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H9亚型禽流感病毒mRNA疫苗的构建与效力评价: 2025年; H9亚型禽流感(avian influenza, AI)对养鸡业尤其肉鸡产业危害巨大,灭活疫苗不能有效阻止病毒在鸡上呼吸道感染复制,有必要研究H9亚型禽流感病毒(avian influenza virus, AIV)血凝素(hemagglutinin, HA)基因的mRNA疫苗。参考GenBank 2022年公开的HA基因序列,优化HA全长(HA)和HA胞外区(HAe)序列,连接至pUC57载体构建体外转录模板,经体外转录、加帽、纯化,采用脂质纳米颗粒(Lipid nanoparticles, LNP)包封mRNA,并转染人胚肾细胞(293T)、仓鼠肾细胞(BHK-21)和鸡胚成纤维细胞(DF-1),Western blot检测HA表达。20只3周龄SPF鸡,随机分成4组,每组5只,分别经腿部肌肉接种0.3 mL PBS、25μg HA mRNA LNP、25μg HAe mRNA LNP和0.3 mL H9亚型AI灭活疫苗。免疫后4周采集血清,检测血凝抑制(hemagglutination inhibition, HI)抗体,每只鸡滴鼻点眼H9N2亚型AIV 0.2 mL(含10^(6.0)EID_(50)),攻毒后5日采集咽喉拭子和外周血单个核细胞,分别检测病毒分离情况及IFN-γ、IL-4的表达水平,观察气管组织病理学变化。Western blot结果显示两种mRNA HA蛋白均成功表达,经LNP包封后可有效在细胞内完成翻译。HA mRNA LNP和HAe mRNA LNP免疫SPF鸡后HI抗体效价(log2)平均值分别为5.6和3。H9亚型AI灭活疫苗免疫后HI抗体效价(log2)平均值为9.8,极显著高于2个mRNA LNP组(P<0.01)。非免疫对照、HA mRNA LNP、HAe mRNA LNP和H9亚型AI灭活疫苗组病毒分离结果分别为5/5、1/5、4/5和2/5。HA mRNA LNP组IFN-γ表达水平显著高于其他组(P<0.05),HAe mRNA LNP组IL-4表达水平显著低于其他组(P<0.05)。气管组织病理学变化结果表明HA mRNA LNP和H9亚型AI灭活疫苗免疫可有效减轻H9亚型AIV对SPF鸡气管上皮细胞的损伤。构建的H9亚型AIV HA全长mRNA疫苗免疫鸡能提供有效保护,而HA胞外区mRNA疫苗不能提供有效的免疫保护。; 黄程杨志远林健程慧敏王米毛惠琳王国良刘贵明赵际成刘月焕; 关键词：H9亚型禽流感病毒免疫保护

一种大肠杆菌仿生囊泡递呈H9亚型禽流感病毒HA1蛋白的制备方法及其应用: 本发明属于生物技术领域，涉及一种大肠杆菌仿生囊泡递呈H9亚型禽流感病毒HA1蛋白的制备方法及其应用，本发明通过构建O78血清型大肠杆菌缺陷菌ΔtolA‑ΔaraD提高仿生囊泡产量，通过L‑阿拉伯糖诱导及高压均质技术，实现...; 彭大新李悦陈素娟秦涛印云聪

某活禽批发市场通过外售禽类和转运笼具扩散H9亚型禽流感病毒的定量风险评估: 2025年; 为评估2023年我国西部地区某活禽批发市场通过外售禽类和转运笼具扩散H9亚型禽流感病毒(AIV)的风险,并寻找风险因素进行针对性防控,用定量风险评估的方法,绘制可能造成病原扩散的风险路径,通过@Risk软件对相关参数进行模拟运算,运用敏感性分析发现影响模型结果的参数。结果显示:2023年该市场售出1批家禽扩散H9亚型AIV的概率为1.38×10^(-4)(95%CI:0.77×10^(-4)~2.12×10^(-4));通过转运笼具调运活禽扩散H9亚型AIV的概率为3.00×10^(-3)(95%CI:0.74×10^(-3)~7.20×10^(-3));敏感性分析发现,该活禽批发市场通过外售禽类扩散H9亚型AIV的风险主要取决于场内销售摊位鸡的平均批次流行率,通过转运笼具扩散H9亚型AIV的风险主要取决于每次调入活禽时笼具置换出场的比例。据此提出加强市场有效洗消、减少笼具流通、完善外调管理等建议,以期为防控H9亚型AIV从活禽批发市场扩散提供参考。; 姚玲陈斌陈斌岳建国李敏张毅梁璐琪张毅叶斌梁璐琪; 关键词：H9亚型禽流感扩散

H3、H4、H6和H9亚型禽流感病毒多重TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用: 2025年; 为同时鉴别检测H3、H4、H6和H9亚型禽流感病毒(AIV),本研究根据上述4种亚型AIV HA基因的保守区,采用primer6.0设计4对特异性引物和TaqMan探针,经PCR扩增上述4种亚型AIVHA基因后,分别克隆至pMD18-T载体中构建重组质粒p-H3、p-H4、p-H6和p-H9,并均经PCR与测序鉴定正确后作为标准品。通过优化各反应条件,初步建立了检测H3、H4、H6和H9亚型AIV的多重TaqMan荧光定量RT-PCR(RT-qPCR)方法。分别以H1、H3、H4、H5、H6、H7、H9亚型AIV、传染性喉气管炎病毒(ILTV)、传染性支气管炎病毒(IBV)、鸭坦布苏病毒(DTMUV)、鸭圆环病毒(DuCV)、番鸭细小病毒(MDPV)、番鸭呼肠孤病毒(MDRV)和新城疫病毒(NDV)的RNA或者DNA作为模板,采用本研究建立的多重RT-qPCR检测,评估该方法的特异性;将4个重组质粒标准品等体积混合物10倍倍比稀释后作为模板,采用本研究建立的多重RT-qPCR检测,评估该方法的敏感性;选择3个浓度的重组质粒标准品等体积混合物作为模板,采用本研究建立的多重RT-qPCR分别进行批内和批间重复性试验,评估该方法的重复性。结果显示,该方法仅H3、H4、H6和H9亚型AIV出现扩增曲线,其他相关禽病病原均为阴性,特异性较强;该方法对H3、H4、H6和H9亚型AIV的检测限均为1.0×101拷贝/µL,敏感性较高;批内和批间重复性试验的变异系数为0.06%~1.09%,重复性较好。利用该方法检测来自广西不同地区的3360份临床家禽咽喉、泄殖腔拭子样品,结果显示H3、H4、H6和H9亚型AIV的检出率分别为4.08%(137/3360)、0.21%(7/3360)、1.13%(38/3360)和3.51%(118/3360),与各亚型AIV单一RT-qPCR商品化试剂盒的检测结果均一致,符合率达100%。表明本研究建立的多重RT-qPCR准确性较好,可以用于临床各类样品的检测。本研究建立了一种同时鉴别检测H3、H4、H6和H9亚型AIV的多重RT-qPCR方法,为AIV基因分型和流行病学调查提供便捷的技术手段。; 龙凤熊陈勇施开创郑敏林昌华林宝江杜忠韦显凯冯淑萍屈素洁陆文俊李剑锋周明旭尹彦文; 关键词：禽流感病毒荧光定量RT-PCR TAQMAN

一种预防H9亚型禽流感病毒病多价灭活疫苗的制备方法: 本发明涉及一种预防H9亚型禽流感病毒病多价灭活疫苗的制备方法。包括以下步骤：步骤S1，采用分离鉴定、基因测序和基因分型方法，对长周期、不同地区获得的大量样本进行处理，判断病毒的变异方向；步骤S2，全样本开展交叉血凝抑制试...; 崔松奇王飞李娥张丹丹陈峰王增福柴沛瑶温兴莹杨羽张娜

表达新城疫病毒F基因和H9亚型禽流感病毒HA基因的重组马立克氏病病毒及其构建方法和应用: 本发明提供了一种共同表达新城疫病毒F基因和H9亚型禽流感病毒HA基因的重组马立克氏病病毒株及应用，属于基因工程疫苗领域。本发明利用重组克隆技术，将包含新城疫病毒基因VII型毒株F基因和H9亚型禽流感病毒HA基因的表达框架...; 李凯田世茂李晓涵王笑梅李守军车艳杰朱秀同

一种基于RT-RAA/CRISPR-Cas13a/LFD检测H9亚型禽流感病毒的核酸分子组合物、试剂、试剂盒及应用: 本发明涉及分子生物学技术领域，具体涉及一种基于RT‑RAA/CRISPR‑Cas13a/LFD检测H9亚型禽流感病毒的核酸分子组合物、试剂、试剂盒及应用。所述核酸分子组合物的包括上游引物RAA‑H9‑F、下游引物RAA‑...; 贾伟新杨芷翊杨宇佳张心葵

预防H9亚型禽流感病毒的功能益生菌反向筛选方法及应用: 本申请公开了一种预防H9亚型禽流感病毒的功能益生菌反向筛选方法及应用，其属于微生物技术领域，通过血凝试验（HA）与血凝抑制试验（HI）反向高通量筛选H9亚型禽流感病毒免疫类似物，即为天然靶向H9亚型禽流感病毒的功能益生菌...; 曹阳王宏华尚玉珍鲁爱玲辛瑞祥王辉张勇赵光勋孙伟栾慧慧

2022年四川省达州市H9亚型禽流感病毒监测与分析被引量：3: 2024年; 为掌握达州市H9亚型禽流感病毒(AIV)的流行特征,于2022年在达州市128个乡镇的855个场点(家禽养殖场109个、活禽交易市场87个、散养户609个、活禽屠宰点50个)采集10120份样品,采用荧光定量RT-PCR法进行H9亚型AIV核酸检测。结果显示,达州市H9亚型AIV总体场点阳性率为3.27%(28/855),总体样品阳性率为0.41%(41/10120),其中活禽交易市场、屠宰点、养殖场、散养户的场点阳性率分别为17.24%、4.00%、1.83%、1.48%;鸡、鸭、鹅、鸽样品的场点阳性率分别为4.71%、3.37%、0、0;咽喉和泄殖腔拭子、环境样品的样品阳性率分别为0.60%、0.19%;不同县别的场点阳性率为0.78%~10.00%,样品阳性率为0.13%~0.74%,各县(市、区)均有阳性样品检出。结果表明,达州市H9亚型AIV低水平流行,防控效果较好,但其污染面广,主要在活禽交易市场与鸡群中流行,是监测与防控的重点。; 李清竹徐倚天杨青唐慧伦冉崇川李成郭珏岑; 关键词：H9亚型禽流感

H9亚型禽流感病毒M1蛋白原核表达及免疫效果初步研究: 2024年; 旨在原核表达H9亚型禽流感病毒(AIV)M1蛋白,初步探究其免疫效果,为研制AIV疫苗奠定基础。通过构建重组质粒pET-32a-M1,诱导表达,Western blot验证蛋白表达情况,将重组蛋白免疫接种小鼠,通过测定血清中IgG抗体效价,脾细胞培养上清多细胞因子分泌情况评价其免疫效果。结果显示,M1重组蛋白主要以可溶性蛋白存在,Western blot结果可见特异性条带。免疫接种小鼠后,血清产生IgG抗体,抗体效价为1∶30000。小鼠脾细胞上清液IL-2、IL-4、IL-6与对照组相比较,含量显著增加(P<0.01),而抑制IL-1β、IL-5、IL-13、IL-12p70、IL-18、GM-CMF、IFN-γ、TNF-α分泌。结果表明,M1重组蛋白免疫原性良好,刺激机体产生体液免疫和细胞免疫,为禽流感疫苗深入研究奠定了基础。; 李小凤谢芝勋阮志华李孟李丹张民秀谢志勤罗思思韦悠谢丽基曾婷婷张艳芳黄娇玲王盛; 关键词：禽流感原核表达免疫效果

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