李生庆
- 作品数：47 被引量：82H指数：5
- 供职机构：青海省畜牧兽医科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技支撑计划国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生化学工程更多>>
- 牦牛源大肠杆菌OmpA外膜蛋白的原核表达及免疫效果评价
- 2025年
- 用生物信息学软件将本实验室分离的Escherichia coli QML2206-1(E.coli QML2206-1)株与不同菌种的外膜蛋白A(OmpA)蛋白氨基酸序列进行同源性分析,并对OmpA蛋白进行理化性质分析、跨膜结构和信号肽预测、B细胞抗原表位预测、二级和三级结构预测;将OmpA基因片段与pET-32a载体连接,构建原核表达载体,在BL21(DE3)进行原核表达并优化表达条件后用镍柱亲和纯化系统进行纯化;将纯化后的重组蛋白与弗氏佐剂充分混匀后免疫小鼠,利用ELISA方法检测小鼠特异性IgG抗体水平及小鼠血清中细胞因子CD4、CD8、IL-4的表达水平,并通过小鼠攻毒保护试验评价其免疫保护效果。结果显示,OmpA蛋白为亲水性蛋白,无跨膜结构域,二级结构主要由无规则卷曲(47.98%)和α-螺旋(29.77%)构成,有12个能与B细胞产生的抗体结合的抗原表位。经原核表达成功获得相对分子质量约为55 kDa的重组蛋白OmpA,且在37℃、IPTG浓度0.0004 mol/L诱导6 h的表达量最高。重组蛋白免疫小鼠后血清特异性IgG抗体效价最高可达1∶32000;与对照组相比,免疫小鼠血清中CD4、CD8及IL-4的表达水平均有升高。用最小致死量(minimum lethal dose,MLD)、2倍最小致死量(2MLD)攻毒后小鼠存活率分别为80%、40%。结果表明,OmpA重组蛋白具有良好的抗原性和一定的免疫保护作用。该研究为下一步基于OmpA蛋白的牦牛适用性E.coli基因工程亚单位疫苗的研制提供了技术依据。
- 章石楠韩生义石田李淑萍胡国元胡国元田嘉琪周雯雯李生庆
- 关键词：原核表达免疫保护效果
- 绵羊肠毒血症菌苗对绵羊的免疫试验被引量：1
- 2014年
- 用本室自行研制的4批次绵羊肠毒血症菌苗免疫家兔,结果0.1 mL免疫量即可达到规程要求的保护率。为了解在绵羊上的免疫效果及该疫苗的保存期,2012年在海晏县野牛沟乡用绵羊肠毒血症菌苗,选择体重在30-40 kg未注射过四联苗的绵羊进行免疫试验,现将结果报告如下。
- 范玉霞李生庆李志宁胡国元王亭亭黄荣刘怀新
- 关键词：羊肠毒血症免疫试验菌苗免疫绵羊保护率
- 绵羊肠毒血症苗的研制及预防试验被引量：1
- 2012年
- 青海省海北州祁连县默勒镇2006～2008年绵羊发生持续死亡,死亡数达6 554只,发病前,该地区每年3～4月用羊三联苗免疫羊群,但仍然有大量羊只发生死亡,经我室确诊为肠毒血症后,采用产气荚膜梭菌标准菌株C60-2（D型）,采用优化的培养基配方使该菌的产毒能力提高到3万MLD/mL,制成羊肠毒血症菌苗后2009年、2010年在青海祁连默勒地区免疫绵羊105000只，结果免疫羊群均未发生本病。为该地区羊肠毒血症的发生和流行提供了有效的菌苗，很大程度上减少了牧民的经济损失。
- 张西云范玉霞胡国元李生庆李秀萍
- 关键词：羊肠毒血症产气荚膜梭菌培养基配方死亡数标准菌株
- 几种灭鼠剂对高原鼠兔的灭鼠效果对比试验被引量：3
- 2008年
- 应用4种灭鼠剂进行杀灭高原鼠兔的对比试验,从灭效和对环境的影响以及对人畜的安全性等方面的调查,认为采用生物灭鼠剂进行草原灭鼠效果更理想。
- 祁晓梅李生庆海菊花郝向梅
- 关键词：灭鼠剂高原鼠兔灭鼠效果
- 牦犊牛腐败梭菌病的诊断被引量：2
- 2013年
- 2011年11月，青海省大通县某牛场放牧牦牛群中的牦犊牛发生以咳嗽为主要临床症状的疫病，先后共死亡9头，观将该病的发生和诊断情况介绍如下。
- 张西云李生庆胡国元范玉霞李志宁王亭亭黄荣
- 关键词：牦犊牛临床症状疫病咳嗽
- B型诺维氏梭菌产毒素主要影响因子研究被引量：1
- 2014年
- 为了掌握B型诺维氏梭菌同宝菌株（TB05）产毒特性，应用不同培养基、不同pH和不同培养时间进行最佳产毒比较试验。结果表明，该菌在含1．0％葡萄糖的VF培养基中37℃72h产毒达最高点，碳原比例及pH对本菌的生长及产毒具有较大的影响，1％葡萄糖、pH8．0—8．4最适于本菌产毒。
- 李生庆张西云范玉霞李志宁王亭亭胡国元黄荣刘怀新
- 关键词：影响因素外毒素
- 羊黑疫的病原分离及PCR诊断被引量：3
- 2015年
- 羊黑疫又称传染性坏死性肝炎,是由B型诺维梭菌感染引起的羊的一种急性高度致死性毒血症。该病特征是肝实质性坏死,绵羊、山羊均可发生。该病在国内主要依靠传统的病原分离、细菌培养、毒素测定、中和试验等方法进行确诊,这些方法虽然能准确地诊断病因,但费时、费力,为了能准确而快捷地完成本病的诊断,有必要借助分子生物学技术建立诺维梭菌的PCR诊断方法。
- 黄荣李生庆李志宁
- 关键词：病原分离PCR诊断梭菌毒血症肝片吸虫
- 绵羊肠毒血症的诊断与防治被引量：2
- 2016年
- 青海省祁连县默勒镇外日沟乡从2006年7月转入夏季草场开始发生绵羊死亡,死亡的绵羊多为当年的羔羊和2岁以内的羊,从夏季草场转入秋季草场放牧时（9月份）绵羊死亡数进入高峰期.从2007年开始,该镇另外两个村多隆、老日当村也相继发生绵羊大量死亡,至今累计死亡3 358只,据当地牧民介绍每天每家至少死亡5～7只,有的牧户家已死亡80余只,给他们带来了巨大的经济损失.发病羊群均已进行了药物驱虫工作,并正常接种过羊四联疫苗（猝疽、羔羊痢疾、快疫、肠毒血症）.
- 张西云范玉霞李生庆胡国元李志宁李秀萍王亭亭黄荣刘怀新
- 关键词：羊肠毒血症羔羊痢疾死亡数驱虫工作经济损失
- 绵羊黑疫的诊断被引量：1
- 2013年
- 该地区绵羊自2009年以来陆续发病、死亡，由于死亡羊只较多，牧户将剩余羊只全部淘汰，引进新羊，但仍陆续发生死亡。此次发病羊群共有1000只羊短期内发病死亡达190余只，造成了较大的经济损失。此羊群曾注射羊四联苗及肉毒菌苗。
- 张西云李生庆范玉霞胡国元李志宁王亭亭黄荣
- 关键词：羊黑疫发病死亡四联苗绵羊牧户
- 绵羊肠毒血症的诊断被引量：2
- 2004年
- 张西云焦付佑李生庆扎西塔王亭亭李秀萍
- 关键词：绵羊肠毒血症症状剖检变化细菌检查
