李琦
- 作品数：22 被引量：85H指数：6
- 供职机构：西北工业大学生命学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖北省自然科学基金陕西省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程农业科学更多>>
- 肌肉生长抑制素前肽融合蛋白的重组表达及其抗萎缩活性的初步鉴定被引量：1
- 2013年
- 目的:探讨"白蛋白-突变型肌肉生长抑制素前肽"融合蛋白在抗肌萎缩中的作用。方法:首先将肌肉生长抑制素前肽基因第76位天冬氨酸对应的碱基突变为丙氨酸对应的碱基,获得了"突变型肌肉生长抑制素前肽"基因。再将该基因与大鼠白蛋白基因片段连接,克隆至酵母表达载体。利用酵母表达系统,重组表达"白蛋白-突变型肌肉生长抑制素前肽"融合蛋白。纯化的重组蛋白用于尾悬吊大鼠的治疗实验。结果:大鼠经过21天的尾悬吊,后肢骨骼肌发生了明显的萎缩。注射"白蛋白-突变型肌肉生长抑制素前肽"融合蛋白的尾悬吊大鼠,其后肢骨骼肌未发生萎缩。结论:重组表达的"白蛋白-突变型肌肉生长抑制素前肽"
- 黄庆生李琦杨慧靳明亮车速
- 关键词：肌肉萎缩肌肉生长抑制素融合蛋白
- 机械通气诱导自然杀伤细胞功能耗竭研究
- 2024年
- 目的机械通气(MV)是临床上常用的代替人体自主通气的医疗手段。MV可导致呼吸机引起的肺损伤(VILI)和呼吸机相关性肺炎(VAP),引起约11.11%的患者死亡。研究VILI和VAP的分子机制,对于安全使用呼吸机,减轻不良反应和减少死亡具有重要意义。自然杀伤(NK)细胞是人体重要的先天免疫细胞,可有效浸润至肺组织,发挥天然免疫作用并引发适应性免疫应答。为揭示机械通气引起的机械损伤导致免疫失调的潜在机制,作者针对MV患者的NK细胞的活性与功能开展了研究。方法采集MV患者外周血和肺泡灌洗液(BALF),检测其中NK细胞占比。随后利用柔性基底应变加载系统对人肺上皮细胞进行体外拉伸处理,研究肺上皮细胞来源外泌体的数量变化及对NK细胞功能的影响。结果MV患者外周血中NK细胞数量减少,BALF中NK细胞比例增加;张应变刺激可增加肺上皮细胞外泌体的释放水平。将NK细胞与张应变刺激的肺上皮细胞共培养后发现NK细胞趋化能力上调,促炎因子分泌增加;而细胞毒活性下降。结论张应变刺激使肺上皮细胞通过改变分泌组(secretome)介导NK细胞趋化能力上调,增加至肺部的浸润;并将NK细胞编辑为功能耗竭的表型,影响其清除病变细胞的效率;同时,上调NK细胞对炎症因子的分泌,破坏肺部免疫平衡引起VAP。
- 郭午丽舒琪陈娟萍杨慧李琦
- 关键词：外泌体免疫平衡肺上皮细胞自然杀伤细胞细胞毒活性BALF
- 荧光原位杂交技术对苦瓜的45srDNA,5srDNA的定位分析
- 荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术是一种应用非放射性荧光物质依靠核酸探针杂交原理在核中或染色体上显示DNA或RNA序列位置的方法。其基本原理是将经由荧光物质...
- 李琦李立家
- 关键词：原位杂交技术核仁组织区染色体
- 文献传递
- 蕹菜45SrDNA染色体定位和核型分析
- 2006年
- 利用荧光原位杂交技术(FISH),定位并分析了45SrDNA在蕹菜中期染色体上的位置,其杂交信号有两个,都位于第4对染色体,一个位于着丝粒附近的长臂上,信号弱;另一个位于离着丝粒较远的长臂上,信号强。核型分析的结果显示,蕹菜的核型为:2n=2x=30=26m(4SAT)+4sm,属于1A型,染色体总长度为12.93μm。
- 吴建桥李俊李琦马璐李立家
- 关键词：蕹菜FISH核型
- 原子力显微镜在染色体研究中的应用被引量：1
- 2009年
- 原子力显微镜(Atomic force microscopy,AFM)是一种具有超高分辨率的显微成像仪器,可在空气、真空和液体环境下对样本的表面结构进行实时观察。文章介绍了AFM的工作原理,AFM相对于其他种类显微镜在观察生物样本方面的显著优势,并综述了AFM在染色体研究中的应用和进展。
- 李琦郑琪丁焰马璐李立家
- 关键词：原子力显微镜染色体超微结构
- 小分子热休克蛋白的结构与功能被引量：8
- 2017年
- 小分子热休克蛋白(small heat shock protein,sHsp)是相对分子质量介于12~43 kDa的热休克蛋白家族成员,广泛存在于生物体内。根据相关报道,该类蛋白在组成上都含有α-晶状体蛋白结构域(α-crystalline domain,ACD)、N端臂和C端延伸结构。sHsp是生命体中一种重要的分子伴侣,对蛋白质的变性过程有很强的保护作用。生物体中sHsp的生物状态发生改变会引起机体发生病变,而sHsp的正常存在则可以延缓细胞衰老,并降低细胞凋亡率。现综述有关sHsp在细胞凋亡中的控制作用,以及与其相关的神经退行性疾病、癌症、白内障等多种病变的发病机制,以期为相关研究提供参考。
- 李艳张国强邵东燕师俊玲黄庆生杨慧李琦靳明亮
- 关键词：小分子热休克蛋白分子伴侣疾病
- 酵母表达肌肉生长抑制素前肽发酵工艺的优化
- 2009年
- 突变型肌肉生长抑制素前肽(MMP)在治疗肌肉萎缩症和培育多肌肉牲畜上有着广泛的应用前景。以重组表达MMP的毕赤酵母工程菌为模式,对该工程菌在30L发酵灌中培养与诱导条件进行优化,建立该表达系统大规模发酵的最佳生产条件,以期获得最短的发酵时间和最低的生产损耗。毕赤酵母发酵过程通常分为3个阶段:分批培养(基础培养)阶段、分批补料培养阶段、诱导阶段。对发酵过程的第2与第3阶段进行了优化。通过分步提高甘油流加速度:以20mL/L·h-1的速度流加5h、以30mL/L·h-1的速度流加5h、以50mL/L·h-1速度流加14h,并通入纯氧气,维持60%的溶氧度,使甘油流加阶段的时间从常规的48h缩短至24h,即只需24h即可达到常规方法48h才能达到的菌体密度。在诱导表达阶段,通过甘油与甲醇的交替流加,同时对发酵液中甲醇含量的实时监测,保持甲醇的浓度不超过0.5%的高限,使诱导的时间从常规的72h缩短至36h,而且表达量提高了约1倍。优化后,整个发酵周期从120～148h缩短至72～80h,显著提高了MMP蛋白的生产效率。
- 黄庆生李琦黄勇商澎张明杰
- 关键词：发酵毕赤酵母肌肉生长抑制素
- K562工程细胞联合IL-2扩增方案对人NK细胞扩增和活化的效果
- 2014年
- 目的:评价新建立的K562工程细胞联合IL-2扩增方案对人NK细胞扩增和活化的效果。方法:采集健康志愿者和肿瘤患者的外周血PBMC并分离NK细胞,采用前期构建的K562工程细胞(将IL-15、4-1BBL和IL-18在白血病K562细胞上进行跨膜表达获取)联合IL-2培养方案对NK细胞进行扩增和活化,以流式细胞术检测NK细胞的扩增效果和NK细胞表面受体表达水平,CCK-8法检测扩增后NK细胞对肿瘤细胞的杀伤活性和ADCC活性,CCK-8法检测在培养方案扩增末期加入TKD多肽对NK细胞的活化效果。结果:对于健康志愿者的NK细胞,新建立扩增培养方案可使NK细胞在PBMC中的比例提高至(93±3)%;使NK细胞中活化性受体NKG2D、CD94、NKp30、NKp44和NKp46的比例分别提高60%、40%、20%、40%和63%,而抑制性受体的表达变化不大;扩增后NK细胞对白血病细胞K562、肺癌细胞A549、肝癌细胞SMMU-7721和乳腺癌细胞MCF-7的杀伤活性分别提高了19%、29%、26%和28%,其ADCC活性从(33±5.6)%上升至(65±12)%;方案中增加TKD可使NK细胞的杀伤活性从(86±4)%提高至(96±2)%。对于肿瘤患者的NK细胞,新扩增方案使其在PBMC的比例提高至(90.0±8.0)%,其对K562细胞的杀伤活性提高了17%左右。结论:K562工程细胞联合IL-2扩增方案可高效扩增NK细胞,明显激活其杀伤活性,扩增和活化的NK细胞可满足临床治疗的需要。
- 叶琳洁黄庆生李琦张明杰马旭东杨慧师俊玲
- 关键词：细胞毒活性体外扩增活化性受体抑制性受体
- 模拟微重力环境下乳酸菌生物学效应的初步研究
- 据文献报道，空间环境下肠道致病微生物如大肠杆菌、变形杆菌等数量有所增加，而以双歧杆菌和乳杆菌为代表的益生菌数量则显著降低.已有研究显示，空间环境下肠道致病微生物的毒力、致病性等生物学性能均有所提高.因此，益生菌数量的减少...
- 邵东燕师俊玲商澎黄庆生杨慧靳明亮李琦
- 关键词：模拟失重乳杆菌生物学效应抑菌活性
- 人NK细胞体外高效扩增的实验研究被引量：10
- 2008年
- 目的:建立人NK细胞体外大量扩增的方法。方法:采用基因工程方法,在K562细胞上同时表达IL-15、IL-18、4-1BBL3种基因,构建特定的K562工程细胞作为刺激细胞。IL-15、IL-18基因分别与一段特殊的跨膜蛋白基因融合,4-1BBL直接跨膜表达,使这3种蛋白在K562细胞中表达后锚定于细胞膜表面。其次,以照射致死的该K562工程细胞作为刺激细胞,以人外周血单个核细胞(PBMC)为扩增培养对象,通过与IL-2的共刺激作用,使NK细胞在体外培养条件下得到大量的扩增。结果:经过21d的刺激培养后,CD56+CD3-细胞数量扩增了(520±75)倍。CD56+CD3-细胞的纯度从培养前占PBMC的7%±4%到扩增后占总细胞比例的93%±3%。PBMC中的T细胞基本上没有得到扩增,扩增后的细胞中CD3+细胞只占2%±1.2%。扩增的细胞具备了NK细胞的基本特征和生物学特性,除了CD56+CD3-外,还对扩增的NK细胞上NKG2D、NKp46、NKp44、NKp30、CD94、CD158b、CD158a、NKB1、NKAT2等标记进行了验证。细胞毒实验表明,在效应细胞∶靶细胞为5∶1时,扩增的NK细胞的杀伤率达到了95%±4%。结论:建立的NK细胞体外扩增方法,达到了较高的扩增水平,且扩增的细胞活性较好。本方法以PBMC为原始材料,能够实现NK细胞体外的大规模制备,这将为抗病毒与抗肿瘤的NK细胞免疫治疗奠定基础。
- 黄庆生李琦黄勇商澎张明杰
- 关键词：扩增自然杀伤细胞白细胞介素15白细胞介素184-1BB配体
