陕西省科技攻关计划(2004k14-G3)
- 作品数：1 被引量：4H指数：1
- 相关作者：刘勇康前雁田玉梅陈新林张蓬勃更多>>
- 相关机构：西安交通大学医学院第一附属医院西安交通大学更多>>
- 发文基金：陕西省科技攻关计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 以EGFP为报告基因的增强子鉴定质粒载体的构建及鉴定被引量：4
- 2007年
- 目的构建以EGFP为报告基因的增强子鉴定质粒载体,并对其进行鉴定。方法以pEGFP-N1质粒为模板,PCR法扩增获得EGFP基因片段,并将其亚克隆入PGL3-promoter质粒骨架,得到以EGFP为报告基因的增强子鉴定质粒pEGFP-enhancer。人工合成不同拷贝的缺氧反应元件(HRE)增强子序列,插入到pEGFP-enhancer多克隆位点获得重组质粒pEGFP-HRE、pEGFP-5HR,以脂质体Lipofectamine 2000转染Hela细胞,常氧与缺氧处理后以荧光显微镜及流式细胞仪观察EGFP荧光表达。结果构建的不同拷贝HRE的增强子鉴定质粒pEGFP-HRE、pEGFP-5HRE转染Hela细胞后,常氧处理绿色荧光表达无差异,缺氧处理后随HRE拷贝数增加绿色荧光表达强度增加。结论成功构建了增强子表达质粒pEGFP-enhancer,通过EGFP的表达强度可以反应增强子活性。
- 石秦东张蓬勃康前雁陈新林田玉梅刘建新刘勇
- 关键词：增强子绿色荧光蛋白缺氧反应元件HELA细胞
