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广东省自然科学基金(011766)
广东省自然科学基金(011766)
- 作品数：36 被引量：106H指数：7
- 相关作者：刘新光梁念慈陈小文梁景耀林小聪更多>>
- 相关机构：广东医学院深圳市儿童医院广东药学院更多>>
- 发文基金：广东省自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目教育部科学技术研究重点项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 小鼠蛋白激酶CK2β亚基的克隆、表达及活性测定被引量：3
- 2003年
- 通过反转录PCR从NIH 3T3小鼠成纤维细胞中获得小鼠蛋白激酶CK2 β亚基编码区cDNA ;构建其表达质粒并经测序证明其编码小鼠蛋白激酶CK2 β亚基 ,但与两种已报道的小鼠CK2 β亚基cDNA编码区序列分别存在一个碱基差异 ,与大鼠、猪、兔和人CK2 β亚基cDNA的编码区相应碱基序列则一致。将其在表达菌BL2 1(DE3)中诱导表达 ,出现一 2 6kDa分子量蛋白过度表达 ,表达蛋白占菌体总蛋白的 31 7%,但大多数以不溶形式存在。Westernblot鉴定表明 :过度表达产物能与抗人CK2 β亚基抗体发生特异性免疫反应。当CK2α和 β亚基以 1:1摩尔比混合时 ,构成性的CK2全酶显示出最大活性 ,直接表明CK2 β亚基对CK2α有激活作用。这些结果有力地证明了克隆表达的重组蛋白是小鼠蛋白激酶CK2
- 陈小文郑克勤梁景耀刘新光梁念慈
- 关键词：小鼠蛋白激酶分子克隆DNA测序免疫印迹
- 体外突变技术在研究蛋白激酶CK2中的应用被引量：1
- 2003年
- 蛋白激酶CK2是一种真核细胞中普通存在的非信使依赖性丝 /苏氨酸蛋白激酶 ,在细胞增殖和分化、信号的传导和加工、细胞凋亡等方面起重要作用。体外突变技术是在DNA重组及测序等技术的基础上发展起来的一项技术 。
- 黄功华刘新光梁念慈
- 关键词：蛋白激酶CK2信号传导
- 蛋白激酶CK2与HIV的生命周期被引量：9
- 2002年
- 蛋白激酶CK2是一种高度保守的真核细胞中普遍存在的第二信使非依赖性丝/苏氨酸蛋白激酶。CK2与HIV-1的关系十分密切,它可在HIV-1生命周期的不同阶段中发挥重要的作用。CK2的抑制剂可能在细胞水平具有一定的抗HIV-1效应。
- 李春梅刘新光梁念慈
- 关键词：蛋白激酶CK2HIV生命周期艾滋病毒艾滋病
- 黄芩甙对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制作用及其动力学分析被引量：7
- 2004年
- 背景与目的蛋白激酶CK2是一种在真核细胞中普遍存在的多功能的丝/苏氨酸蛋白激酶。在许多实体瘤、白血病细胞中CK2的活性均增高。其α及α'基因是原癌基因。CK2作为一种具有潜在抗肿瘤作用的分子靶点正日益受到重视。为了寻找肿瘤细胞内CK2的特异性抑制剂,本研究观察黄芩甙体外对重组人蛋白激酶CK2的抑制效果,并进行酶动力学分析以确定其抑制作用类型。方法利用基因工程技术进行克隆、表达和纯化,获得重组人CK2的α'及β亚基并在体外等摩尔混合构成CK2全酶,测定不同条件下CK2的活性。CK2活性通过测定转移到CK2底物上的[γ-32P]ATP的32P的放射性活度来检测。结果黄芩甙能显著抑制重组人蛋白激酶CK2的活性(IC50=2.54μmol/L)。酶动力学分析表明,黄芩甙与ATP呈非竞争性抑制CK2的活性(Ki=7.73μmol/L),与酪蛋白则呈混合性抑制CK2的活性(Ki=3.07μmol/L)。结论黄芩甙是一种较强的体外蛋白激酶CK2的抑制剂。
- 林小聪刘新光陈小文陈伟珠梁念慈
- 关键词：蛋白激酶CK2重组蛋白全酶黄芩甙酶动力学
- 酵母双杂交系统在研究蛋白激酶CK2中的应用被引量：4
- 2003年
- 酵母双杂交系统是研究蛋白质间相互作用的一种有效方法 ,蛋白激酶CK2是一种真核细胞中普遍存在的信使非依赖性丝 /苏氨酸蛋白激酶 ,在细胞增殖和分化、信号的传导和加工等方面起重要作用。
- 黄功华梁景耀刘新光梁念慈
- 关键词：蛋白激酶CK2酵母双杂交系统相互作用蛋白
- 槲皮素-7,4′-二硫酸酯钠对重组人CK2全酶的抑制作用及动力学分析被引量：4
- 2002年
- 目的 观察槲皮素 7,4′ 二硫酸酯钠 (sodiumquercetin 7,4′ disulphate ,SQDS)对重组人CK2全酶的直接作用及酶动力学机制。方法 通过测定转移到CK2底物上的 [γ 3 2 P]ATP的3 2 P放射活度检测不同条件下的重组人CK2全酶的活性。结果 重组人CK2是一种Ca2 +,cAMP和cGMP等第二信使非依赖性蛋白激酶 ,与天然CK2的性质一致。SQDS对重组人CK2全酶有很强的抑制作用 ,IC50 为 4 4μmol·L- 1 ,抑制作用大于已知CK2抑制剂DRB和A3。CK2的动力学研究表明 :SQDS与ATP和酪蛋白分别呈竞争性和非竞争性抑制作用。结论 SQDS是有效的CK2抑制剂 ,对于开发更有效的CK2抑制剂及将SQDS用于临床提供了一定的实验依据。
- 刘新光梁念慈刘文佘戟莫丽儿
- 关键词：蛋白激酶CK2全酶酶动力学
- 蛋白激酶CK2的神经生物学功能
- 2003年
- 蛋白激酶CK2是一种真核细胞中普遍存在的多功能 ,丝氨酸 /苏氨酸蛋白激酶具有高度保守性。CK2全酶由两个催化亚基 (α和 /或α′亚基 )和两个调节亚基 β所构成。α/α′亚基具有催化活性 ,β亚基主要稳定及调节CK2的活性。CK2大量存在于大脑 ,而且集中分布于神经元及其突触 ,在突触形成、突触传递、信息传递和储存、生长、发育及神经元形态发生等方面发挥着重要作用 ;CK2对海马神经细胞具有营养刺激活性 ,其磷酸化作用与大脑的记忆功能有关 ;CK2可能在某些神经系统特异性病变 (如阿尔茨海默病 )
- 林小聪刘新光
- 关键词：蛋白激酶CK2神经系统
- 七种黄酮类化合物对重组人蛋白激酶CK2全酶抑制作用的结构效应关系(英文)被引量：4
- 2009年
- 目的:观察7种黄酮类化合物对重组人蛋白激酶CK2全酶活性的影响并进行结构效应关系的分析。方法:将利用基因工程技术获得的重组人CK2α′及β亚基在体外等摩尔混合构成CK2全酶。通过测定药物作用后转移到CK2底物上的[γ-32P]ATP的32P的放射性活度,探讨黄酮类化合物对重组人CK2全酶活性的抑制作用,并采用半数效量概率单位法计算其IC50值。结果:杨梅黄酮、槲皮素、桑色素、毛地黄黄酮、莰非醇、芹菜苷配基和白杨黄素能明显抑制重组人CK2全酶活性,其IC50值分别是1.18,0.51,16.16,0.86,1.88,1.72和13.63μmol/L;其中杨梅黄酮、槲皮素、毛地黄黄酮、莰非醇和芹菜苷配基的作用效果均强于目前已知的CK2抑制剂DRB和A3;而桑色素和白杨黄素的作用效果接近于DRB。结构效应关系分析表明,C6,C3′和C4′上的-OH可能是黄酮类CK2抑制剂发挥抑制作用的药效基团;而在C3上去除1个-OH对其抑制效果基本没有影响;此外,C2′和C5′上的-OH可减弱黄酮类化合物对CK2的抑制作用。结论:黄酮类化合物对体外蛋白激酶CK2的抑制效果可能取决于其羟基的位置。
- 李春梅刘新光林小聪陈小文
- 关键词：蛋白激酶CK2全酶黄酮类化合物
- 小鼠蛋白激酶CK2α亚基的克隆、测序、表达及初步鉴定被引量：2
- 2002年
- 背景与目的:蛋白激酶CK2是一种高度保守性的真核细胞中普遍存在的丝/苏氨酸激酶,它的活性在人的许多肿瘤细胞是升高的,可作为一种癌基因起作用。为了深入进行CK2结构与功能的研究,本研究拟构建小鼠蛋白激酶CK2α亚基cDNA重组表达质粒,并进行表达和初步鉴定。方法:通过反转录PCR从NIH3T3小鼠成纤维细胞获得小鼠CK2α亚基编码区cDNA。将NdeⅠ/BamHI双酶切PCR产物连接到同样双酶切并经牛小肠碱性磷酸酶去磷酸化的表达载体pT7-7进行定向克隆。转化感受态大肠杆菌DH5α获得转化子,琼脂糖凝胶电泳初步筛选转化子,将阳性克隆进行单和双酶切分析鉴定。随机挑选4个阳性克隆进行DNA测序,将序列完全正确的重组质粒转化表达菌BL21(DE3),挑单克隆小量培养,IPTG诱导表达,Westernblot鉴定。结果:转化子的阳性筛选率为100%;限制性酶切分析结果表明,插入片段和重组质粒的大小与理论推测值相符。DNA正反向测序结果表明:从4个阳性克隆中筛选到1个PCR过程不产生突变的重组质粒,并将其质粒命名为pTMCKA。重组质粒转化表达菌经IPTG诱导后出现一分子量42kDa蛋白过度表达,Westernblot结果证明过度表达产物能与抗人CK2α亚基抗体发生特异性免疫反应。结论:重组小鼠蛋白激酶CK2α亚基的克隆表达获得成功。
- 陈小文刘新光郑克勤梁念慈
- 关键词：蛋白激酶CK2分子克隆DNA测序免疫印迹
- 酪氨酸蛋白激酶抑制剂Tyrphostin AG114对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制作用(英文)被引量：2
- 2002年
- 目的 为了观察TyrphostinAG114对重组人蛋白激酶CK2全酶的直接作用及其酶动力学机理。方法 利用基因工程克隆 ,表达和纯化获得重组人蛋白激酶CK2α和 β亚基 ,在体外等摩尔数混合构成有最大生物活性的重组CK2全酶 ,在不同条件下测定CK2的活性。CK2活性通过测定转移到CK2底物上的 [γ 32 P]ATP或 [γ 32 P]GTP的 [32 P]放射活度来检测。结果 重组人CK2是一种Ca2 +、cAMP和cGMP等第二信使非依赖性蛋白激酶 ,与天然CK2的性质一致。AG114对重组人CK2全酶具有很强的抑制作用 ,IC50 为 2 0 .8μmol·L- 1,抑制强度介于已知CK2抑制剂 5 ,6 二氯 1 β 呋喃糖苯并咪唑 (DRB)和N (2 氨乙基 ) 5 氯萘 1 硫胺 (A3)之间。AG114对重组人CK2的动力学研究表明 :它与GTP呈混合竞争性抑制作用 ,与酪蛋白呈非竞争性抑制作用。结论 AG114不仅是酪氨酸蛋白激酶的抑制剂 ,而且是一种十分有效的蛋白激酶CK2的抑制剂。
- 刘新光梁念慈
- 关键词：酪氨酸蛋白激酶抑制剂TYRPHOSTIN
