高建 作品数:26 被引量:92 H指数:5 供职机构: 中国医科大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 辽宁省自然科学基金 沈阳市科技攻关计划项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 自动化与计算机技术 更多>>
BAMBI在非小细胞肺癌细胞系中的分布及表达 2009年 目的观察BAMBI在非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系中的表达分布情况,并探讨其表达与NSCLC病理分型及侵袭潜能之间的关系。方法利用免疫荧光技术检测人肺腺癌细胞系A549以及人肺巨细胞癌具有不同侵袭潜能的亚系BE1、LH7中BAMBI的分布,采用逆转录聚合酶链反应及Western印迹法检测3种细胞中BAMBI的mRNA及蛋白表达。结果BAMBImRNA在A549细胞系中的表达(0.574±0.035)显著低于BE1细胞系(0.731±0.051)及LH7细胞系(0.734±0.049,P值均<0.001),后两者间的差异无统计学意义(P=0.216)。A549细胞系中BAMBI蛋白相对含量(0.769±0.103)显著低于BE1细胞系(0.963±0.061)及LH7细胞系(0.957±0.048,P值均<0.001),后两者间的差异无统计学意义(P=0.096)。BAMBI在A549细胞膜上的染色强度较弱,且呈现颗粒状不均一性;在BE1、LH7细胞膜上的染色较强,连续且均匀一致。结论BAMBI在NSCLC中的表达定位于细胞膜上以及靠近细胞膜的细胞质中,其在肺巨细胞癌细胞中的表达高于肺腺癌细胞,且其表达高低可能与肺巨细胞癌细胞的侵袭潜能无关。 苗参 高建 赵蕾 王辉 崔泽实关键词:细胞系 非小细胞肺癌 逆转录聚合酶链反应 免疫荧光技术 WESTERN印迹法 LY294002对糖尿病肾病大鼠肾组织MCP-1与Nephrin表达的影响 被引量:1 2015年 目的研究经静脉注射PI3K抑制剂LY294002对糖尿病肾病(DN)大鼠模型肾组织单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)与肾小球足细胞跨膜蛋白(Nephrin)表达的影响。方法成年健康清洁级SD雄性大鼠30只,随机分为假手术组(10)、模型组组(10)和PI3K抑制剂(LY294002)处理组。参照Anderson's方法制作糖尿病肾病大鼠模型。采用Western blot方法检测3组大鼠肾组织MCP-1与Nephrin蛋白的表达,RT-PCR方法检测三组大鼠肾组织MCP-1 m RNA与Nephrin m RNA的表达。结果模型组肾组织MCP-1蛋白和m RNA的表达量显著高于假手术组(P<0.05),而LY294002处理组明显低于模型组(<0.05)。模型组肾组织Nephrin蛋白和m RNA的表达量显著低于假手术组(<0.05),而LY294002处理组显著高于模型组(<0.05)。结论 PI3K抑制剂LY294002能够下调糖尿病肾病大鼠肾组织MCP-1的表达,上调Nephrin的表达。 高建 房磊 吴瑕 王猛 杨健莉关键词:糖尿病肾病 LY294002 激光共聚焦显微镜观察小鼠卵母细胞及早期胚胎中微丝的分布 被引量:1 2011年 目的:观察微丝在小鼠卵细胞及早期胚胎中的分布情况,为进一步明确微丝在受精卵发育中的作用机制打下基础。方法:采用免疫荧光化学法结合激光共聚焦显微技术对卵细胞的微丝分布进行观察。结果:在小鼠MII期卵母细胞中微丝分布于卵细胞的皮质区,集中在纺锤体处。在小鼠1-细胞期受精卵中微丝集中分布于卵细胞与极体的连接处。在2-细胞期受精卵中的微丝则集中分布在卵细胞的分裂沟处。用松弛素B(CB)解聚小鼠体内受精卵的微丝,细胞形态及分裂受到严重影响。结论:微丝在小鼠卵母细胞及早期胚胎中有着独特的分布,其可能参与多种功能。 武迪迪 高建 孟峻 刘超 周末 冯晨 于秉治关键词:微丝 小鼠卵母细胞 免疫荧光技术 西咪替丁增强5-氟脲嘧啶对人胃癌细胞的生长抑制作用 被引量:1 2010年 目的观察不同浓度的西咪替丁、5-氟脲嘧啶(5-Fu)单用或联合应用对人胃癌细胞MGC-803、BGC-823生长及凋亡的影响。方法用MTT法检测西咪替丁与5-Fu联合应用对胃癌细胞MGC-803、BGC-823存活率的影响;流式细胞仪检测西咪替丁与5-Fu联合应用对胃癌细胞凋亡率的影响。结果西咪替丁与5-Fu联合应用时,西咪替丁在无毒浓度(5~50μmol/L)即可显著增强低浓度5-Fu对胃癌细胞的生长抑制作用。同时还发现,西咪替丁能增强5-Fu诱导胃癌细胞凋亡。结论西咪替丁可提高人胃癌细胞MGC-803、BGC-823对化疗药物5-Fu的敏感性,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。 刘芙蓉 张成宏 高建 李丰关键词:西咪替丁 5-氟脲嘧啶 医学实验室中离心机的应用与技术保障 被引量:5 2015年 目的:规范医学实验室离心技术的应用与仪器维护。方法:正确选择与应用离心技术,掌握相对离心力(RCF)、S值及K值等常用离心参数的运用与计算方法,合理配置离心转头与离心容器,根据材质的理化耐受性选用和处理离心容器,制定基于风险控制的操作规范、监测、维护、保养以及生物安全等系列措施,建立实验室离心机技术保障。结果:通过规范医学实验室离心技术的应用,使实验室离心机的故障率降低,工作效率得到提升。结论:保障离心机正常使用,必须坚持从实验应用到工程维护的全技术流程管理。 周末 姚璐 高建 崔泽实关键词:离心机 优化人胃癌细胞SGC-7901细胞骨架图像的激光共聚焦显微技术 2015年 目的利用激光共聚焦技术,对比三种固定液不同固定时间对胃癌细胞系SGC-7901的细胞骨架荧光染色的影响。方法选择三种常用固定液:2.5%戊二醛,4%多聚甲醛及95%乙醇,对接种24h后的SGC-7901细胞分别进行10min,20min及30min等不同时间点固定,5%BSA(含0.2%Triton X-100)封闭透膜1h,荧光抗体FITC标记的鬼笔环肽37℃避光孵育2h,DAPI室温染核15min,激光共聚焦扫描显微镜扫描,对比观察其染色结果。结果三种固定液及不同固定时间对SGC-7901细胞骨架染色效果不尽相同。95%乙醇固定后微丝之间区分不明,排列混乱,无网状结构,染色效果与固定时长无关。2.5%戊二醛固定后微丝结构完整,但层次不清晰。4%多聚甲醛固定后微丝结构完整,层次清晰,固定20min及30min微丝荧光染色清晰。结论 4%多聚甲醛固定20min对细胞骨架固定效果最好,荧光染色标记结果为后续细胞骨架功能研究优化实验方法并提供理论依据。 高建 郑倩倩 张四洋关键词:固定液 细胞骨架 胃癌 激光共聚焦 Cameleon测钙系统在H_2O_2诱导的A549细胞凋亡过程中的应用 被引量:2 2013年 观察Cameleon测钙系统在H2O2诱导的A549细胞凋亡过程中的应用,实时测定胞浆Ca2+浓度([Ca2+]i),并探讨[Ca2+]i与细胞凋亡和Pyk2磷酸化的关系。采用Ca2+指示器Cameleon YC3.6转染A549细胞,24 h后用50 mmol/L H2O2刺激细胞,激光扫描共聚集显微镜实时测定选取细胞的[Ca2+]i变化。采用Western blot检测H2O2刺激的细胞中Pyk2-tyr402磷酸化水平。采用DAPI染色试剂盒观察H2O2刺激后细胞凋亡情况。结果发现,在H2O2作用下,A549细胞胞浆内游离[Ca2+]i迅速升高,同时Pyk2-tyr402磷酸化水平显著升高(P<0.05),凋亡细胞百分比显著增加(P<0.01)。因此,H2O2促进A549细胞内Ca2+释放,可能通过活化Pyk2诱导细胞凋亡。 张四洋 于淼 高建 邱雪杉 崔泽实关键词:H2O2 CA2+ CAMELEON PYK2 细胞凋亡 Sonic hedgehog促进血管外膜成纤维细胞表型转化并发生增殖迁移 被引量:2 2009年 目的研究sonic hedgehog(shh)在血管外膜成纤维细胞增殖、迁移、表型转化中的作用。方法体外培养血管外膜成纤维细胞,免疫荧光、激光共聚焦显微成像、免疫印迹以及实时定量聚合酶链式反应检测蛋白和基因表达,Ki67、细胞生长曲线评价细胞增殖情况,划痕实验观察细胞迁移情况,α-肌动蛋白评价细胞表型转化情况。结果shh在体外培养的血管外膜成纤维细胞中有表达,加入外源性的shh后(3.5μg/m1),Ki67^+的成纤维细胞增多,划痕区域的细胞覆盖率增大、成纤维细胞内出现α-肌动蛋白的表达;加入cyclopamine(40μmol/L)抑制内源性的shh信号通路后,Ki67^+的成纤维细胞减少,划痕区域的细胞覆盖率减小。结论shh能够促进成纤维细胞增殖、迁移、向肌成纤维细胞转化。 李凤贺 辛世杰 张四洋 崔泽实 高建 张建 段志泉关键词:成纤维细胞 增殖 迁移 表型转化 多层螺旋CT对上尿路梗阻性疾病的诊断价值 被引量:3 2006年 目的:探讨多层螺旋CT在上尿路梗阻性疾病诊断中的应用价值。方法:对60例上尿路梗阻性疾病的患者行多层螺旋CT平扫加增强检查。结果:60例均获得明确诊断,其中输尿管结石12例,输尿管良性狭窄7例,肾盂输尿管连接部梗阻19例,肾结核9例,巨输尿管2例,输尿管癌5例,输尿管外压迫6例。病因诊断由输尿管镜或开放手术证实。结论:对上尿路梗阻患者,尤其当超声和IVU未能明确诊断梗阻原因时,可以行多层螺旋CT平扫加增强的检查以判断梗阻原因,有助于确诊。 殷波 宋永胜 张辉 王永辉 单立平 吴斌 高建 孔垂泽关键词:泌尿系疾病 体层摄影术 X线计算机 bcl-2过表达对阿霉素诱导的膀胱癌细胞凋亡和活性氧产生的影响 被引量:17 2006年 目的探讨凋亡相关基因bcl-2过表达对阿霉素(ADR)诱导的膀胱癌细胞凋亡的影响。方法采用脂质体转染法将bcl-2基因转入膀胱癌BIU87细胞,G418筛选获得抗性亚克隆细胞株,逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)法检测bcl-2基因的表达。比较BIU87、BIU87/neo和BIU87/bcl-2细胞对ADR的敏感性。用ADR分别作用于上述细胞24 h,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞内活性氧(ROS)产生情况。结果建立分别稳定表达bcl-2基因、新霉素抗性基因(neo)的膀胱癌亚克隆细胞株BIU87/bcl-2、BIU87/neo。RT-PCR BIU87/bcl-2细胞的bcl-2 mRNA水平显著高于BIU87、BIU87/neo(P<0.01)。噻唑蓝(MTT)检测显示BIU87/bcl-2细胞对ADR的化疗敏感性明显降低(P<0.01)。ADR作用24 h后,BIU87、BIU87/neo细胞凋亡率分别为(23.75±3.72)%、(21.94±1.27)%,而BIU87/bcl-2细胞为(3.38±0.95)%(P<0.01);ROS分别为(90.45±1.96)%、(88.41±3.88)%和(77.00±3.86)%,BIU87/bcl-2细胞较前两者明显降低(P<0.01)。结论bcl-2基因能够抑制ADR诱导的膀胱癌BIU87细胞凋亡,降低细胞内ROS水平是其发挥抗凋亡作用的重要机制。 刘奔 孔垂泽 高建 时京 李振华关键词:膀胱肿瘤 BCL-2 脱噬作用