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应用孕妇外周血cff-DNA检测胎儿RHD血型基因的方法学研究
2025年
目的研究一种新型应用孕妇外周血胎儿游离DNA(cell free fetal DNA,cff-DNA)检测胎儿RHD血型基因的无创检测方法,并分析该方法的可行性及准确性。方法以2023年8月—2024年8月本医学中心建档的RhD阴性孕妇为研究对象,采集孕妇5~8 mL外周血,首先对母亲RHD基因型进行检测,采用吸附柱法提取孕妇外周血中的基因组DNA,用PCR-SSP法检测母亲RHD基因分型,筛选出符合纳入标准的孕妇;然后采用磁珠法提取孕妇血浆中的cff-DNA,对提取得到的cff-DNA先进行质控检测,使用甲基化敏感限制性内切酶处理cff-DNA,酶切后扩增RASSF1A基因及β-actin基因,以确保提取到胎儿来源的cff-DNA;再进行胎儿RHD血型基因检测,运用巢式结合荧光探针的qPCR方法,扩增RHD第4、7、10外显子,确定胎儿RhD血型;最后对胎儿cff-DNA RHD血型基因检测结果准确性进行验证,追踪出生后新生儿血型,以其为金标准,判断孕妇外周血cff-DNA RHD血型基因检测结果的准确性。结果收集到4例RhD阴性孕妇样本,进行母亲RHD基因分型,结果3例为RHD全缺失,1例为RHD-CE(2-9),均符合纳入标准;对孕妇外周血中提取得到的cff-DNA,酶切后质控验证,RASSF1A基因均为阳性,β-actin基因均为阴性,均提取到cff-DNA;运用cff-DNA检测胎儿RHD血型基因,结果显示4例RHD第4、7、10外显子均为阳性,判断胎儿RhD血型为RhD阳性;追溯4例新生儿,新生儿血型血清学结果为RhD阳性。结论这种新的孕妇外周血cff-DNA检测胎儿RHD血型基因的方法可行,检测结果与出生后的新生儿血型结果一致,其对早期诊断RhD相关HDFN及指导RhD阴性孕妇应用抗D免疫球蛋白具有重要意义。
任道菊杨金华李小薇肖军李翠莹
关键词:RHD阴性巢式PCR
PCR-SSP技术联合抗人球蛋白卡式法在ABO和RhD血型鉴定困难患者中的应用
2024年
目的探究聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)技术联合抗人球蛋白卡式法在ABO和RhD血型鉴定困难患者中的应用。方法选取118例ABO与RhD血型鉴定困难患者血型标本,分别应用PCR-SSP技术、抗人球蛋白卡式法分析患者血型情况。结果118例血型鉴定困难者采用抗人球蛋白卡式法联合PCR-SSP技术明确检出ABO血型113例,同时应用PCR-SSP可以确定ABO亚型,5例未检出血型的样品经PCR-SSP测序发现,基因分型分别为BO02、A205O01、A102B01、A201B01、B01B01,分别出现第7外显子640A>G杂合突变、第7外显子1009A>G杂合突变、第3外显子150G>C杂合突变、第6外显子240T>C、第7外显子431G>T杂合突变;采用抗人球蛋白卡式法联合PCR-SSP检出RhD血型114例,未检出的4例进行测序,1例显示为RhD weak D 779A/G突变;3例为RhD weak D type 4.0(包括602C/G、667T/G以及819G/A突变)。结论ABO和RhD血型鉴定困难患者应用PCR-SSP技术联合抗人球蛋白卡式法进行鉴定可以准确鉴定血型,并发现血型具体亚型,保证输血安全。
向健王晶王俊田文武
关键词:PCR-SSP技术RHD血型血型鉴定困难
一种用于检测RHD血型突变位点的SNP标记及应用
本发明提供一种用于检测RHD血型突变位点的SNP标记及应用,基因诊断制品技术领域,所述的SNP标记在RHD基因Exon2编码区存在由起始密码子起第208位碱基出现C>T突变;第210、211位碱基之间插入G。导致第...
刘师序
一种ABO正定型及RhD血型检测卡
本申请属于血型检测卡的技术领域,涉及一种ABO正定型及RhD血型检测卡,其包括卡板,卡板的一端设置有加样管,所述卡板的一侧为支撑侧,卡板于支撑侧开设有收纳槽,卡板于收纳槽内设置有支撑组件。本申请具有解决检测人员需手持卡板...
宋亚琳
一种ABO正定型及RhD血型检测卡
本申请属于血型检测卡的技术领域,涉及一种ABO正定型及RhD血型检测卡,其包括若干待拼接的单元板体,单元板体的一端设置有单元加样管,单元板体于单元加样管的管口处设置有密封组件。本申请具有减少特定项目检测导致加测可种剩余加...
宋亚琳
一种精准的AB0和RHD血型定型检测卡
本实用新型涉及血型定型技术领域,具体涉及一种精准的AB0和RHD血型定型检测卡;包括承载板、支撑架、托架、卡套、试剂管和固定机构,固定机构包括两个固定组件,每个固定组件均包括转动轴、支撑板和固定插销,拉动第二把手,使得支...
刘阳杨明闫世杰
利用RhD血型设计和模拟常规输血血清学教学试验
2023年
目的利用RhD血型设计和模拟输血学技术中的常规血清学试验,以解决试验教学中阳性标本不易获得的问题。方法利用RhD阳性红细胞、RhD阴性红细胞和抗-D试剂设计并模拟输血学技术中的酶处理试验,吸收放散试验,抗体鉴定试验和凝聚胺法交叉配血试验。结果木瓜蛋白酶处理红细胞可使RhD阳性红细胞与IgG抗-D反应出现肉眼可见的凝集;用RhD阳性红细胞和IgG抗-D成功模拟了吸收放散试验;通过创建不同的鉴定谱和鉴定细胞组合,成功模拟抗-Jk^(a)和抗-Fy^(a)的抗体鉴定;利用RhD阴性和阳性红细胞与IgG抗-D反应,成功模拟了凝聚胺法交叉配血相合与不相合的两种情况。结论利用RhD血型可以模拟输血常用的大部分血清学试验,可用于输血血清学试验教学。
牛迎迎王江陈春霞黄春妍
关键词:输血医学血清学试验试验教学
云南省农村育龄人群ABO和RhD血型的调查研究被引量:1
2023年
以2013—2019年云南省接受国家免费孕前优生健康检查的20~49岁农村育龄人群为研究对象,分析云南省不同民族、不同地区人群ABO和RhD血型的占比情况。在纳入的2748131名研究对象中,在ABO血型中,占比由高到低依次为:A型(32.60%)、O型(30.60%)、B型(27.33%)和AB型(9.47%);在RhD血型中,RhD阳性占99.29%,RhD阴性占0.71%。云南省农村地区育龄人群中,不同民族、不同地区间血型占比之间的差异均有统计学意义(均P<0.001)。在参检人数超过3000名的18个民族中,瑶族(42.75%)、布依族(40.58%)和傣族(40.37%)O型血占比高于其他民族,A型和AB型血占比最高的为佤族(分别为40.15%和11.23%),B型血占比中苗族(34.70%)、拉祜族(34.42%)高于其他民族;RhD-血型占比最高的为佤族(1.88%)。在云南省16个州、市中,O型血占比最高的为西双版纳傣族自治州(40.27%),保山市(36.39%)、临沧市(36.22%)和大理白族自治州(36.06%)A型血占比高于其他地区,迪庆藏族自治州(30.83%)和曲靖市(30.48%)B型血占比高于其他地区,AB型血占比最高的为昭通市(11.19%);RhD-血型占比最高的为红河哈尼族彝族自治州(1.37%)。佤族A RhD+(39.36%)、A RhD-(0.78%)、AB RhD+(11.03%)、AB RhD-(0.20%)和O RhD-(0.48%)5种血型占比均高于其他民族,差异有统计学意义(P<0.001)。
谢正媛曹光王涛孔彩李奕晓祖维磊赵子高叶汉风
关键词:ABO血型RHD血型少数民族育龄人群
输血相容性检测实验室RhD血型检测策略专家共识被引量:11
2023年
RhD抗原是Rh血型系统最具免疫原性的抗原,可导致溶血性输血反应(HTRs)和胎儿与新生儿溶血病(HDFN)。我国RhD阴性红细胞属于稀缺资源,RhD阴性患者及时输注红细胞面临资源挑战。对于初筛(盐水法)为RhD阴性的不同人群,使用何种检测策略、如何出具检测报告、何时需要鉴定“亚洲型”DEL(RHD*01EL.01,c.1227G>A)是临床输血工作者较为困惑的问题。本共识由国内200余位输血相容性检测技术专家进行深入探讨后完成,旨在进一步规范、细化RhD血型检测策略,为实现不同RhD血型患者精准输血,不断提高RhD-HTRs及RhD-HDFN的防治水平提供技术支撑,为今后制定RhD血型检测策略行业标准奠定基础。
输血相容性检测实验室RhD血型检测策略专家共识编写组马春娅李小飞姬艳丽于洋邵超鹏付涌水
关键词:RHD血型孕产妇受血者献血者
875例孕妇ABO/RhD血型和不规则抗体检测结果分析被引量:5
2023年
目的分析孕妇ABO/RhD血型和不规则抗体检测结果,为临床用血安全及新生儿溶血症的防治提供参考。方法选取就诊产检的875例孕妇(妊娠组)及同期非妊娠健康体检妇女875例(对照组),微柱凝胶抗人球蛋白法检测ABO/RhD血型和不规则抗体及试管法检测抗体特异性、Ig类型、37℃温度下反应性并分析结果。结果妊娠组ABO血型中A型、B型、O型及AB型分别为26.63%、28.34%、28.23%、16.80%,对照组分别为27.66%、27.43%、29.26%、15.66%,妊娠组RhD血型阳性者占98.86%,对照组为98.17%,两组ABO和RhD血型分布状况比较差异无统计学意义(P>0.05)。妊娠组孕妇中不规则抗体阳性者占1.37%,其中有既往妊娠史者9例、有输血史者1例;对照组妇女中不规则抗体阳性者占0.23%,其中有既往妊娠史者1例、有输血史者0例;妊娠组不规则抗体阳性率及有输血史(或妊娠史)的不规则抗体阳性率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。妊娠组孕妇既往妊娠次数0次、1次、2次、≥3次者不规则抗体阳性检出率分别为0.64%、1.28%、2.44%、6.25%,差异有统计学意义(P<0.05)。妊娠组孕妇不规则抗体阳性者Rh血型系统、MNS血型系统、Lewis血型系统分别占83.33%、8.33%、8.33%,抗体的特异性鉴定抗E、抗cE、抗D、抗C、抗Ce、抗M、抗Lea均有检出,阳性率分别为25.00%、16.67%、16.67%、16.67%、8.33%、8.33%、8.33%,其余抗体未检出,抗体效价区间1∶8~1∶512,Ig类型鉴定中IgG占到83.33%,IgG+IgM、IgM各占8.33%,37℃温度下反应性区间为1+~3+。结论妊娠孕妇不规则抗体阳性率高于正常非妊娠妇女,妊娠次数增加是不规则抗体产生的主要原因之一,应重视对孕妇进行不规则抗体的筛查,以预防新生儿溶血症及保障输血安全。
俞松意潘腾飞陈敏霞
关键词:不规则抗体孕妇ABO血型RHD血型

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刘玉振
作品数:165被引量:572H指数:12
供职机构:河南省红十字血液中心
研究主题:无偿献血者 ALT 献血者 微板 供血者
陈伟
作品数:57被引量:62H指数:5
供职机构:新疆维吾尔自治区人民医院
研究主题:输血 ABO血型 基因频率 新生儿溶血病 RH血型
李菲
作品数:53被引量:55H指数:5
供职机构:新疆维吾尔自治区人民医院
研究主题:ABO血型 输血 基因频率 神经内科 RH血型
杨世明
作品数:102被引量:660H指数:18
供职机构:第四军医大学唐都医院
研究主题:微柱凝胶法 免疫性抗体 临床输血 新生儿溶血病 ABO血型
乔芳
作品数:57被引量:446H指数:10
供职机构:河北省血液中心
研究主题:新生儿溶血病 PCR-SSP 血清学 正反定型不符 RHD