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国家科技支撑计划(2006BAD06A12)
国家科技支撑计划(2006BAD06A12) 作品数:53 被引量:290 H指数:9 相关作者: 贺英 逯忠新 高鹏程 赵萍 储岳峰 更多>> 相关机构: 中国农业科学院兰州兽医研究所 扬州大学 甘肃农业大学 更多>> 发文基金: 国家科技支撑计划 国家重点基础研究发展计划 国家科技基础性工作专项 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 医药卫生 轻工技术与工程 更多>>
猪瘟病毒急性感染后病毒载量的动态分布规律研究 针对猪瘟病毒(CSFV)和猪看家基因(ACTB)分别设计了一对引物和一条探针,建立了一套特异强、灵敏度高的CSFV相对荧光定量PCR(FQ-PCR)检测方法。对CSFV SM株感染的16头60日龄长白猪体内各主要组织器官... 刘俊 王琴 范学政 徐璐 汤波 陈蕾 黄伟关键词:CSFV 病毒载量 FQ-PCR 复合PCR鉴定胸膜肺炎放线杆菌和副猪嗜血杆菌方法的建立及初步应用 被引量:4 2009年 在已经建立的胸膜肺炎放线杆菌、副猪嗜血杆菌的单项PCR诊断方法的基础上,通过对扩增条件和引物的筛选,成功地建立了APP、HPS复合PCR诊断方法,利用一次PCR反应,即可同时扩增APP的442 bp,和HPS的1 090 bp的特异性片段,并应用于临床检测。该方法的建立对临床上进行这2种疾病的鉴别诊断和混合感染的检测都具有重要意义。 贺英 赵萍 储岳峰 高鹏程 逯忠新 赵海燕关键词:胸膜肺炎放线杆菌 副猪嗜血杆菌 复合PCR 免疫组化Envision法检测肺组织中猪圆环病毒抗原的研究 被引量:1 2009年 为了对猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)的早期诊断、临床诊断和流行病学调查提供技术支持,本试验制备了兔抗PCV2多克隆抗体,采用免疫组织化学Envision二步法对30例疑似PCV2病猪肺组织的病毒抗原进行定位、半定量检测。结果表明,试验制备的兔抗PCV2抗体具有高纯度和良好的特异性;Envision法可原位检测病猪肺组织PCV2抗原的分布,其抗原的阳性表达主要出现在肺巨噬细胞胞浆内;依据阳性细胞百分率,进行染色结果判断,检出阳性病猪16例,阳性检出率为53.37%。实验证明Envision法具有高敏感、低背景、快速简便的特点,可在兽医病理诊断中推广应用。 杨鸿 林涛 邓桦 何启盖 陈冬焕 马春全 卢玉葵关键词:ENVISION法 猪圆环病毒 布鲁菌Cycling探针荧光定量PCR检测方法的建立 被引量:2 2012年 根据布鲁菌BCSP31基因序列设计布鲁菌通用检测引物和探针,建立了布鲁菌Cycling探针荧光定量PCR检测方法。以构建的含BCSP31基因的质粒标准品10倍递进稀释为模板检测其敏感性,结果显示,本方法能检测约10个拷贝的阳性质粒,且标准曲线的线性关系良好。用本方法检测5株不同种的布鲁菌以及猪大肠杆菌K99、巴氏杆菌C48-1、猪链球菌ST171、绿脓杆菌等4株对照菌。结果显示,5株不同种的布鲁菌均出现典型的"S"型扩增曲线,4株对照菌40个循环内均无CT值出现。用本方法和B4/B5-PCR方法对来自布鲁菌病流行地区3个不同牛场的40份血样、奶样和血清样进行平行检测。结果显示,本方法和B4/B5-PCR方法的结果符合率为80.0%。B4/B5-PCR检测为阳性的27份样品经本方法检测均为阳性;B4/B5-PCR检测为阴性的13份样本,经本方法检测,其中8份呈阳性,5份为阴性。本方法的敏感性明显高于B4/B5-PCR方法。试验表明,所建立的Cycling探针荧光定量PCR方法具有敏感、特异、稳定等特点,可用于布鲁菌感染的快速检测。 许邹亮 南文龙 陆明哲 周洁 谭鹏飞 陈义平 毛开荣关键词:布鲁菌 FMDV非结构蛋白3A和3B的表达与反应活性分析 2008年 根据已测得的O/China/99口蹄疫病毒(FMDV)基因组序列,设计两对特异性表达引物,以带有O/Chi-na/99 3ABC基因片段的重组质粒pGEM-3ABC为模板,扩增得到了3A、3B基因,通过两端的BamHI和SalI酶切位点插入原核表达载体pET28a,将重组表达质粒转化宿主菌BL21,用IPTG诱导表达目的蛋白.表达产物经SDS-PAGE检测表明,3A和3B基因成功的在大肠埃希氏菌中得到了表达;通过Western blotting分析和斑点ELISA分析表明,纯化后的蛋白能与FMDV感染动物血清发生特异性反应. 付元芳 卢曾军 曹轶梅 张小丽 郭建宏 刘在新 才学鹏关键词:FMDV 活性分析 青海省部分地区猪传染性胸膜肺炎的流行病学调查研究 被引量:4 2011年 通过间接血凝检测方法对青海省部分猪场的猪传染性胸膜肺炎的流行情况进行了调查研究,研究结果表明本地区总阳性率为26.13%,其中母猪阳性率偏高。 逯忠新 贺英 高鹏程 储岳峰 赵萍 赵海燕 马利青 陆艳 蔡其刚关键词:猪传染性胸膜肺炎 流行病学调查 Development of Multi-PCR for Differentiation of Vaccine Strain and Field Isolate of Porcine Pseudorabies Virus 被引量:2 2009年 Three pairs of primer were designed for amplification of porcine pseudorabies virus (PRV) gB, gE, and TK gene by multiplex PCR (multi-PCR) in order to differentiate vaccine strains from field isolates. Three specific bands were obtained respectively at the expected size, 427 bp (gB gene), 298 bp (gEgene), and 208 bp (TKgene), Then four different gene-deleted vaccines of PRV were detected by multi-PCR. One ex- pected specific band was observed in one of samples, while two bands in the others. As shown by the detection results, the multi-PCR has high sensitivity and specificity and should be applied in pathogen diagnosis and epidemiological investigation in the future. 蔺芳 尹双辉 尚佑军 刘艳红 刘湘涛猪伪狂犬病病毒JSZ株的分离鉴定及其病毒核酸的分布规律 被引量:11 2009年 用猪伪狂犬病病毒(PRV)特异性引物对江苏省某猪场疑似猪伪狂犬病的病死仔猪组织病料进行了PCR鉴定,结果可扩增到特异性的条带。用该病料接种PK-15细胞,24 h即出现细胞病变,PCR和间接免疫荧光试验结果均证明所分离病毒为PRV。用该PRV分离株接种兔后出现奇痒症状并麻痹致死;接种仔猪后出现持续发热,肌肉震颤等症状。通过对自然感染PRV病死仔猪脏器进行PCR检测,发现PRV在仔猪体内广泛分布,其中以脾的检出率最高,可达100%;对人工感染猪的直肠和鼻腔棉拭样品进行PCR检测,发现病猪排毒最长可达13 d。证实,该分离株为猪伪狂犬病强毒株,脾为病毒检测的首选靶器官。 郭丽静 赵瑜 张伟 崔盟 吴艳涛 高崧 彭大新 刘秀梵关键词:猪伪狂犬病病毒 排毒 猪胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌复合PCR检测方法的建立 被引量:6 2008年 目的建立可以同时检测猪胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的快速而可靠的PCR检测方法。方法和结果根据胸膜肺炎放线杆菌的Apx-VIA基因序列、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的16SrRNA基因序列设计5条引物。猪胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌模板的PCR扩增产物大小分别为342bp,485bp和1258bp。复合PCR对1~12型猪胸膜肺炎放线杆菌标准株,6株多杀性巴氏杆菌标准株,1~15型副猪嗜血杆菌以及25株经生化鉴定确认为上述三种细菌的分离株的基因组DNA作为模板进行检测,均获得预期大小的扩增产物。以猪放线杆菌、吲哚放线杆菌等14种常见细菌作为阴性对照进行PCR检测,结果仅有支气管败血波氏杆菌产生了可以和上述三个特异性条带明显区分的PCR产物。复合PCR针对胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的敏感性分别为14pg、34pg和37pg。结论本研究建立的复合PCR特异性好,敏感性高,可以用于猪胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的快速检测。 朱吕昌 陈义平 李明义 郭玉广 马爽 周洁关键词:猪胸膜肺炎放线杆菌 多杀性巴氏杆菌 副猪嗜血杆菌 复合PCR Asia1型口蹄疫病毒受体结合位点多样性 被引量:5 2011年 【目的】口蹄疫病毒(Foot-and-Mouth Disease Virus,FMDV)通过结构蛋白VP1 G-H环上高度保守的精氨酸-甘氨酸-天门冬氨酸(Arg-Gly-Asp,RGD)基序与整联蛋白结合起始病毒的感染,但FMDV是RNA病毒,在环境条件变化时,FMDV能够以非RGD的途径起始病毒的感染。为了研究FMDV Asia1/JS/China/05田间舌皮毒经两种不同的途径短期传代后细胞受体结合基序RGD的变异。【方法】采用RT-PCR方法扩增FMDV Asia1/JS/China/05田间毒、田间毒的乳鼠适应毒第四代(MF4)和接种田间毒的牛同居感染的猪水泡病料适应细胞的第八代毒(PBF8)结构蛋白VP1基因,并对不同病毒VP1基因的PCR产物测序和cDNA文库测序。【结果】以含RGD受体结合基序为优势的田间毒在乳鼠上短期传代后出现了含精氨酸-丝氨酸-天门冬氨酸(Arg-Ser-Asp,RSD)和RGD受体结合基序的混合种群,而同居感染后的细胞传代病毒种群则以含精氨酸-天门冬氨酸-天门冬氨酸(Arg-Asp-Asp,RDD)受体结合基序为优势种群。【结论】发现了含RGD受体结合位点为优势的FMDV种群,经不同的宿主短期传代后产了含RSD或RDD受体结合基序的优势种群,该发现不仅增加了保守基序RGD发生替换的FMDV变异株的数量,而且为FMDV的细胞识别和宿主嗜性的改变等进一步研究奠定了物质基础。 李平花 白兴文 孙普 卢曾军 曹伟军 吴润 殷宏 刘在新关键词:口蹄疫病毒 多样性