葛秀国
- 作品数：64 被引量：148H指数：6
- 供职机构：天津农学院更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学文化科学医药卫生更多>>
- 牛乳腺组织的冷冻保存及乳腺细胞的分离
- 2011年
- 为研究牛乳腺组织冷冻保存的可行性,将牛乳腺组织剪成直径小于0.5 mm的组织块,以含20%NBS和10%DM-SO的DMEM/F12作为冷冻保护液,按如下程序进行冷冻保存:4℃平衡1 h,-20℃平衡2 h,-40℃平衡2 h,-80℃保存。1周后,复苏牛乳腺组织,检测组织的存活率,分离培养乳腺细胞,检测细胞的存活率,观察细胞生长状态。结果显示,复苏后的牛乳腺组织可重新贴壁生长,贴壁存活率为62.5%,经消化离散,可分离培养出乳腺细胞,细胞存活率为58.5%,培养24 h后细胞存活率为46.3%。随着培养时间延长,细胞活力恢复,第1代细胞存活率为93.2%,生长状态良好。该乳腺组织的冷冻方法操作简单、方便、快捷,且很好地保持了乳腺细胞的活力,为稳定和增加乳腺细胞的来源提供了很好的途径,为进一步研究乳腺的结构和发育提供了素材。
- 葛秀国李吉霞丁向彬刘新峰郭宏
- 关键词：乳腺组织冷冻保存
- 小鼠原始生殖细胞的迁移(英文)
- 原始生殖细胞是动物功能性配子的祖细胞,起源与胚外外胚层,在早期的器官发生期迁移到原始性腺处并参与其形成。关于指导脊椎动物原始生殖细胞迁移的信号还不十分清越,但是像干细胞因子、基质细胞源因子和转移生长因子对原始生殖细胞的发...
- 葛秀国杨继建窦忠英
- 关键词：原始生殖细胞迁移细胞外基质干细胞因子
- 文献传递
- 山羊原始生殖细胞的分离与培养被引量：6
- 2005年
- 从46例山羊胎儿中分离培养原始生殖细胞,发现胎龄在25～38d的胎儿原代培养时都可获得大量的细胞集落,适合做胚胎生殖细胞的分离培养,最高传至6代。以小鼠胎儿成纤维细胞(MEF)、山羊胎儿成纤维细胞(GEF)、牛胎儿成纤维细胞(BEF)为饲养层,在不添加细胞因子情况下,都可以培养出原代山羊的胚胎生殖细胞。传代结果表明,MEF的培养效果较好,但与GEF组差异不显著(P>0.05),BEF组培养效果较差(P<0.05)。以3个不同质量浓度LIF的培养液培养山羊原始生殖细胞(PGC)结果表明,在原代培养时,效果差异不显著(P>0.05);而在传代过程中,以含LIF10ng/mL组培养效果最好,但与含LIF5ng/mL组差异不显著(P>0.05),LIF1ng/mL组培养效果较差(P<0.05)。
- 葛秀国华进联杨继建徐小明窦忠英
- 关键词：山羊原始生殖细胞胚胎干细胞
- 山羊核移植胚胎干细胞的分离培养被引量：1
- 2011年
- 比较了不同发育阶段山羊核移植胚胎分离培养胚胎干细胞(NT-ESCs)的情况。结果表明,各阶段山羊核移植胚胎均可分离出NT-ESCs,其中孵化胚的NT-ESCs克隆形成率最高(38%),与囊胚(26%)差异显著,与桑葚胚(18%)差异极显著。所分离的NT-ESCs细胞形态与正常ESCs相似,均具有碱性磷酸酶活性,可表达多能性基因Oct-4和表面标志抗原SSEA-1。
- 葛秀国李吉霞窦忠英
- 关键词：山羊核移植胚胎干细胞
- 小鼠乳腺脂肪组织体外培养
- 2013年
- 乳腺周围脂肪组织构成了乳腺生存和发育的微环境,对乳腺细胞的增殖和乳腺肿瘤/癌的生长、侵袭都具有重要影响,但目前尚未见特定关于乳腺脂肪细胞分离与培养的报道。本研究通过组织培养法培养小鼠乳腺周围脂肪组织,不但获得了成熟脂肪细胞,还获得了脂肪干细胞样细胞。该培养体系的建立简单易行,为研究脂肪组织对乳腺癌的发生、生长和侵袭的影响提供了材料,也为体外获得成熟脂肪细胞和脂肪干细胞提供了参考。
- 李吉霞王轶敏丁向彬葛秀国
- 关键词：乳腺脂肪细胞
- 无血清培养山羊内细胞团的研究被引量：1
- 2007年
- 对32只关中奶山羊进行超排处理,获得胚胎263枚,其中囊胚122枚。采用机械法、酶消化法和免疫外科法分离囊胚83枚,得到内细胞团(ICM)65个。将ICM培养于小鼠胎儿成纤维细胞饲养层上,研究含血清和无血清条件下ICM的增殖规律,并比较添加不同生长因子对ICM增殖的影响。结果表明,无血清培养时,ICM细胞增殖相对较慢,分化减少;添加LIF、bFGF、两种同时添加或均不添加对原代ESC样集落形成率的影响不显著(P>0.05),但添加10 ng/mL bFGF稍微有助于ICM增殖。山羊ICM适宜于无血清培养。
- 杨炜峰葛秀国杨春荣马晓玲华进联窦忠英
- 关键词：山羊内细胞团胚胎干细胞
- 一种牛肉质相关基因CMYA1的克隆及应用
- 本发明属于动物基因工程技术领域，具体涉及一种牛肉质相关基因CMYA1的克隆及应用，克隆的CMYA1基因mRNA序列如SEQ ID NO:1所述，其蛋白质序列如SEQ ID NO:2所述，在CMYA1基因的第2外显子105...
- 郭宏丁向彬聂永伟葛秀国刘新峰
- 绿色荧光蛋白标记牛乳腺上皮细胞生长特征和超微结构观察被引量：1
- 2013年
- 为了研究绿色荧光蛋白标记对牛乳腺上皮细胞超微结构和细胞体外生长的影响,试验分离、培养和鉴定了牛乳腺上皮细胞,对细胞进行绿色荧光蛋白标记,制作超薄切片,用透射电镜观察细胞超微结构,并进行核型分析。结果发现,牛乳腺上皮细胞呈典型的"铺路石样"单层生长,经绿色荧光蛋白标记后,细胞发出绿色荧光,且维持转染前的基本形态,可以表达广谱细胞角蛋白。在超微结构上,转染前后的牛乳腺上皮细胞均有大而明显的核仁,核膜清晰,核内聚集有异染色质,表明遗传物质稳定。细胞表面微绒毛发达,显示物质、能量或信息的交流活动较强;胞质内线粒体、内质网丰富,胞质内均含有大量的脂滴,显示细胞营养物质代谢旺盛。对GFP标记乳腺上皮细胞进行染色体核型分析显示细胞内含有60条染色体,形态正常,呈二倍体核型。试验结果表明,绿色荧光蛋白可以用于标记牛乳腺上皮细胞,不会对细胞体外生长活性和超微结构等造成明显影响。
- 李吉霞葛秀国王轶敏丁向彬郭宏
- 关键词：绿色荧光蛋白乳腺上皮细胞超微结构核型分析
- 秦川牛胎儿成纤维细胞表达A-FABP基因条件的优化和鉴定
- 2012年
- 为了向转基因牛提供过表达A-FABP的供核细胞,本研究从NCBI中查找牛脂肪型脂肪酸结合蛋白(Albert,A-FABP)基因全长cDNA序列,通过简并密码子的方法设计特异性引物。A-FABP基因通过公司合成,与pEGFP-C1载体连接形成重组质粒pEGFP-C1-A-FABP。分离获得3株秦川牛胎儿成纤维细胞(battle embryonic fibroblast,BEF),分别用DMEM和D/F12进行培养,随机选择一株细胞优化外源基因转染条件。用优化的条件转染这3株细胞,800μg/mLG-418进行筛选,挑取单克隆,获得稳定转染A-FABP的细胞株。PCR和RT-PCR检测细胞A-FABP基因的表达。结果显示,D/F12比DMEM能促进细胞的增殖(p<0.05);细胞在高糖DMEM的转染效率显著高于D/F12(p<0.05);2株胎儿成纤维细胞(1雄1雌)获得5株稳定表达的细胞,其中4株来源于雌性细胞。结果证明细胞培养基、性别和细胞系影响牛A-FABP转基因效率。
- 严兴荣杨艳红丁向彬葛秀国郭宏谢鑫崔继红李立文陈富林
- 关键词：胎儿成纤维细胞A-FABP转基因
- 胚胎生殖细胞体外培养体系研究进展被引量：1
- 2004年
- 本文简述了胚胎生殖细胞(EmbryonicGermCellsEG细胞)生物学特性,原始生殖细胞生存的维持需要有饲养层或应用条件培养基,现在大多数的培养要加入细胞因子以维持其生存和增殖。本文作一简述。
- 李吉霞葛秀国李权武
- 关键词：胚胎生殖细胞体外培养细胞因子饲养层培养基生物学特性
