董国雄
- 作品数：36 被引量：178H指数：9
- 供职机构：扬州大学兽医学院更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金江苏省应用基础研究计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 致仔猪水肿病大肠埃希氏菌F_(107)菌毛抗原的提取及鉴定被引量：2
- 2002年
- 将致仔猪水肿病大肠埃希氏菌 10 7/ 86菌株在TSB、TSA培养基上传代 ,使之表达F10 7菌毛 ,大量收集菌毛化的细菌 ,利用热洗脱法提取菌毛抗原。粗提菌毛抗原经聚丙烯酰胺凝胶电泳可见一条约 15ku的条带 ,以染色凝胶为对照 ,将未染色凝胶上的菌毛抗原条带切下 ,进行提纯。经免疫印迹反应 ,证实其条带为F10
- 严振龙王欣之姜连连董国雄李俊宝
- 关键词：仔猪水肿病大肠埃希氏菌
- 类志贺氏菌毒素型变异体基因的克隆与鉴定被引量：6
- 1999年
- 用聚合酶链式反应(PCR)技术,从大肠杆菌TB1中扩增出类志贺氏菌毒素型变异体(SLTe)的A亚单位基因(slteA)的960bp的编码序列和B亚单位基因(slteB)的207bp的编码序列.将这两个PCR扩增产物在EcoR和BamH位点分别克隆进pUC18质粒载体,并转化到大肠杆菌TG1中,再根据限制性内切酶酶切分析筛选到含有slteA的重组质粒p18slteA和含有slteB的重组质粒p18slteB.将重组质粒p18slteA和p18slteB进行序列分析,结果表明:这两个重组质粒中的插入序列与发表的slteA和slteB是一致的。
- 成大荣徐建生董国雄李俊宝
- 关键词：仔猪水肿病基因克隆变异体
- 选择优良菌株用于仔猪水肿病疫苗的改进被引量：20
- 2002年
- 传统的仔猪水肿病疫苗 (目前市场上广泛使用 ) ,只是以致水肿病大肠杆菌菌株的O抗原为基础 ,而没有考虑水肿毒素SLT_lle抗原和菌毛F18抗原 ,其免疫效果难以提高。在仔猪水肿病疫苗的改进中 ,我们除了考虑O13 9、O18、O14 1菌体抗原之外 ,还利用PCR技术、单克隆抗体技术、电镜技术筛选了含有水肿毒素SLT_lle抗原和菌毛F18抗原的菌株。本研究中获得用于新一代仔猪水肿病疫苗的三型大肠杆菌菌株 :O13 9:SLT_lle+ :F18ab+ 、O13 8:SLT_lle+ :F18ab+ 以及O14 1:SLT_lle+ :F18ac+ 。
- 徐建生成大荣黄维嘉张迎春李俊宝董国雄
- 关键词：仔猪水肿病疫苗
- 鸡传染性喉气管炎病毒的初步鉴定及免疫剂量探索
- 1999年
- 鸡传染性喉气管炎（ＩＬＴ）是由疱疹病毒科喉气管炎病毒引起的鸡的一种急性呼吸道传染病，我国已有许多地区暴发流行，给养鸡业带来了严重威协，因此，对该病进行及时诊断和预防具有重要意义。对本病的预防，目前国内外多用致弱的活苗进行免疫，其特点是免疫性好，在发病...
- 杨鹭花徐建生李俊宝李杰锋董国雄
- 关键词：传染性喉气管炎ILTV免疫剂量
- 志贺氏菌样毒素Ⅱ型变异体单克隆抗体的制备及其应用被引量：6
- 1999年
- 应用淋巴细胞杂交瘤技术，获得１株针对志贺氏菌样毒素Ⅱ型变异体（ＳｈｉｇａｌｉｋｅｔｏｘｉｎⅡｖａｒｉａｎｔ，ＳＬＴⅡｖ）Ａ亚基单位的杂交瘤细胞，并建立了以硝酸纤维素膜为载体的菌落ＥＬＩＳＡ法。用此法检测１５株分离自猪水肿病的野毒菌株和３株产其它型ＳＬＴ的标准菌株，发现该单克隆抗体与１４株野毒菌株呈阳性反应，与产ＳＬＴⅡ的９３３Ｗ株菌有微弱交叉反应，但与产ＳＬＴⅠ和ＶＴ２的菌株（Ｈ３０和Ｅ３２５１１）均无反应。这表明该法能特异、敏感、简便、快速地鉴定产ＳＬＴⅡｖ的大肠埃希氏菌。
- 杨鹭花董国雄李俊宝
- 关键词：水肿病
- SLT-IIeA基因在原核系统中的克隆与表达及其鉴定被引量：1
- 2002年
- PCR扩增并克隆在 p UC1 8质粒中的类志贺样毒素 II型变异体 ( SL T-IIe) A亚单位基因片段切出 ,按预定阅读框架插入到原核性表达载体 p GEX-6p-1的谷胱甘肽 S-转移酶( GST)基因的下游 ,获得重组质粒 pp GEX-A。重组质粒导入大肠杆菌 BL2 1 ,用 IPTG进行诱导表达 ,通过对重组大肠杆菌的菌体裂解物的SDS-PAGE电泳分析及 Western-blot鉴定 ,表明重组菌能大量表达融合蛋白形式的 SL T-IIe A,即 SL T-IIe A蛋白与谷胱甘肽转移酶相连组成的蛋白质。本实验的研究结果 ,为进一步研究 SL T-IIe的生物学特性及研制仔猪水肿病亚单位苗提供了有效的生物材料。
- 严振龙陈雷姜连连成大荣徐建生董国雄李俊宝
- 关键词：原核系统克隆仔猪水肿瘤
- 重组融合蛋白GST SLT ⅡeB表达条件的研究被引量：18
- 1999年
- 通过在不同温度、不同诱导时间、不同异丙基硫代 β Ｄ 半乳糖苷（ＩＰＴＧ） 诱导浓度条件下，对重组大肠杆菌ＰＰＳＬＴ ⅡｅＢ 表达的谷胱甘肽 Ｓ 转移酶（ＧＳＴ） 与类志贺氏菌毒素Ⅱ型变异体Ｂ 亚单位（ＳＬＴ ⅡｅＢ） 的融合蛋白（ＧＳＴ ＳＬＴ ⅡｅＢ） 的分析，结果表明：在所试条件中，温度是影响表达的主要因素，重组大肠杆菌（ＰＰＳＬＴ ⅡｅＢ） 在２８ ℃温度条件下，可以明显表达融合蛋白ＧＳＴ ＳＬＴ ⅡｅＢ． 在ＩＰＴＧ 为１ｍｍｏｌ·Ｌ－ １ 浓度条件下，２ ｈ 的诱导即可获得明显表达． 在所试几种ＩＰＴＧ 诱导浓度下，通过５ ｈ 的诱导，均可获得明显表达．４００ ｍＬ２ＸＹＴＡ 培养基产生的融合蛋白在１ ．８ ｍｇ 以上．
- 徐建生成大荣陈雷董国雄李俊宝
- 关键词：变异体水肿病
- 类志贺毒素Ⅱ型变异体A亚单位基因缺失株的构建及表达
- 2004年
- 采用PCR方法分别对类志贺氏菌毒素A亚单位基因第 2 98～ 80 5序列、818～ 12 0 1序列进行了扩增 ,使其第 80 6～ 817序列的碱基 (编码 16 7～ 170位氨基酸 )缺失 ,并将两片段连接后克隆至质粒载体pGEX 6P 1中 ,获得了含有重组质粒 pGEX Ade的重组大肠埃希氏菌 ;经SDS PAGE以及使用特异性抗SLT ⅡeA单克隆抗体的Western blotting ,证明该重组大肠埃希氏菌在IPTG诱导条件下可表达SLT ⅡeA。
- 徐建生陈雷成大荣董国雄李俊宝
- 关键词：水肿病基因缺失
- 类志贺毒素II型变异体B亚单位单抗的制备和初步应用被引量：7
- 2003年
- 将表达类志贺毒素II型变异体B亚单位融合蛋白的菌株ppSLT-IIeB在含氨苄青霉素的2×YTA培养基中培养,至对数生长期时加入IPTG诱导,诱导的重组菌超声波裂解后,经聚丙烯酰胺凝胶电泳证明其已表达融合蛋白。用谷胱苷肽活化的Sepharose4B亲和层析柱纯化融合蛋白,测定纯化蛋白的浓度,免疫BALB/C小鼠,细胞融合后经ELISA检测,得到一株阳性杂交瘤细胞,命名为7C3-1,制备的单抗腹水ELISA效价为210,Westernblet结果表明此单抗仅与融合蛋白反应,而与载体蛋白不反应。利用此单抗检测18株水肿病菌株,发现有13株产类志贺毒素II型变异体。
- 严振龙董国雄李俊宝
- 关键词：B亚单位单克隆抗体融合蛋白水肿病
- 抗鸡大肠杆菌F11菌毛单克隆抗体的研制
- 2002年
- 将充分菌毛化的大肠杆菌C1976_79(pap +)经 4‰甲醛灭活作为免疫原免疫BALB/c小鼠 ,经淋巴细胞杂交瘤技术 ,用间接ELISA筛选获得FA1、FB11两株抗FB11菌毛单抗 ,其ELISA效价分别为 18log2 和 15log2 试管凝集价分别为 8log2 和 6log2 。免疫印迹实验表明 :两株单抗均能与鸡大肠杆菌F11菌毛反应 ,识别分子量为 18kD左右的菌毛蛋白。同时对猪病原性大肠杆菌进行检测 ,结果均无交叉反应。这表明F11菌毛是不同于K88、K99、987P、F4 1及F18等粘附素的一种大肠杆菌菌毛。
- 陈雷董国雄李俊宝徐建生成大荣
- 关键词：鸡致病性大肠杆菌单克隆抗体间接ELISA大肠杆菌病
