孙庆文
- 作品数：28 被引量：96H指数：7
- 供职机构：复旦大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省科技攻关计划上海市教育委员会重点学科基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 大鼠20 α HSD基因调控序列的克隆与检测
- 2001年
- 酶切包含 2 0αHSD基因及其调控序列的λ噬菌体DNA ,获得 4.0kb的DNA大片段 ,将此片段与载体质粒连接得到重组质粒 酶切重组质粒后电泳 ,再以地高辛标记的 2 0αHSD基因的cDNA为探针进行Southern杂交
- 刘树真孙庆文石小娟毛积芳李云龙
- 关键词：地高辛标记SOUTHERN杂交
- 人骨膜细胞体外成骨分化的基因表达和功能检测被引量：3
- 2011年
- 目的探讨并鉴定骨膜细胞经骨形成蛋白7（BMP7）诱导分化为成骨细胞的基因表达和细胞功能。方法成人胫骨骨膜常规体外细胞培养法，分实验组和对照组，分别加入BMP7加成骨辅助剂和单纯成骨辅助剂进行体外培养。CCK-8法检测细胞增殖活性，第5、10、15和20天分别采用Real陆ne-PCR检测骨钙素基因表达，ELISA法检测上清液碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）、骨钙素（osteoealein，OCN）及骨桥蛋白（osteopontin，OPN）的水平，甲苯胺蓝染色检测糖胺聚糖（GAG），RealTime-PCR检测Ⅱ型胶原基因，比色法检测细胞ALP活性，ALP染色法检测ALP，VonKossa染色法检测钙结节。结果两组骨钙素基因表达及上清液ALP、骨钙素、骨桥蛋白的含量均增高，实验组与对照组差异有统计学意义（P〈0．05）。两组细胞的ALP和钙结节染色阳性率增高，实验组与对照组差异有统计学意义（P〈0．05）。甲苯胺蓝染色阳性率及Ⅱ型胶原基因表达表现为先高后低，实验组与对照组差异有统计学意义（P〈0．05）。结论骨膜细胞在BMP7诱导下体外大量增殖和分化成骨，表达出明显的成骨特异基因，并具有合成分泌成骨特异蛋白的功能；成骨化过程中，除直接分化成骨外，还存在部分细胞先经软骨形成再钙化成骨的现象；经骨膜细胞．BMP7途径在体外获取大量成骨细胞可用于组织工程的体外构骨及临床应用。
- 贝抗胜杜志坡熊英辉廖家成苏宝金吴礼杨孙庆文
- 关键词：细胞培养技术骨膜细胞成骨分化细胞功能
- 人源类溶菌酶蛋白6的功能研究及生理特性分析被引量：1
- 2018年
- 对人源类溶菌酶蛋白6（human lysozyme-like protein 6,LYZL6）在受精过程中的作用进行研究,并对重组LYZL6蛋白（recombinant LYZL6,r LYZL6）的生理特性进行分析,从而揭示其生理功能。细胞免疫荧光法确定LYZL6定位于成熟精子头部的顶体后区域,反转录PCR（RT-PCR）分析表明精子表面的LYZL6蛋白来源于睾丸和附睾的分泌,Western blot法分析表明精子获能前后表面LYZL6的量无明显改变。半透明带结合实验和精子穿透实验分析表明兔抗LYZL6血清未明显抑制人精子结合透明带,但可明显抑制精卵融合。利用毕赤酵母表达系统成功表达了r LYZL6,使用甲壳素亲和层析和凝胶过滤层析可从发酵上清中纯化到具有生物活性的r LYZL6。酶联免疫吸附法（ELISA）分析显示r LYZL6不具有透明质酸结合能力、透明质酸水解能力和自由基清除活性,但具有较强的肽聚糖结合能力和异肽酶活性。LYZL6由睾丸和附睾分泌后定位于成熟精子头部的顶体后区域,可以参与精卵融合,并具有肽聚糖结合能力和异肽酶活性,提示LYZL6可能通过多种机制参与精子功能。
- 黄鹏杜望春施尉珺饶玉良孙庆文张宁
- 关键词：顶体受精毕赤酵母
- 心肺复苏大鼠行亚低温处理后不同脑区NMDAR1表达变化
- 目的探讨亚低温对心肺复苏大鼠大脑不同脑区内NMDAR1表达的影响。方法建立心肺复苏大鼠动物模型,应用原位杂交方法观察亚低温对心肺复苏大鼠大脑顶叶皮层、颞叶皮层、海马神经元内NMDAR1表达的变化。结果亚低温组大鼠大脑顶叶...
- 孙志扬李光孙庆文黄兴华刘娜
- 关键词：亚低温不同脑区NMDAR1
- 一种5-氧代-4-亚烯基-吡唑衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用
- 本发明属于基因工程和化学领域，涉及一种5-氧代-4-亚烯基-吡唑衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用。寻找新型的低副作用抗肿瘤药物是生物医药领域的一大热点。本发明提供了小分子化合物2-{2-溴-6-甲氧基-4-[(Z)-(5-...
- 余龙张明君胡海荣孙庆文唐丽莎
- 结核分枝杆菌链霉素耐药临床分离株rrs基因突变与其耐药水平相关性研究被引量：3
- 2014年
- 研究武汉地区耐链霉素(SM)结核分枝杆菌的耐药分子机制,进一步研究阐明rrs基因突变与结核分枝杆菌耐链霉素的关系;同时探究武汉地区结核分枝杆菌"北京基因型"菌株的流行趋势,为进一步研究武汉地区耐链霉素菌株rrs基因突变与"北京基因型"的相关性奠定基础。84株结核分枝杆菌中,44株对链霉素耐药,20株耐其它药物,20株对链霉素敏感,采用PCR直接测序法分析链霉素菌株rrs基因突变情况;采用RD105缺失法鉴定84株临床分离菌株中"北京基因型"菌株。结果显示44株SM耐药菌株中,16(36.4%)株检测到rrs基因突变,其中9株1401位点A→G,6株514位点A→C突变,1株1487位点G→A突变;20株耐其它药菌株中1401位点A→G和514位点A→C突变各1株,20株敏感菌株中发现1株1029位点C→T点突变;84株临床分离菌株中有77(91.8%)株"北京基因型"菌株,7株非"北京基因型"菌株。研究表明链霉素耐药菌株rrs基因主要突变位点在514和1401位点,武汉地区"北京基因型"菌株为当地流行的结核分枝杆菌,且SM耐药菌株中突变菌株93.8%(15/16)为"北京基因型","北京基因型"菌株研究及其鉴定是有其科学价值的,值得我们重视。
- 陈高瞻芦莲雷航马峻孙战强孙庆文余晓丽张舒林
- 关键词：结核分枝杆菌链霉素耐药北京基因型
- 运动对慢性心理应激大鼠海马内皮素及其受体的影响被引量：1
- 2007年
- 目的:研究海马中内皮素(ET)及其受体(ET-R)在慢性心理应激过程中的变化和机制,探讨运动对慢性心理应激大鼠海马内皮素及其受体的影响。方法:利用雄性SD大鼠建立慢性心理应激动物模型,通过免疫组织化学和原位杂交法测定大鼠海马各区内皮素及其受体的表达。结果:慢性心理应激过程中,随着应激程度的提高,海马各区盯含量逐渐下降,ETmRNA的表达变化方向与ET一致,ET受体ETR-A含量则逐渐提高,运动可缓解以上变化趋势。结论:慢性心理应激可影响海马各区ET及其受体的表达,实验所采用的游泳运动模型可缓解慢性心理应激对海马的影响,但不能完全消除慢性心理应激的影响。
- 于新凯左群赛因贺西格孙庆文陆爱云
- 关键词：心理应激内皮素受体海马
- 成骨因子BMP7在骨膜细胞体外培养中的作用被引量：14
- 2010年
- 目的 探讨成骨因子骨形态发生蛋白（BMP7）在骨膜细胞体外培养中的诱导分化作用.方法取材于成人胫骨骨膜,常规细胞培养法行骨膜细胞体外培养,分为实验组和对照组,分别加入BMP7加成骨细胞培养辅助剂和单纯成骨细胞培养辅助剂,相差显微镜观察骨膜细胞形态特征.每组分别在第5、10、15、20天设3个样本,采用ALP试剂盒法及钙结节Von Kossa染色法分别检测成骨细胞特异性标志物ALP和钙结节的表达情况.结果 骨膜细胞在体外生长良好,实验组和对照组形成的成骨细胞增殖良好,形态一致.细胞早期呈梭形,饱满透明,立体感强;分裂期呈立方形或短柱状;后期由长梭形逐渐变成宽梭和不规则形.由BMP7诱导的骨膜细胞的成骨标志物ALP和钙结节染色阳性率明显高于对照组,有统计学意义（P＜0.01）.结论 骨膜细胞具有良好的成骨和再生能力,BMP7在体外培养中具有明显增强骨膜细胞分化为成骨细胞的作用.
- 贝抗胜孙庆文熊英辉季国庆苏宝金廖家成杜志坡吴礼杨
- 关键词：骨形态发生蛋白7骨膜细胞成骨细胞细胞培养
- 一种4－乙酰二氮烯喹啉衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用
- 本发明属于基因工程和化学领域，涉及一种4－乙酰二氮烯喹啉衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用。寻找新型的低副作用抗肿瘤药物是生物医药领域的一大热点。本发明提供了小分子化合物1－[2－(3－乙氧苯基)喹啉－4－基]－2－{[4－...
- 余龙张明君胡海荣孙庆文唐丽莎
- 人源类溶菌酶蛋白4在受精过程中的作用及酶学性质研究被引量：3
- 2018年
- 目的:对人源类溶菌酶蛋白4(LYZL4)在受精过程中的作用和重组蛋白的酶学性质进行研究,从而揭示LYZL4的生理功能。方法:细胞免疫荧光法检测LYZL4在精子细胞上的亚细胞定位,RT-PCR分析精子表面LYZL4的来源,通过精子穿透试验分析LYZL4在受精过程中的作用。构建真核重组表达载体p PIC9K-LYZL4,转化毕赤酵母GS115菌株后,甲醇诱导表达;甲壳素亲和层析和凝胶过滤层析从发酵上清中纯化重组LYZL4蛋白(rLYZL4),通过Western印迹进行验证。ELISA测定rLYZL4的透明质酸结合能力,分光光度法测定rLYZL4的胞壁质酶活性、透明质酸酶活性和自由基清除能力。结果:LYZL4免疫荧光定位于成熟精子头部的顶体膜上,RTPCR检测表明精子表面的LYZL4蛋白来源于睾丸和附睾的分泌,兔抗LYZL4多克隆抗体可明显抑制精卵结合。毕赤酵母表达系统成功表达了rLYZL4,酶活性分析显示rLYZL4无胞壁质酶和透明质酸酶活性,但能够结合透明质酸,并具有较强的自由基清除能力。结论:LYZL4由睾丸和附睾分泌后定位于成熟精子头部的顶体膜上,可在精卵结合过程中发挥作用,其还能够结合透明质酸并清除自由基,提示LYZL4可能作为一种多功能分子在精子保护及精卵结合过程中发挥作用。
- 黄鹏钱能杜望春施尉珺孙庆文张宁
- 关键词：顶体精卵结合透明质酸
