
- 颜冰
- 关键词：血脑屏障转铁蛋白受体脑源性神经营养因子药物转运
- 文献传递
- 转铁蛋白受体单链抗体与链亲和素融合基因的克隆及其在大肠杆菌中的可溶性表达被引量：4
- 2006年
- 目的:转铁蛋白受体特异性富含于血脑屏障和肿瘤细胞的表面,是当前中枢神经系统疾病和肿瘤治疗中定向转运的重要靶标。拟获得在大肠杆菌中能高效可溶表达的转铁蛋白受体单链抗体与链亲和素(SA)的重组融合蛋白。方法:根据GenBank数据库报道的SA的核苷酸序列分段合成基因,连接后经PCR获得完整的基因片段,插入pGEM-T载体中测序。将序列正确的SA基因与大鼠转铁蛋白受体单链抗体基因ox26-scFv分别插入原核表达载体pTIG-Trx中,构建重组表达克隆pTIG-Trx/scFv-SA,并在大肠杆菌中诱导表达。ELISA检测融合蛋白的生物学活性。结果:对pGEM-T/SA克隆的测序结果显示,合成的SA基因与文献报道相符。重组融合蛋白在大肠杆菌中获得了可溶性表达,约占菌体上清总蛋白量的30%;ELISA结果表明该融合蛋白具备与转铁蛋白受体和生物素的结合的双重活性。结论:有活性的重组融合蛋白的获得为构建一个通用性的以转铁蛋白受体介导的血脑屏障和肿瘤转运靶向载体打下了基础。
- 颜冰赵莉霞黄培堂
- 关键词：转铁蛋白受体单链抗体链亲和素转运
- 长链逆转录PCR的研究进展被引量：1
- 1998年
- 长链逆转录ＰＣＲ简称长链ＲＴＰＣＲ，是最近几年发展起来的一项新技术。通过采用无ＲＮａｓｅＨ活性的逆转录酶，引入具有３→５核酸外切活性的校正酶、优化缓冲液组分等方法，实现了大片段的扩增。在ＲＮＡ病毒基因组、基因作图、分离完整基因等方面的研究中发挥了重要作用。长链ＲＴＰＣＲ的原理。
- 颜冰
- 关键词：RT-PCR影响因素
- 人源汉坦病毒H8205株M基因序列分析及其分类地位的研究
- 汉坦病毒H8205株分离自中国牡丹江地区一肾综合征出血热患者的血液中,生物学和免疫学性状与76-118株差异较大.为进一步了解其分子生物学特性,该研究克隆测定了H8205株M基因全序列,并就其分类地位进行了探讨.
- 颜冰
- 关键词：汉坦病毒
- 抗转铁蛋白受体单链抗体的表达、纯化及活性测定被引量：4
- 2006年
- 根据转铁蛋白受体和转铁蛋白特异性结合的性质,利用亲和纯化的方法从胎盘中提取转铁蛋白受体。以转铁蛋白受体为抗原包被免疫管,从全合成人源噬菌体单链抗体库中筛选其抗体。对筛选到的抗体进行特异性鉴定后,将抗体基因插入表达载体pET22b(+),转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导后获得可溶性表达。HeLa细胞的免疫组化结果显示,表达的抗体可以与转铁蛋白受体结合。表达产物经Ni-NTA金属螯和层析柱纯化、脱咪唑后,从尾静脉注射小鼠。1h后,去除血液及毛细血管的干扰,在脑实质中检测到了抗体的存在,说明该抗体可以通过血脑屏障。
- 赵莉霞颜冰许龙蒋世卫张莹莹杨志新周晓巍黄培堂
- 脑药物转运载体——抗转铁蛋白受体单链抗体的克隆表达及鉴定被引量：5
- 2002年
- 为构建特异性的脑药物转运载体 ,分段合成了抗大鼠转铁蛋白受体的单链抗体基因 (Ox2 6 scfv) .经重叠PCR拼接成完整片段 ,克隆入pUC19载体中 ,测序正确后克隆到大肠杆菌表达载体pET 15b E .tag上 .IPTG诱导 ,表达产物分子量为 2 9kD ,约占菌体总蛋白量的 4 0 % .包涵体经 6mol L盐酸胍变性后 ,过SephacrylS 30 0HR分子筛柱复性蛋白 .免疫酶染色实验表明 ,该单链抗体能与转铁蛋白受体特异性结合 。
- 颜冰黄培堂
- 关键词：克隆表达单链抗体血脑屏障
- 人源汉坦病毒H8205株M基因序列分析及其分类地位的研究被引量：1
- 2000年
- 目的 :测定汉坦病毒H82 0 5株M基因全序列并对其分类地位进行探讨。方法 :从感染H82 0 5株病毒的鼠脑中提取RNA ,经RT PCR扩增M基因全序列 ,克隆到 pGEM TEasy载体中测序 ,与汉坦病毒属的各型标准株进行同源比较 ,构建系统进化树 ,并与汉滩型中已知的 7株病毒进一步比较 ,确定H82 0 5株的分类地位。结果 :H82 0 5株M基因由 36 15个核苷酸组成 ,编码1135个氨基酸 ;同源性分析显示该株病毒属于布尼亚病毒科汉坦病毒属中的汉滩型 (HTN) ,但与同型中其他毒株的亲缘关系较远。结论 :H82 0 5株是不同于已知汉滩型毒株的一个新亚型 。
- 颜冰李钟铎
- 关键词：汉坦病毒M基因
- 抗转铁蛋白受体单链抗体的可溶性表达及其对脑的靶向性研究被引量：6
- 2004年
- 分段合成大鼠抗转铁蛋白受体单链抗体基因 (ox2 6_scFv) ,经三轮PCR拼接成 794bp的完整片段。测序后构建pTIG_Trx ox2 6_scFv表达载体 ,在大肠杆菌BL2 1(DE3)中获得了可溶性表达 ,经Ni_NTA金属鏊合层析柱纯化 ,在2 9kD处可见单一条带。大鼠GH3细胞免疫组化显示 ,该单链抗体能识别并与转铁蛋白受体结合。将单链抗体尾静脉注射大鼠 ,于鼠脑组织切片上可见阳性染色 ,尤其是脑血管处着色明显 ,说明该单链抗体对脑血管具有较好的靶向作用 ,并在受体的介导下通过了血脑屏障。
- 颜冰朱恒奇黄培堂
- 关键词：转铁蛋白受体单链抗体血脑屏障可溶性表达药物转运
- 抗人转铁蛋白受体人源抗体及其应用
- 本发明涉及抗人转铁蛋白受体人源抗体及其应用，属于分子生物学领域。抗人转铁蛋白受体人源抗体，具有序列表SEQ ID No.1所示的单链抗体(scFv)氨基酸序列。本发明的优点是：人源抗体解决了靶向抗体的免疫原性问题，使其能...
- 颜冰黄培堂赵莉霞
- 文献传递
