项金忠
- 作品数：5 被引量：11H指数：2
- 供职机构：北京生物制品研究所更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 乙型肝炎病毒表面抗原中蛋白基因在昆虫细胞中的表达及其初步鉴定被引量：8
- 1997年
- 从乙肝阳性人血清中克隆HBV含前s区表面抗原基因（PreSZ＋S），将其插入到杆状病毒转移质粒PVL1393中，并与昆虫病毒ACNPVDNA共转染Sf9昆虫细胞，筛选出重组病毒。用乙肝放免（RIA）试剂盒及EIAPreS2－Ag检测试剂盒检测重组病毒感染的Sf9细胞，表明细胞中有HBsAg及PreS2－Ag存在。将重组病毒感染的细胞免疫小鼠，在小鼠血清中能检测到anti-HBsAg及anti-PreS2抗体。
- 尚继军项金忠谢云张国强冯素英张鹏飞
- 关键词：乙型肝炎病毒表面抗原昆虫细胞蛋白基因
- HCV核心蛋白在昆虫细胞中的表达及其免疫学特性的初步评价
- 1996年
- 通过逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）从丙肝患者的血清中分离出编码完整ＨＣＶ核心蛋白（Ｃ区）的ｃＤＮＡ片段，并将其克隆到杆状病毒转移质粒中。重组转移质粒ＤＮＡ与线性的杆状病毒ＤＮＡ共转染Ｓｆ９昆虫细胞，经蚀斑筛选获得了带编码全部核心蛋白基因的重组杆状病毒。重组病毒感染细胞后表达ＨＣＶ核心蛋白，其分子量的为２０ｋＤ。免疫印染和酶联免疫实验表明，此重组蛋白能被人ＨＣＶ阳性血清所识别。动物实验表明此重组蛋白能诱导小鼠产生特异性抗体。
- 项金忠郭亮张鹏飞
- 关键词：丙型肝炎病毒核心蛋白昆虫细胞免疫学特性
- HIV 外膜糖蛋白 gp120 和 gp41 在昆虫细胞中表达及其免疫学特性的评价被引量：2
- 1997年
- 将编码完整ｇｐ１２０和完整ｇｐ４１的基因分别克隆到杆状病毒转移质粒中。使用重组转移质粒与野生杆状病毒（ＡｃＮＰＶ）ＤＮＡ共转染Ｓｆ９昆虫细胞，经挑选获得分别带有编码ｇｐ１２０和ｇｐ４１基因的重组杆状病毒。重组杆状病毒感染Ｓｆ９细胞后在细胞中分别表达了ＨＩＶ外膜糖蛋白ｇｐ１２０和ｇｐ４１。其重组蛋白的分子量分别为１２０×１０３和４１×１０３。此重组糖蛋白在免疫荧光、免疫印染和酶联免疫实验中都能被ＨＩＶ阳性血清所识别。动物免疫实验表明此重组糖蛋白能诱导很强的特异性抗体产生。
- 董明谢云项金忠尚继军张鹏飞
- 关键词：昆虫细胞艾滋病病毒免疫性
- 百日咳毒素亚基基因的克隆与表达及其重组亚基的免疫学特性被引量：1
- 1998年
- 目的从百日咳包特杆菌ＣＳ株中克隆百日咳毒素（ＰＴ）及其各亚基的基因，并探讨在昆虫细胞中表达百日咳毒素亚基基因片段的可能性及表达产物的生物学特性。方法采用ＰＣＲ技术进行克隆，并通过限制性内切酶和Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ进行分析鉴定。利用重组杆状病毒技术，在昆虫细胞Ｓｆ９中表达各亚基基因，并通过免疫荧光实验进行分析鉴定，通过ＥＬＩＳＡ实验进行重组蛋白的免疫学特性评价。结果获得百日咳毒素及其各亚基的基因，并在昆虫细胞中表达了重组亚基。经体外聚合后的各重组亚基混合物与抗天然完整ＰＴ免疫血清的反应性和诱生特异性抗ＰＴ抗体的能力都明显高于各重组亚基单体混合物，含有Ｓ１重组亚基混合物诱生特异性抗ＰＴ抗体水平又明显高于不含Ｓ１重组亚基混合物的水平。说明百日咳毒素亚基单体仅具有很弱的诱生特异性抗ＰＴ抗体的能力，且抗完整ＰＴ的抗血清对百日咳毒素亚基单体也缺乏很好的识别作用。结论百日咳毒素诱导产生特异性抗体的能力依赖于聚合体的空间构型，而且其主要抗原决定簇位于聚合体的Ｓ１亚基上。
- 韩峰刘德铮肖詹蓉项金忠张鹏飞
- 关键词：百日咳百日咳毒素克隆
- 水痘-带状疱疹病毒糖蛋白I基因在昆虫细胞中的表达及纯化
- 2003年
- 目的 将北京水痘 带状疱疹病毒 (VZV) 84 7株克隆糖蛋白I(gpI)基因在杆状病毒 昆虫细胞表达系统中表达 ,并对其表达产物进行纯化。方法 采用PCR方法从VZVDNA中扩增gpI全基因序列 ,并将其插入杆状病毒转移质粒 pBacPAK9中 ,获得重组转移质粒pBacVZVgpI ,对pBacVZVgpI中的插入基因进行测序。重组转移质粒与线性杆状病毒BacPAK6DNA (Bsu36Idigested)共转染Sf9昆虫细胞 ,获得重组病毒BacPAK gpI。通过亲和层析纯化重组蛋白 ,并检测其抗原性。结果 PCR扩增得到 gpI基因 ,测序结果表明克隆的外源基因正确。经SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)、免疫印迹 (western blot)方法证明gpI基因在昆虫细胞中获得表达 ,表达产物在培养 72h达到高峰 ,重组蛋白的相对分子质量约为 5 80 0 0和 70 0 0 0 ,与理论值相符 ,蛋白质加工与天然蛋白类似。动物实验结果表明 ,重组蛋白具有较好的免疫原性 ,可刺激小鼠产生中和抗体。SDS PAGE检测纯化的重组蛋白 ,纯度达 80 %。纯化蛋白经western blot和ELISA检测后显示 ,具有特异的抗体结合活性。结论 应用昆虫细胞表达水痘 带状疱疹病毒 gpI基因 ,可为水痘 带状疱疹病毒抗原定量分析、糖蛋白ELISA的研制和制备亚单位疫苗提供基础。
- 郭立征卢晓燕项金忠章以浩郭存三张鹏飞
- 关键词：水痘-带状疱疹病毒昆虫细胞基因表达纯化
