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PCR-RFLP法鉴别浙贝母及其混淆品湖北贝母被引量：1: 2024年; 目的建立PCR-RFLP法鉴别浙贝母及其混淆品湖北贝母。方法对比两者叶绿体ycfl基因,选择湖北贝母的特异性酶切位点EcoRI设计引物,优化反应条件,并进行方法学考察。结果退火温度58℃、循环数35时,湖北贝母或掺有湖北贝母的浙贝母经特异性引物扩增后能被EcoRI酶酶切,200~400bp处检出2条单一DNA条带,而浙贝母无此条带,检出限达3%。结论该方法方便快捷、灵敏度高,可用于浙贝母、湖北贝母及前者掺混后者的快速检测,为浙贝母质量控制提供参考。; 李莉陈军朱洁陈志禹孙胡琳; 关键词：浙贝母湖北贝母 PCR-RFLP

一种鉴别小鹅瘟病毒减毒活疫苗株与野毒株的PCR-RFLP法: 本发明公开了一种鉴别小鹅瘟病毒减毒活疫苗株与野毒株的PCR‑RFLP法，涉及病毒检测领域，本发明的技术方案比较GPV疫苗株和野毒株病毒基因组，疫苗株在Rep基因上发生了一个特异性的T<C碱基突变，产生了一个PciI...; 张克山高广亮王雪玫王启贵陈主平钟航王珍李来旭何信群

PCR-RFLP法鉴定人ALDH2基因型: 2022年; ALDH2编码乙醛脱氢酶,是人体乙醇代谢途径的重要组分。人类ALDH2基因存在SNP (单核苷酸多态性)现象,其gDNA在37,030位发生单碱基替换后导致乙醛脱氢酶失活,且该突变基因在东亚人群中有较高频率。根据此单碱基的差别,本文采用PCR-RFLP方法,通过提取、纯化、酶切受试者口腔上皮细胞基因组DNA,实现了对于三种ALDH2基因型的鉴定,其创新点在于简化实验步骤、提升产物回收效率的同时使判断更加准确。结论:PCR-RFLP法鉴定人ALDH2基因型可作为分子遗传学实验教学的案例。; 时天麒康宇佳石金磊; 关键词：PCR-RFLP 分子遗传学

PCR-RFLP法鉴别罗布麻与混淆品白麻及其psbA-trnH序列分析被引量：5: 2021年; 目的:基于叶绿体psbA-trnH基因间隔区序列,建立一种PCR-RFLP(聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性)方法鉴别罗布麻(Apocynum venetum L.)及其混淆品白麻(Apocynum pictum),并验证psbA-trnH序列酶切位点种间特异性和种内保守性。方法:将罗布麻和白麻提取总DNA,扩增psbA-trnH序列,扩增产物双向测序。序列分析发现,罗布麻含有特异性酶切位点SspⅠ。结果:扩增产物psbA-trnH为300~400bp。罗布麻psbA-trnH产物均可以被SspⅠ酶切成两条条带,白麻却不能被SspⅠ酶切。生物信息分析结果表明,在罗布麻属中,罗布麻psbA-trnH序列的SspⅠ酶切位点具有种间特异性和种内保守性,在夹竹桃族进化树中,罗布麻与白麻距离最近。结论:本实验建立的PCR-RFLP方法可以有效鉴别罗布麻和白麻。; 刘流邰顺章支荣荣; 关键词：罗布麻 PSBA-TRNH 分子鉴定

PCR-RFLP法检测MTRR基因A66G多态位点的改进被引量：1: 2021年; 目的对现有检测MTRR基因A66G多态位点的PCR-RFLP法进行改进,避免因Nde I酶切不完全可能导致的基因型误判。方法设计1对PCR引物,上游引物3′端倒数第3位含错配碱基,下游引物结合位置位于一个天然的Nde I识别序列(CATATG)72 nt之后,使用该对引物扩增包含MTRR基因A66G多态位点的靶序列,将多态位点相关的原序列AATRTG(R为多态位点碱基A/G)变为CATRTG,以便通过限制性核酸内切酶Nde I消化来甄别多态位点碱基具体为A还是G,多态位点下游315 nt处含有天然的Nde I识别序列作为内对照酶切位点,PCR产物用Nde I消化制作限制性酶切图谱以判断基因型。结果PCR可成功扩增预期大小为478 bp的靶片段,在用Nde I消化PCR产物制作而成的限制性酶切图谱中,凭借小于PCR产物的2种特征性酶切条带可明确判断各样品基因型,即便酶切不完全即出现PCR产物残留或酶切中间产物时,基因型的判断也不受干扰,分型结果得到基因测序支持。使用该法检测了100例样品,检得MTRR基因A66G多态位点3种基因型即AA、AG、GG的频率分别为0.57、0.34、0.09;A和G等位基因频率分别为0.74和0.26,符合Hardy-Weinberg遗传平衡(X^(2)=1.355,P=0.508)。结论本方法由于内对照酶切位点的引入,能克服传统PCR-RFLP法使用Nde I酶检测MTRR基因A66G多态位点酶切不完全可能导致的基因型误判。; 何震宇顾取良陈瑜丽; 关键词：基因分型聚合酶链反应-限制性片段长度多态性

川贝母PCR-RFLP法鉴别检验能力验证活动分析被引量：5: 2020年; 目的:考察相关实验室执行《中华人民共和国药典》川贝母PCR-RFLP法鉴别检验项目的技术能力,促进分子生物学技术在中药检定中的广泛应用。方法:测试样品为粉末,对样品的均匀性和稳定性进行评价,样品种类分为阳性和阴性两种,采用随机单盲方式分配至参与能力验证的实验室。各实验室按照作业指导书进行检测,并以规定格式书写原始记录。检测结果与样品性质一致的实验室为满意。对各实验室的反馈结果进行汇总和分析。结果:最终报名参加的实验室总计50家,能力验证结果为满意的26家,占52%,不满意24家,占48%。其中3家试验室未按要求返回结果,判定为不满意。分别统计不同类型参加实验室的满意率,地市级食药检机构满意率最高,为70.6%。结论:总体满意率偏低,川贝母PCR-RFLP法鉴别检验项目的整体技术水平有待提高。; 张文娟赵萌项新华魏锋马双成; 关键词：PCR-RFLP

基于PCR-RFLP法鉴定MTHFR基因A1298C位点的内切酶的筛选被引量：1: 2019年; 寻找价格适宜的限制性内切酶,以期用于PCR-RFLP法对MTHFR基因A1298C位点的分型。根据dbSNP数据库中MTHFR基因A1298C位点的序列,通过各种在线酶切位点分析工具,查找可鉴定该位点的酶,再通过价格对比和分析多态位点上、下游是否存在干扰序列,从而确定候选酶。结合PCR创造酶切位点技术,一种价格便宜的常用酶HinfI具有鉴别该位点的潜力,不仅为该位点的独立检测并且为其与MTHFR基因C677T位点的联合检测奠定了基础。; 何震宇; 关键词：MTHFR基因 PCR-RFLP

采用PCR-RFLP法鉴别IBDV强毒BC6/85株和弱毒B87株: 2019年; 选取传染性法氏囊病病毒(IBDV)强毒力代表株BC6/85和弱毒力代表株B87为研究对象,根据VP2基因保守区设计一对通用引物和两个限制性内切酶位点,分别扩增两个毒株的VP2基因,然后进行BamHⅠ和PstⅠ酶切,采用限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)分析酶切产物,并进行特异性、敏感性和重复性检测.结果表明:所设计的引物均可扩增两个毒株的VP2基因,大小约856 bp;经BamHⅠ和PstⅠ酶切后,BC6/85株的PCR产物被BamHⅠ和PstⅠ切出166、242和449 bp大小的3个片段,而B87株仅被PstⅠ切出242和615 bp大小的2个片段,且重复性好,特异性强.可见,采用PCR-RFLP分析IBDV VP2基因的方法操作简单,是一种能够快速鉴别IBDV强、弱毒株的可靠方法.; 陈仕怡陈媛赖隆永李春燕刘梦茜袁晓琴郑庆礼许丽惠王全溪

PCR-RFLP法研究分析市售川贝母药材质量现状被引量：2: 2019年; 目的对市售的10批次川贝母药材质量现状进行研究分析。方法对川贝母样品进行性状鉴定,并通过PCR-RFLP鉴别法进一步进行真伪判定。结果10批次川贝母药材全部符合为药典正品。结论PCR-RFLP鉴别法与传统检测方法相比具有专属性强、高效快速、可操作性强、结果准确可靠易判定等优点。; 张烨陈羽涵丁华李珍杨洋孟美英; 关键词：川贝母 PCR-RFLP法

PCR-RFLP法检测DDAH2基因rs805304多态性的实验条件研究被引量：1: 2019年; 目的探讨聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测二甲基精氨酸二甲胺水解酶2(DDAH2)rs805304多态性的最适实验条件。方法运用PCR-RFLP技术分别对2016年1月～2017年3月昆明医科大学第一附属医院收治的182例2型糖尿病患者和147名健康体检者DDAH2基因rs805304的多态性进行检测,对影响PCR-RFLP方法的主要因素进行研究。结果最适实验条件:退火温度为58℃,变性温度为95℃,2×Power Taq PCR Master Mix浓度为12.5μL,引物浓度为0.8μmo/L,酶切体系为15μL体系中加8.0μL产物,用5 U的限制性内切酶Bst UI消化。结论最适实验条件的摸索为后续研究奠定了基础。; 石柔董荣静刘华李会芳; 关键词：聚合酶链反应限制性片段长度多态性

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