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A、B、J亚群禽白血病病毒混合感染的鉴定及gp85基因序列分析被引量:4
2024年
【目的】了解湖北地区禽白血病病毒(Avian leukosis virus, ALV)亚群之间混合感染及其gp85基因遗传变异情况,为进一步研究ALV混合感染的流行病学提供参考。【方法】对来自湖北宜昌疑似感染ALV的一只病死鸡进行病理剖检,无菌采集病变组织接种DF-1细胞进行病毒分离,通过PCR、ELISA及间接免疫荧光试验(IFA)等方法进行亚群鉴定,进一步对分离株gp85基因的相似性和变异情况进行分析。【结果】剖检结果可见病死鸡肾脏、脾脏肿大,肺脏出血,表面可见灰白色肿瘤结节;组织匀浆接种DF-1细胞后,ELISA检测发现细胞上清P27抗原呈阳性;IFA检测发现,感染细胞里有特异性绿色荧光;PCR鉴定能同时扩增出A(692 bp)、B(847 bp)和J(545 bp)亚群的特异性条带。鉴定结果表明,从该病死鸡中分离到A、B和J亚群ALV毒株,分别命名为HBYC2022-A、HBYC2022-B和HBYC2022-J。分离株gp85基因核苷酸相似性分析显示,HBYC2022-A与江苏株JS-A1201相似性最高,为99.6%;HBYC2022-B与江苏株JS-B1204相似性最高,为99.7%;而HBYC2022-J与黑龙江株PK19FA01、广西株GX20YL12 J及安徽株AHaq02相似性均为100%。此外,分离株gp85基因高突变区域(hr1、hr2)氨基酸序列并未出现特殊点突变。【结论】鸡群存在A、B和J不同亚群ALV的混合感染情况,提示国内养禽场需提高警惕并加强针对ALV各亚群的流行病学调查。
窦俊峰汪最李丽卢琴金鑫鑫凌小淳罗青平罗青平
关键词:GP85基因
龙岩地方品种鸡精液ALV-J检测与gp85基因分析
2024年
为掌握龙岩地方品种鸡精液中的J亚型禽白血病病毒(ALV-J)感染率与流行毒株的分子特性,对龙岩地方品种鸡128份精液样本进行p27抗原ELISA检测及ALV-J gp85基因PCR检测。结果表明,17.2%的样本呈现p27抗原阳性,而gp85基因PCR检测确认5.5%的样本含有ALV-J。进一步基因序列分析,发现这些毒株与J亚群参考毒株间的高度同源性,核苷酸序列相似度为92.0%~97.9%,特别是与广西株GX14YYA-J3的相似度高达96.5%~97.9%。通过种鸡精液ALV-J检测与gp85基因分析,为该地区鸡种的疾病防控提供了科学依据。
章烁刘辉兰陈丽燕林先杰林炜明
关键词:禽白血病GP85基因
与鸡内皮血管瘤病例相关的禽白血病病毒K亚群分离及其gp85基因演化分析
2024年
本研究在华南地区某规模化种禽场调查中发现其部分花鸡品系头部鸡冠下缘及眼睑上缘部位出现白色、质地坚硬且形状不规则的肿块,为了解患病鸡的发病特征及致病因子而开展了实验室诊断及相关病原研究。结果表明该规模化养殖场主要发病鸡群为父母代花鸡,发病率约为2%,剖检无其他肉眼表观病变,病理组织学诊断为内皮血管瘤。RT-PCR检测肿瘤组织表明为K亚群禽白血病病毒(ALV-K)感染,无其他禽肿瘤性病毒感染。对患病鸡的血浆样品(32份)、肿瘤组织匀浆(6份)及脑组织匀浆(6份)进行病毒的分离鉴定,成功从脑组织样品中分离到4个ALV-K毒株(GXJL01~GXJL04)。使用特异性引物扩增GXJL01~GXJL04的env基因并测序,在与华南地区其他5个规模化种禽场中分离获得的7个ALV-K流行株的gp85基因的遗传演化分析中表明,GXJL01~GXJL04与日本的Km5844、Sp53等神经胶质瘤毒株(fowl glioma-inducing virus, FGV)及具有神经组织嗜性的ALV-K毒株JS15SG01同一进化分支上,与本研究其他7个ALV-K分离株的遗传进化关系较远。同时在针对ALV-K的gp85蛋白氨基酸位点突变分析中发现,GXJL01~GXJL04存在多个与FGV和JS15SG01参考株相似的氨基酸位点突变。本研究首次把地方黄羽鸡品种花鸡头部的肿块诊断为内皮血管瘤,且ALV-K为内皮血管瘤的主要相关病原,分离株GXJL01~GXJL04区别于现行华南地区ALV-K流行株且与FGV、JS15SG01等神经组织嗜性的毒株高度同源。
梁灿新郑小雪舒雪利周婉怡廖明曹伟胜
关键词:遗传进化分析
云南省某土杂鸡场禽白血病诊断及gp85基因序列分析
2022年
为诊断云南省石林县某土杂鸡养殖场鸡肿瘤疫病发病原因,分别采集病死鸡的肝脏、脾脏、肾脏、法氏囊等组织病料,提取核酸,采用RT-PCR、PCR方法进行ALV、CAV、MDV、FAdV、REV等核酸扩增,结果ALV核酸为阳性,其他病原核酸为阴性,阳性扩增产物经测序证实为ALV gp85基因。遗传进化分析结果表明:云南省石林县某土杂鸡场ALV阳性样品与其他8株ALV-J亚群毒株均在GroupⅠ分支上,同源性在75%~94.2%,其中与2010年国内分离得到的ALV-J亚群毒株KC711043-J同源性最高,为94.2%;与埃及J亚群毒株DQ316908-J同源性最低,为75%;与其他ALV-J亚群毒株同源性在90.1%~92.7%;与ALV A—E亚群毒株同源性在48.9%~49.6%。证实引起该养殖场鸡肿瘤疫病的主要病因为ALV-J亚群感染,为该场的疫病防控提供了依据。
张振兴吉涛董正勖胡骑王斌宋建领
关键词:禽白血病RT-PCRGP85基因J亚群
J亚型禽白血病病毒gp85基因的RT-RAA荧光法检测引物对、试剂盒及检测方法
本发明涉及分子生物学技术领域,特别是涉及J亚型禽白血病病毒gp85基因的RT‑RAA荧光法检测引物对、试剂盒及检测方法。本发明所述引物对包括正向引物和反向引物;所述正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,反向引...
谢青梅张新珩巫秀红陈丽怡姚梓淇
文献传递
GZAS20200701分离毒株gp85基因克隆与序列分析被引量:1
2021年
为了解贵州高脚鸡源的禽白血病病毒的gp85基因变异情况,试验采用ALV p27抗原ELISA试剂盒对贵州省高脚鸡的26份血样进行检测;并采用RT-PCR方法对其中一份血样进行ALV-A/B/J亚型鉴定,然后用gp85基因引物进行RTPCR扩增、克隆及测序分析。结果表明,26份高脚鸡血样ALV p27抗原ELISA检测阳性率为0(0/26);ALV-A/B/J引物RT-PCR扩增的条带为422 bp,与ALV-J目的大小相符;以ALV-J阳性样品为模板,用ALV-J-gp85引物扩增出大小为931 bp左右的产物,命名为GZAS20200701。经克隆测序后与ALV参考株进行比对分析,同源性分析中GZAS20200701与ALV-J亚型中的LYJ195株同源性最高,达99.5%,与ALV-B亚型中的GD08株同源性最低,为48.5%,与A、B、C、D、E、K亚型的同源性为48.5%~50.8%。系统进化树中GZAS20200701与ALV-J中的LYJ15株属于同一个分支,亲缘关系最近,说明GZAS20200701属于ALV-J。试验为贵州高脚鸡ALV-J-gp85基因的遗传变异情况提供数据,丰富了贵州地方品种鸡ALV-J-gp85的资料。
马燕温贵兰陈广张喜懿张小波巩雪竹韦秒粘王兴明
关键词:J亚型禽白血病病毒GP85基因
浙江省地方鸡种禽白血病毒抗原检测与部分分离株GP85基因序列分析被引量:3
2020年
为了解浙江地区地方品种鸡中J亚群禽白血病病毒(subgroup J avian leukosis vrius,ALV-J)的感染情况与流行毒株的分子特征,对浙江省部分地方品种鸡体内ALV的p27抗原进行了检测,从疑似感染鸡群中检测分离到5株ALV-J,并对其GP85基因进行PCR分子克隆和序列分析。研究结果显示:在检测的19个地方鸡品系中,所有品系的鸡样本都呈现抗原阳性,其中101系的抗体阳性率最高,母鸡阳性率为40.48%,公鸡阳性率为16.54%;126系次之,母鸡阳性率为28.87%,公鸡阳性率为3.30%;171系抗体阳性率最低,其母鸡阳性率仅为4.08%,公鸡的感染率为0。为了解地方鸡群中ALV-J的遗传变异,对分离到的5株ALV-J的GP85基因进行了分子克隆和序列分析。结果表明,5个分离毒株的GP85基因大小均为924 bp,与预期一致;本研究样品序列之间的核苷酸同源性为90.8%~98.5%,与原型毒株HPRS103核苷酸相似性为90.3%~97.0%,与国内其他分离株的同源性为86.5%~99.0%。分离株与福建(FJ201308株)和广东(WF13株)分离株的同源性最高。结果表明:浙江省大部分地方品种鸡都不同程度感染ALV-J,而且分离毒株已经发生了不同程度的变异,提示我们应加强浙江省地方品种鸡ALV的净化工作。
倪征陈柳华炯钢叶伟成云涛朱寅初张存
关键词:禽白血病病毒P27抗原GP85基因
ALV--K亚群gp85基因表达、多抗制备及其重组病毒部分特性研究
禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)是一类能导致禽类患多种肿瘤及免疫抑制性疾病的反转录病毒。根据其囊膜蛋白特性,目前ALV可分为A-K共11个亚群,其中ALV-J目前在国内最为常见。ALV-J...
吕璐
关键词:禽白血病病毒GP85基因多克隆抗体
一株J亚型禽白血病病毒的分离鉴定及其gp85基因的序列分析被引量:9
2019年
为确定安徽巢湖某地方品种养鸡场的疑似禽白血病(avian leukosis,AL)的病原,以DF-1细胞从肿瘤组织中分离病毒,采用RT-PCR方法进行鉴定,并对其感染细胞上清进行透射电镜观察。同时对送检病鸡的心、肝、脾及腺胃等进行组织病理学观察,最后将扩增出的gp85基因与GenBank收录的其他ALV序列进行比对分析。结果表明:PCR扩增产物大小约为928 bp,经测序证实为ALV gp85基因,将该分离株命名为AHCH-2018株。透射电镜观察到具有囊膜的大小约100 nm的病毒粒子。组织病理学结果显示,病鸡的心、肝、脾及腺胃中有大量成灶淋巴细胞增殖。遗传进化分析结果表明,分离株的gp85基因与多株ALV J参考毒株核苷酸序列的同源性为94.1%~99.5%,且与GD1401J株的核苷酸同源性最高,达99.5%,与A、B、C、D、E亚群同源性为46.5%~49.7%。该分离株与J亚群原型毒株处于同一大分支。本研究为了解安徽土鸡种群中禽白血病的分子流行病学特点提供了一定的数据参考。
王元红鲁智敏张学琪刘自敏胡子慧杨侃侃刘红梅潘玲彭开松李永东王勇
关键词:禽白血病组织病理学GP85基因
K亚群禽白血病病毒gp85基因的克隆表达及多克隆抗体的制备被引量:1
2019年
研究分别将K亚群禽白血病病毒(ALV-K)的gp85基因以及env基因分别克隆到原核表达载体pColdⅠ以及真核表达载体pcDNA3.1(+),测序验证后分别命名为pCold-K-gp85以及pcDNA3.1-K-env。pCold-K-gp85转化BL21大肠杆菌,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析发现,该Gp85重组蛋白主要表达在包涵体中。利用纯化后Gp85重组蛋白免疫BALB/c小鼠,制备了抗ALV-KGp85蛋白的多克隆抗体。间接免疫荧光以及Westernblot试验进一步证明,所获得的抗Gp85蛋白的多克隆抗体能特异性的识别转染pcDNA3.1-K-env质粒以及感染ALV-K的DF-1细胞内表达的Env蛋白。以上研究结果为进一步探究ALV-K宿主范围,细胞受体鉴定及亚群特异性诊断技术研究奠定了基础。
吕璐胡明月吕璐刘勇李拓凡谢菁刘勇刘勇秦爱建叶建强
关键词:GP85基因多克隆抗体

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崔治中
作品数:606被引量:2,573H指数:34
供职机构:山东农业大学
研究主题:马立克氏病病毒 禽白血病病毒 禽白血病 REV 鸡群
王笑梅
作品数:408被引量:987H指数:15
供职机构:中国农业科学院哈尔滨兽医研究所
研究主题:传染性法氏囊病病毒 鸡传染性法氏囊病病毒 IBDV 传染性法氏囊病 J亚群禽白血病病毒
高宏雷
作品数:239被引量:571H指数:12
供职机构:中国农业科学院哈尔滨兽医研究所
研究主题:传染性法氏囊病病毒 鸡传染性法氏囊病病毒 禽白血病病毒 单克隆抗体 J亚群禽白血病病毒
高玉龙
作品数:314被引量:793H指数:13
供职机构:中国农业科学院哈尔滨兽医研究所
研究主题:传染性法氏囊病病毒 J亚群禽白血病病毒 鸡传染性法氏囊病病毒 禽白血病 禽白血病病毒
王永强
作品数:243被引量:318H指数:9
供职机构:中国农业大学
研究主题:单克隆抗体 禽白血病病毒 传染性法氏囊病病毒 J亚群禽白血病病毒 传染性法氏囊病