汪芳
- 作品数：2 被引量：8H指数：2
- 供职机构：厦门大学生命科学学院更多>>
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- 相关领域：生物学更多>>
- α-银环蛇毒素同工毒素基因的克隆和表达被引量：7
- 2005年
- α银环蛇毒素是存在于银环蛇蛇毒中的一种长链神经毒素,能与神经递质受体特异性结合,因此它不仅是神经信号传导机制研究的重要分子探针,更具有开发治疗某些神经性疾病新型药物的可能性。用SMART技术,反转录合成银环蛇毒腺cDNA,克隆并测定了α银环蛇毒素基因,得到14种mRNA序列;进而将其中一种新的α银环蛇毒素基因亚克隆到原核表达载体pQE30a和pGEX4T1中,在大肠杆菌中通过IPTG诱导表达,其中带有GST融合蛋白的重组质粒αBgTX(P22A31)/pGEX4T1在BL21菌株中得到高效表达,表达量占菌总蛋白的30%,可溶形式存在的融合蛋白大于25%。
- 汪芳王义权
- 关键词：Α-银环蛇毒素基因克隆原核表达CDNA序列
- 重组α-银环蛇毒素P22-A31的原核表达及功能分析被引量：5
- 2005年
- α-银环蛇毒素在神经科学研究以及在临床和制药上有重要作用,为获得大量的α-银环蛇毒素,我们用已构建的pGEX-BgTX(P22-A31)质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,并用谷胱甘肽Sepharose FF纯化GST-α-银环蛇毒素融合蛋白,再用凝血酶切掉融合标签谷胱苷肽转移酶(Glutathione S-transferase,GST),得到了较纯的重组α-银环蛇毒素同工毒素,得率约为1.225mg/L。用重组α-银环蛇毒素制备多克隆抗体,经ELISA和Western杂交鉴定后可知重组α-银环蛇毒素与天然α-银环蛇毒素的抗原性一致。小鼠毒性试验表明,重组α-银环蛇毒素同工毒素的半致死剂量LD50为1.598mg/kg,约为天然α-银环蛇毒素的1/5。小鼠化学法镇痛试验显示,重组α-银环蛇毒素有一定的镇痛药效,1/4LD50剂量的镇痛百分率为55.2%,1/8LD50剂量的镇痛百分率为20.5%,在外周镇痛作用中呈一定的量效关系。
- 林鲁萍汪芳章晓波王义权
- 关键词：蛇毒基因表达
