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李自安: 作品数：42 被引量：55H指数：4; 供职机构：成都军区昆明总医院更多>>; 发文基金：国家科技支撑计划云南省科技厅科研基金云南省科技计划项目更多>>; 相关领域：医药卫生生物学机械工程更多>>

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胎儿肌肉来源细胞的分离及其成肌分化研究: 2015年; 目的观察胎儿肌肉来源细胞(f MDC)体外成肌分化能力以及在mdx鼠体内再生抗肌营养不良蛋白。方法使用含10%新生牛血清的DMEM/F12培养液,采用预贴壁方法从胎儿肌肉组织中分离f MDC。采用免疫染色鉴定肌肉特异标志的表达。肌内注射f MDC到6.5 Gy照射3 d后的mdx小鼠股直肌,1个月后采用免疫荧光染色法和RT-PCR方法检测人抗肌营养不良蛋白和基因的表达。结果采用预贴壁方法可从胎儿肌肉组织中分离到贴壁生长、梭型的f MDC。可在f MDC的一些长纤维细胞包浆中检测到MHC的表达,在一些细胞胞核中检测到成肌素的表达。可在注射f MDC的mdx小鼠肌肉中检测到人抗肌营养不良蛋白和基因的表达。结论 f MDC中存在MHC和成肌素的阳性表达,注射f MDC到照射过的mdx小鼠体内可以再生抗肌营养不良蛋白表达。; 庞荣清李自安王强杨建勇朱慧何洁朱向情; 关键词：DUCHENNE型肌营养不良动物模型

体外传代对版纳微型猪骨髓间充质干细胞绿色荧光蛋白表达的影响被引量：5: 2016年; 目的通过分离扩增版纳微型猪骨髓间充质干细胞(BMSCs)观察传代对慢病毒转染的绿色荧光蛋白(GFP)表达的影响。方法采集4月龄版纳微型猪的骨髓,在DMEM/F12培养液中分离间充质干细胞(MSCs),并根据其形态学、抗原标志表达和分化潜能给予鉴定。MSCs与GFP慢病毒载体共培养,荧光显微镜观察GFP的表达,流式细胞仪检测传代后MSCs GFP表达率的变化。标记后传代至1、2、3、4代细胞间比较用非参数检验。结果采用直接培养骨髓,可以分离到高表达CD13、CD29、CD90、CD105的MSCs,并可诱导分化为脂肪、骨和软骨细胞。MSCs与携带GFP的慢病毒载体共培养3天即可观察到GFP的表达,最佳转染复数(MOI)值为50,最佳共培养时间为6 d。传代后MSCs GFP表达率呈下降趋势[1代转染率(42.3±2.25)%、2代转染率(41.6±2.65)%、3代转染率(41.4±3.75)%和4代转染率(38.2±4.75)%],但传至4代GFP表达率的变化差异无统计学意义(P>0.05)。结论采用含有10%胎牛血清的DMEM/F12培养液可以从版纳微型猪骨髓中分离到MSCs,GFP慢病毒转染是标记MSCs的有效方法,连续传代4代不会显著影响GFP的表达。; 余璞龙海霍金龙王强李自安王金祥刘菊芬潘兴华庞荣清; 关键词：骨髓间质干细胞细胞培养技术生物学标记

人脐带间充质干细胞对胶质瘤细胞株U87上皮间质转化及皮下荷瘤能力的影响被引量：3: 2016年; 目的研究人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)体外模型中对胶质瘤细胞株U87荷瘤能力及其上皮间质转化(EMT)的影响及其可能机制。方法建立裸鼠皮下荷瘤模型,观察hUCMSCs与U87共培养组和U87单独荷瘤组皮下荷瘤能力的差别,免疫组化检测EMT相关基因组织表达水平,Western Blot检测EMT相关蛋白MMP2,MMP7,MMP9,E-cadherin(E-cad),N-cadherin(N-cad)和Vimentin(VIM)表达情况,q PCR检测EMT相关基因(mmp2,mmp7,mmp9,E-cad,N-cad和vimentin)转录水平。Transwell和Matrigel分别检测hUCMSCs对U87转移能力的影响,两组间比较拟采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果皮下荷瘤结果提示hUCMSCs与U87共培养组皮下荷瘤率高于U87单独荷瘤组,且肿瘤体积较大,RT-PCR结果提示:共培养组和单独培养组相比,E-cad水平下调,N-cad和VIM上调,且基质金属蛋白酶家族MMP2,MMP7,MMP9也有不同程度上调。Western blot结果提示:在蛋白水平共培养组和单独培养组相比,E-cad水平下调2.1倍,N-cad和VIM上调1.0倍,MMP9上调0.9倍;E-cad,N-cad,VIM以及MMP2变化结果与RT-PCR结果一致。免疫组化结果进一步验证hUCMSCs能促进U87表达Ki67,E-cad与N-cad低表达。Transwell和Matrigel实验结果提示hUCMSCs能够促进U87细胞的转移侵袭能力。结论 hUCMSCs能通过促进U87高表达EMT相关基因和增殖相关基因Ki67,从而促进胶质瘤细胞株U87皮下肿瘤形成并发生上皮间质转化,提示hUCMSCs临床应用中应该充分考略受试者是否是潜在胶质瘤患者。; 刘高米洋和法莲陈慧芬陆容李自安何洁赵晶潘兴华; 关键词：间质干细胞胶质瘤

自主开发神经外科手术用便携式视频显微镜: 朱兴宝杨云华魏洪林罗俊力王振洲潘险峰李自安; 自2008年06月至2014年12月，自主开发神经外科手术用便携式视频显微镜、进行视屏图像引导显微镜手术的研究，主要内容如下：1、定制强照度环形灯，改装便携式视频显微镜使之适合神经外科手术、组装神经外科手术用便携式视频显...; 关键词：; 关键词：视频显微镜

骨髓胚胎样干细胞体内重建dystrophin的表达: 目的：观察骨髓胚胎样干细胞体内再生dystrophin的可行性. 方法：采用SSP-PCR方法鉴定mdx小鼠的基因型.分离扩增人骨髓胚胎样干细胞,采用DIR标记后,注射细胞到mdx小鼠腹股沟三角皮下,采用活体成...; 庞荣清王强杨建勇朱光旭李自安何洁朱向情阮光萍潘兴华; 关键词：DUCHENNE型肌营养不良抗肌萎缩蛋白蛋白表达; 文献传递

人脐带间充质干细胞对猕猴糖尿病治疗效果的研究被引量：4: 2017年; 目的通过用人脐带间充质干细胞(huMSCs)治疗猕猴糖尿病模型观察其血糖的变化。方法猕猴9只,分为对照组3只和模型组6只,模型组通过高糖高脂饮食及静脉注射链尿佐菌素(STZ)诱导成糖尿病模型,两组间比较用t检验。12周时再分为模型对照组3只和治疗组3只,治疗组每只每周静脉回输huMSCs 1×10~6个/kg,连续3周,每周检测各组血糖变化,三组间比较用方差分析。结果两组猕猴高糖高脂饮食喂养第8周时模型组空腹血糖值[(22.00±3.00)mmol/L]与对照组[(4.75±0.20)mmol/L]相比差异有统计学意义(t=9.94,P<0.01)。40周时1只猕猴因糖尿病死亡,病理切片证实心、肝、脾、肺、肾和胰腺均有病变,符合糖尿病特征。huMSCs治疗后,3周血糖连续下降,到第4周对照组、模型组、治疗组空腹血糖分别为(4.85±0.35)mmol/L、(18.20±1.00)mmol/L、(4.09±0.50)mmol/L,3组差异有统计学意义(F=388.10,P<0.01)。两两比较结果表明对照组和模型组比较差异有统计学意义(t=24.173,P<0.01),模型组与治疗组比较差异有统计学意义(t=25.549,P=0.014)。结论 STZ联合高糖高脂饲料能成功诱导出猕猴糖尿病模型,用huMSCs能有效降低血糖,使糖尿病猕猴恢复正常血糖,方法简便。; 阮光萍刘菊芬李自安王金祥庞荣清潘兴华; 关键词：猕猴属糖尿病病理切片间质干细胞移植

兔慢性肾功能衰竭模型的建立与评价被引量：5: 2010年; 目的建立兔慢性肾功能衰竭模型,为干细胞移植治疗和相关研究奠定基础。方法普通级大耳白兔随机分为正常对照组和单侧输尿管结扎(unilateral ureteral obstruction,UUO)组。UUO组于输尿管结扎后2、4、6、8周进行血生化肾功能指标检测,并取肾组织观察肾脏病理学改变,通过SPECT动态观察肾小球滤过率的变化,采用免疫组织化学方法观察肾组织转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达情况。结果①UUO组术后第2周,出现明显的血肌酐升高,尿素氮术后第8周开始升高(P<0.01)。②UUO组术后第4周,肾脏组织出现了早期间质纤维化的病理改变,术后第8周肾小球开始出现硬化,间质纤维化明显,皮质明显变薄。术后第12周,肾小球硬化比例增加,肾小管玻璃样变性,间质纤维化进一步加重(P<0.05)。③SPECT动态观察肾小球滤过率,UUO组第4周GFR值比正常对照组降低,到第8周时,GFR值进一步下降,结扎侧肾脏功能降低甚至丧失。④免疫组织化学染色显示,TGF-β1在术后第4、8、12周均明显增强,并且各时间点表达均有显著差异(P<0.05)。结论单侧输尿管结扎法成功制作比较稳定的慢性肾功能不全模型,UUO后第8周符合肾脏间质纤维化模型标准。; 周敬潘兴华庞荣清魏洪林周平蔡学敏李自安; 关键词：单侧输尿管结扎肾间质纤维化

新生猕猴UCMSC的制备、鉴定及对老年猕猴自发DM的治疗作用被引量：1: 2018年; 目的探讨新生猕猴脐带间充质干细胞(UCMSC)对老年猕猴自发性糖尿病(DM)的治疗作用。方法利用组织贴壁法获得猕猴UCMSC,流式检测UCMSC的免疫表型,进行体外分化能力分析。将UCMSC进行e GFP标记后,经静脉输入24周岁的自发DM猕猴体内。分别在UCMSC输入前和输入后1个月,测定DM猕猴血清葡萄糖(Glu)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、血清胰岛素(INS)、血清C-肽(C-P)含量,比较输入前后的变化。结果建立猕猴UCMSC分离、培养方法,并获得UCMSC,猕猴UCMSC高表达CD44和CD29,不表达CD34和CD45,可被诱导分化为软骨、骨、脂肪、胰岛样细胞。UCMSC输入到自发DM老年猕猴体内后,血清Glu、TG、TC水平降低,而INS、C-P水平升高。结论成功分离扩增新生猕候UCMSC,该细胞对老年猕猴自发DM有一定治疗作用。; 朱向情王强蔡学敏李自安庞荣清魏玲潘兴华; 关键词：猕猴脐带间充质干细胞老年糖尿病

山羊胎肝内定位注射不同体积间充质干细胞对胎羊发育的影响被引量：2: 2018年; 目的探索山羊胎肝内定位注射不同体积间充质干细胞(MSC)对胎羊发育的影响。方法以B超探查10只疑似怀孕的母山羊,观察胎羊数量、胎羊性别,确定胎肝位置。怀孕约3个月时,在B超引导下穿刺至胎肝,注射不同体积和不同数量的雄性山羊骨髓MSC悬液到胎肝实质区域,精心护理并观察穿刺母羊是否流产。结果借助B超探查10只疑似怀孕母羊中的6只怀孕,可以发现胎心跳动和胎肝血流并确定胎肝的位置,在B超引导下能够准确注射MSC悬液至胎肝实质区域,注射1 ml MSC悬液,不会引起流产,安全可行;而注射同等细胞数量的4 ml MSC悬液,则导致穿刺山羊流产。结论 B超显影可确诊山羊怀孕和确定胎肝位置,胎肝内注射1 m山羊骨髓MSC悬液不会导致胎羊流产,MSC数量不变而体积增加至4 ml时易导致胎羊流产。; 黄小昆龙海苏锡雄苏锡雄李自安杨艾梅王强李自安王金祥余璞庞荣清王强; 关键词：超声引导定位注射山羊

Notch1基因沉默抑制骨髓源性脂肪祖细胞向成熟脂肪细胞分化: 2016年; 目的探讨Notch1对骨髓源性脂肪祖细胞（BMAPCs）向脂肪细胞分化的影响。方法无菌取sD大鼠股、胫骨骨髓制作细胞悬液，差速贴壁法培养，流式分析检测细胞表面标志表达；实时荧光定量聚合酶链式反应（real-timeqPCR）检测脂肪相关基因和Notch信号分子表达。Notch1基因沉默实验分为空载体组和Notch1小RNA干扰组。Westernblotting检测干扰效率；STEMPRO Adipogenesis Differentiation Kit行细胞成脂诱导。结果BMAPCs表达CD34、CD44、CD45及CD90，且表达6种脂肪相关基因及Notch信号分子；成脂诱导促进Notch1mRNA表达（P〈0．01）；Notch1小RNA干扰抑制Notch1蛋白表达（P〈0．05）。Notch1小RNA干扰组的Cebpa、Lpl和Ppqγ、Slc2a4与Fabp4 mRNA表达均较对照显著降低，而pread1mRNA表达显著增加（P〈0．05-P〈0．01）；Notch小RNA干扰显著抑制脂肪细胞百分率（P〈0．05）。结论Notch1基因沉默抑制BMAPCs向成熟脂肪细胞分化。; 王金祥王小华白盈盈周芳蔡学敏刘菊芬李自安余争平朱光旭潘兴华

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