目的探究聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)技术联合抗人球蛋白卡式法在ABO和RhD血型鉴定困难患者中的应用。方法选取118例ABO与RhD血型鉴定困难患者血型标本,分别应用PCR-SSP技术、抗人球蛋白卡式法分析患者血型情况。结果118例血型鉴定困难者采用抗人球蛋白卡式法联合PCR-SSP技术明确检出ABO血型113例,同时应用PCR-SSP可以确定ABO亚型,5例未检出血型的样品经PCR-SSP测序发现,基因分型分别为BO02、A205O01、A102B01、A201B01、B01B01,分别出现第7外显子640A>G杂合突变、第7外显子1009A>G杂合突变、第3外显子150G>C杂合突变、第6外显子240T>C、第7外显子431G>T杂合突变;采用抗人球蛋白卡式法联合PCR-SSP检出RhD血型114例,未检出的4例进行测序,1例显示为RhD weak D 779A/G突变;3例为RhD weak D type 4.0(包括602C/G、667T/G以及819G/A突变)。结论ABO和RhD血型鉴定困难患者应用PCR-SSP技术联合抗人球蛋白卡式法进行鉴定可以准确鉴定血型,并发现血型具体亚型,保证输血安全。
目的探讨PCR序列特异性引物(PCR-sequence specific primer,PCR-SSP)技术对胎儿羊水细胞ABO血型基因定型研究,分析母儿血型吻合情况。方法选择2008年1月～2010年2月于我院优生优育门诊及产前诊断中心就诊O型血孕妇80例,其丈夫血型分别为A型40例,B型37例,AB型3例。以上80例孕妇于孕16～21周在B超直视下经腹羊膜腔穿刺抽取羊水20～30ml,其中10ml经高速离心取沉淀的羊水细胞,用常规酚氯仿法提取羊水DNA,运用PCR-SSP技术通过PCR反应特异性扩增ABO基因片段,凝胶电泳检测PCR产物,根据产生的特异性PCR产物来鉴定相应的基因来分析血型。同期运用变性高效液相色谱分析(denaturing high performance liquid chromatography,DHPLC)技术对羊水血型检测结果进行验证。余20ml羊水行细胞培养细胞遗传学分析。另回访40例已出生的胎儿,采集外周静脉血分别运用PCR-SSP技术和常规血清学检测方法鉴定ABO血型,比较产前和产后血型检测结果。结果运用PCR-SSP技术从80例羊水DNA中成功检测79例(79/80,98.75%),其血型分别为A型21例,B型20例,O型38例。同期运用DHPLC技术对PCR-SSP技术检测结果进行验证,两种检测结果相符。已出生40例婴儿外周血血型分析结果与产前诊断血型结果相符。结论 PCR-SSP技术产前诊断胎儿羊水ABO血型具有可行性,进而分析母儿血型吻合情况,为ABO抗体效价显著增高的孕妇临床用药指导提供实验室依据。
PCR-SSP(Sequence specific primer,序列特异性引物)是一种基因多态性分析技术,可用于HLA复合体及其他具有多态性特点的基因分型。在本论文中我们应用PCR-SSP技术对正常人进行HLA基因分型。HLA抗原分型过去主要采用血清学和细胞学方法。与他们相比,PCR-SSP技术具有简便、快速、准确及重复性好等特点。本文介绍PCR-SSP技术在HLA分型中的应用以及该技术的方法、特点以及常见问题的处理。
