于海
- 作品数：133 被引量：349H指数：8
- 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项上海市自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学水利工程更多>>
- 表达PEDV S蛋白优势抗原区域的重组PRRSV活载体疫苗株的鉴定
- 2025年
- 猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)和猪流行性腹泻(PED)是当前对养猪业影响较大的两种重要传染病,为了开发可同时针对这两种疫病的疫苗,本研究以PRRSV HuN4-F112活疫苗株为载体,将PEDV S蛋白中可诱导产生中和抗体的抗原区域进行优化和组合,命名为SNE,利用反向遗传操作技术将其引入至HuN4-F112株基因组中,构建了含有SNE的PRRSV全长cDNA克隆pHuN4-F112-SNE,通过病毒拯救获得了重组病毒rHuN4-F112-SNE株,经过对重组病毒引入基因和表达蛋白的鉴定,证实获得的重组病毒rHuN4-F112-SNE能够正确表达PEDV S蛋白优势抗原区域,其生物学特性与亲本毒株相似。将该重组病毒连续传至30代,引入的SNE基因均能获得稳定表达,且不影响亲本毒复制和自身蛋白的表达,表明重组病毒rHuN4-F112-SNE中引入的SNE基因可稳定遗传,研究结果为后续评价rHuN4-F112-SNE作为二价基因工程活载体疫苗的有效性奠定了基础。
- 劳梦琴刘瑞琳陈鹏飞黄世静于家荣朱钧锐孙祁虞凌雪高飞姜一峰童武刘长龙李丽薇于海童光志周艳君
- 关键词：PEDVS蛋白PRRSV重组病毒
- 猪德尔塔冠状病毒N蛋白原核表达及多克隆抗体制备
- 2025年
- 猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)是一种新发的病原体,引起仔猪腹泻、脱水和呕吐等症状。本研究以PDCoV的RNA为模板,扩增PDCoV N基因,将其插入原核表达载体pColdⅠ中,构建PDCoV N-pColdⅠ质粒;通过BL21(DE3)原核表达和纯化获得高纯度的PDCoV N蛋白;免疫BALB/c小鼠,制备PDCoV N蛋白多克隆抗体。结果显示:原核表达的PDCoV N蛋白为可溶性蛋白,分子量约为40 kDa;通过ELISA、Western blot和IFA鉴定可知,本研究制备的PDCoV N多克隆抗体均具有良好的效价,可为深入开展PDCoV相关的基础和应用研究提供工具。
- 叶晨倩李智丽叶曼青秦文珍杨心雨翟雪滢郑浩童武李国新于海童光志单同领娄华孔宁
- 关键词：N蛋白原核表达多克隆抗体
- 猪源盖塔病毒的分子生物学研究进展被引量：7
- 2022年
- 盖塔病毒(GETV)属于披膜病毒科甲病毒属。GETV属于虫媒病毒,可以通过蚊虫感染低等脊椎动物。猪群感染GETV后可发生轻微症状,主要导致怀孕母猪繁殖障碍。目前,GETV在世界范围内流行较为广泛,近年来逐步在猪群中暴发,导致部分猪场经济损失严重。因此,加强对猪源GETV的病原、致病机制和疫苗的研究,对于该病的防控具有更重要的意义。本文对猪源GETV分子结构和病毒复制以及近年来研究进展进行了综述和展望。
- 朱世强王帅勇王娟姚云虞凌雪单同领周艳君童武郑浩童光志于海
- 关键词：盖塔病毒基因组结构蛋白病毒复制
- 猪源IRAV的克隆、表达及单克隆抗体的制备
- 2022年
- 干扰素调节的抗病毒基因(IRAV)是近年来被发现的一种具有抗病毒活性的新型干扰素刺激基因,其对登革热病毒的增殖具有良好的抑制作用,但目前鲜有猪源IRAV基因的研究。本研究,从PK-15细胞中克隆了IRAV全长的cDNA。猪源IRAV cDNA全长为1241 bp,其中包含858 bp的开放阅读框,编码一个大小为285个氨基酸的多肽,定位于细胞质。将猪源IRAV蛋白在BL21(DE3)中诱导表达,经纯化后免疫雌性BALB/c小鼠,最终获得5株分泌猪源IRAV单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞,分别命名为2B10、2G12、2H1、5A8和2C5。将获得的分泌性抗IRAV单克隆抗体经Western blot和间接免疫荧光试验分析后,确定该抗体可以与PK-15细胞中过表达的猪源IRAV发生特异性反应。本研究成功制备针对猪源IRAV的单克隆抗体,为后续深入研究猪源IRAV的功能奠定了基础。
- 王桦焦亚娟孔宁孙大格董苏洁陈晓勇翟焕杰童武童武于海郑浩童光志于海
- 关键词：系统发育分析单克隆抗体
- 抗猪PABPC1蛋白单克隆抗体的制备与鉴定被引量：2
- 2022年
- 细胞质聚腺苷酸结合蛋白1(PABPC1)是一种mRNA poly A结合蛋白,在维持mRNA稳定和蛋白翻译方面起着重要作用。本研究中将猪源PABPC1基因克隆并插入原核表达载体pCold-Ⅰ中,构建重组表达质粒pCold-pPABPC1。将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞并经过IPTG诱导表达重组猪PABPC1蛋白。然后,用纯化的rpPABPC1蛋白免疫BALB/c小鼠以制备PABPC1的单克隆抗体。Western blot结果表明,PABPC1单克隆抗体与PK1细胞和HEK293T细胞中的PABPC1蛋白发生了特异性反应。猪PABPC1特异性单克隆抗体为进一步研究PABPC1的功能提供了有价值的工具。
- 焦亚娟王桦孔宁孙大格董苏洁陈晓勇翟焕杰童武童武于海郑浩童光志于海
- 关键词：克隆单克隆抗体
- 一株串联表达非洲猪瘟病毒P30、P54基因重组伪狂犬病毒基因工程疫苗及其应用
- 本发明提供一株串联表达非洲猪瘟病毒P30、P54基因重组伪狂犬病毒基因工程疫苗及其应用，本研究以PRV JS‑2012‑ΔgI/gE株为基础，利用同源重组的方法，将现今国内流行的非洲猪瘟病毒的主要抗原蛋白(P30、P54...
- 童武周艳君童光志包玮玲高飞郑浩李国新于海单同领姜一峰虞凌雪刘长龙李丽薇孔宁
- PRRSV Nsp4蛋白酶活性分析及活性中心的鉴定
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒是单股正链不分节段的RNA病毒,基因组大小约为15kb。PRRSV非结构蛋白Nsp4具有3C样丝氨酸蛋白酶活性,是参与病毒多聚蛋白前体加工的主要蛋白酶。随着新生多聚蛋白前体中的Nsp1和Nsp2的迅...
- 许傲天周艳君李国新于海闫丽萍童光志
- 关键词：PRRSV酶活性
- 文献传递
- 表达GM-CSF重组PRRSV弱毒疫苗株及其制备方法和应用
- 本发明公开了一种猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒疫苗株，该疫苗株包含猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒疫苗株HuN4-F112的基因组核酸，在该HuN4-F112基因组的ORF1b和ORF2a之间插入有GM-CSF序列，该GM-CSF...
- 童光志虞凌雪周艳君姜一峰童武于海李国新高飞
- 欧洲类禽H1N1亚型猪流感病毒HA蛋白单克隆抗体的制备
- 引言猪流感（Swine Influenza,SI）是由正粘病毒科A型流感病毒属的猪流感病毒（Swine Influenza virus,SIV）引起的一种猪急性传染性呼吸道疾病。H1N1亚型SIV根据其基因片段的起源不同...
- 汪琪张鹏王帅勇姚云朱世强单同领虞凌雪童武周艳君李国新郑浩童光志于海
- 关键词：猪流感病毒单克隆抗体
- 乙型脑炎病毒基因组cDNA克隆在宿主菌中不稳定因子的初步研究
- 为了探求乙型脑炎病毒基因组cDNA克隆在宿主茵中不稳定遗传的影响因子,本研究以猪源JEV HEN0701株基因组片段1 bp～2913 bp为研究对象,分析基因组原核启动子和相关毒力基因在不稳定遗传中的作用.在5'端,分...
- 郑旭晨郑浩郭亦非刘飞梁超童武单同领于海童光志
- 关键词：基因克隆
- 文献传递
