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大口黑鲈锥体虫TaqMan探针荧光定量PCR检测方法的建立: 2025年; 锥体虫病在珠三角大口黑鲈(Micropterus salmoides)养殖中频发,造成巨大经济损失.为开展大口黑鲈锥体虫(Trypanosoma micropterus)早期诊断,该研究以大口黑鲈锥体虫18S rDNA保守序列作为靶基因设计引物和TaqMan探针,建立了一种荧光定量检测方法,并对该方法的灵敏性、重复性和特异性进行评估.结果表明,该方法的循环阈值(Ct值)与锥体虫靶基因的质粒浓度(1.27×10^(1)~1.27×10^(8) copies/μL)呈显著的线性回归函数关系,R2为0.999 1,其扩增效率为99.9%.该方法最低可检测13 copies靶基因,具有稳定的重复性和良好的特异性,组内和组间变异系数均小于2%,对池塘多种生物和细菌均无扩增反应.通过检测发病大口黑鲈倍比稀释后的血液,可检测到1.4个锥体虫,其Ct值为31.38.综上,该方法具有良好的特异性、重复性和灵敏性,可为该病早期诊断和流行病学调查提供了技术支撑.; 徐锐龙孙龑鑫何晓茵吴文豪苏友禄江飚; 关键词：TAQMAN探针

一种尼帕病毒Taqman探针荧光定量PCR检测试剂盒及其应用: 本发明公开了一种尼帕病毒Taqman探针荧光定量PCR检测试剂盒及其应用，通过设计尼帕病毒的特异性引物及对应的荧光探针，之后利用已知病毒基因组序列选取病毒的保守基因序列，利用基因克隆技术构建含有该保守基因序列的标准重组质...; 朱启运杨鹏飞徐帅凌东奇柳煊博

猪腺病毒3型TaqMan探针荧光定量PCR检测方法建立: 2025年; 猪腺病毒3型(PAdV-3)导致猪肠道性疾病。为能够快速特异检测该病毒,本研究根据PAdV-3 hexon基因序列保守区设计特异性引物和探针,成功建立了一种针对PAdV-3的TaqMan探针实时荧光定量PCR(qPCR)检测方法。结果显示:该方法特异性好,可鉴别PAdV-3与其他猪病病毒,最低检测限为10 copies/μL,敏感性高于常规PCR 100倍。该检测方法的建立为PAdV-3的快速诊断提供了重要的分子诊断工具。; 解佳刘静宜刘静宜郭伟强俞赵荣陈鸿军陈鸿军; 关键词：TAQMAN探针实时荧光定量PCR

盖塔病毒TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立: 2025年; 盖塔病毒(GETV)是一种在我国广泛分布的虫媒病毒,可通过蚊虫传播感染人畜,导致猪、马等动物出现发热、出疹及淋巴结肿大等症状,可致妊娠母猪流产或死胎。目前尚无特效治疗方式。本研究根据GenBank公布的盖塔病毒nsP1基因序列,设计3组引物探针,筛选出最佳的引物探针,建立一种灵敏度高、特异性强的针对盖塔病毒的TaqMan探针实时荧光定量RTPCR检测方法。对该方法进行敏感性、特异性、重复性试验和临床样品检测。标准曲线Ct值与相应质粒标准品浓度存在良好的线性关系,相关系数(R^(2))为0.9989;对含GETV基因的重组质粒pCDNA3.1-nsP1体外转录RNA进行敏感性试验,最低检出限达10 copies,是普通RT-PCR方法的1000倍,敏感性高;与PRRSV、CSFV与PEDV的核酸不发生交叉反应,特异性好;变异系数小于2%,重复性好。本研究建立了一种敏感、特异的GETV检测方法,对GETV的快速诊断具有重要意义。; 顾志刚郭洁真王子涵孙彤陈鸿军孙竹筠陈丹清; 关键词：盖塔病毒 TAQMAN探针实时荧光定量RT-PCR

检测虾肝肠胞虫的Taqman探针qPCR检测引物组和应用: 本发明公开一种检测虾肝肠胞虫的Taqman探针qPCR检测引物组和应用。本发明以EHP的半胱氨酸脱硫酶基因序列为新靶标序列，设计一对特异引物和Taqman探针。通过分别提取待检虾肝胰腺或虾塘水样或虾塘泥样总DNA，定量后...; 张其中陈维丰

一种亨德拉病毒Taqman探针荧光定量PCR检测试剂盒及其应用: 本发明公开了一种亨德拉病毒Taqman探针荧光定量PCR检测试剂盒及其应用，通过设计亨德拉病毒的特异性引物及对应的荧光探针，之后利用已知病毒基因组序列选取病毒的保守基因序列，利用基因克隆技术构建含有该保守基因序列的标准重...; 朱启运杨鹏飞徐帅凌东奇柳煊博

检测多子小瓜虫的Taqman探针qPCR检测引物组和应用: 本发明公开一种检测多子小瓜虫的Taqman探针qPCR检测引物组和应用，属于寄生虫检测领域。本发明根据多子小瓜虫的靶标分子组织蛋白酶L基因序列，设计一对特异引物和一条探针。该引物和探针对多子小瓜虫亲缘关系较近的四膜虫、草...; 张其中郭书权付耀武

基于LNA-TaqMan探针实时荧光定量PCR检测技术的天山雪莲掺伪研究: 2025年; 目的:采用锁核酸(LNA)-TaqMan实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)技术建立一种高效、快速鉴定天山雪莲中掺伪水母雪兔子、绵头雪兔子的方法。方法:基于LNA-TaqMan探针实时荧光定量PCR技术,利用天山雪莲及其常见易混伪品水母雪兔子、绵头雪兔子的叶绿体基因组序列差异,根据伪品水母雪兔子、绵头雪兔子与天山雪莲的特异性差异位点设计筛选探针引物,并对引物及LNA-TaqMan探针的特异性进行验证,根据扩增曲线临界循环数(C)t值的差值计算掺伪比例。结果:基于LNA-TaqMan探针检测方法,通过出现特异性扩增曲线判定检测出水母雪兔子和绵头雪兔子,根据扩增曲线Ct值的差值能有效确定掺伪比例,且在掺伪1%时仍可稳定检出。结论:该方法用于天山雪莲中掺伪水母雪兔子和绵头雪兔子检测灵敏度高、特异性强,可有效解决天山雪莲混伪品难以鉴别的问题,为天山雪莲药材质量控制提供技术支持。; 王多梅杨建波杨乐于新兰李海芳胡冲陈灵丽蒲婧哲张亚中; 关键词：天山雪莲掺伪

山羊支原体山羊肺炎亚种的TaqMan探针实时荧光定量PCR试剂盒及方法: 本发明涉及致病菌检测技术领域，具体涉及山羊支原体山羊肺炎亚种的TaqMan探针实时荧光定量PCR试剂盒及方法。首次通过对已公开的26株山羊支原体山羊肺炎亚种及235株其他支原体的基因组进行比较基因组学分析，成功鉴定出Mc...; 苗永强张素辉闫晓阳徐登峰沈克飞余远迪付利芝

鹅星状病毒通用型TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用: 2025年; 为建立用于鹅星状病毒1(GAstV 1)和鹅星状病毒2(GAstV 2)感染快速检测的实时荧光定量RT-PCR方法,试验根据部分GAstV ORF2基因和部分3′非编码区序列设计合成特异性引物和探针,采用矩阵法获得引物和探针的最优浓度,在优化退火温度的基础上,分别建立扩增GAstV 1和GAstV 2的标准曲线,进一步验证该方法的特异性、敏感性和重复性,建立的方法用于临床样品的检测,并与文献报道的常规RT-PCR方法进行比较。结果显示:优化后的反应体系中最优上、下游引物浓度均为0.40(或0.50)μmol/L,探针浓度均为0.50μmol/L,扩增线性范围分别为3.26×10^(3)~3.26×10^(8)拷贝/μL和7.09×10^(3)~7.09×10^(8)拷贝/μL,相关系数均为0.998;该方法可特异性检出两种GAstV,但对新城疫病毒、H9亚型禽流感病毒、鸭坦布苏病毒、新型鸭呼肠孤病毒、鹅细小病毒和血清4型禽腺病毒6种鹅病相关病毒的核酸均无扩增信号;其检测限分别为3.26×10^(2)拷贝/μL和7.09×10^(1)拷贝/μL;组内变异系数和组间变异系数均低于3%。建立的实时荧光定量RT-PCR方法对临床样品的检测结果显示,GAstV阳性率为90.57%(96/106);而文献报道的常规RT-PCR方法对GAstV 1和GAstV 2的混合阳性率为62.26%。研究表明,建立的TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法为同时检测GAstV 1和GAstV 2提供了快速、敏感、特异且能满足临床样本需求的检测方法。; 陈立功穆英丽张诚潘保革潘保革魏忠华魏忠华王学静; 关键词：荧光定量RT-PCR TAQMAN探针

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