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侵染蝴蝶兰的病毒检测及ToMMV蝴蝶兰分离物的cp基因序列分析
2025年
【目的】调查云南昆明市售蝴蝶兰的病毒病发生情况。【方法】利用建兰花叶病毒(cymbidium mosaic virus,CymMV)、齿兰环斑病毒(odontoglossum ringspot virus,ORSV)、番茄斑驳花叶病毒(tomato mottle mosaic virus,ToMMV)等病毒特异性引物对收集自昆明花卉市场的17份蝴蝶兰样品进行RT-PCR检测,并对扩增获得的相关病毒基因片段进行序列比对。【结果】在7份蝴蝶兰样品中检出ORSV、CymMV、番茄斑萎病毒(tomato spotted wilt orthotospovirus,TSWV)和ToMMV,检出率分别为35.29%、23.53%、5.88%和5.88%。其中,ORSV和CymMV为当前昆明市售蝴蝶兰的主要病毒,且2种病毒的复合侵染率为23.53%;ToMMV为首次在蝴蝶兰中检出。未检测到黄瓜花叶病毒(cucumber mosaic virus,CMV)、凤仙花坏死斑病毒(impatiens necrotic spot orthotospovirus,INSV)和番茄环纹斑点病毒(tomato zonate spot orthotospovirus,TZSV)。蝴蝶兰为新发现的ToMMV自然新寄主,人工接种条件下感染ToMMV的蝴蝶兰植株无明显症状。对获得的ToMMV蝴蝶兰分离物完整cp基因序列(GenBank登录号:PP445225)与国内外已报道的19个ToMMV分离物cp基因核苷酸序列进行比对,发现这20个ToMMV分离物的cp基因核苷酸序列一致性为98.12%~99.79%。通过构建ToMMV cp基因系统进化树,发现ToMMV蝴蝶兰分离物与ToMMV云南辣椒分离物、云南豌豆分离物的亲缘关系最近,与国外分离物亲缘关系较远。【结论】ORSV和CymMV为昆明市售蝴蝶兰携带的优势病毒。首次报道了ToMMV在蝴蝶兰及兰科植物中的侵染,携带有ToMMV的无症状蝴蝶兰可能造成病毒的远距离传播。
曹玉莲谢含雨谭冠林陈小姣李凡
关键词:病毒鉴定CP基因系统进化
玉米黄花叶病毒CP基因的原核表达及抗血清制备
2025年
0引言玉米黄花叶病毒(maize yellow mosaic virus,MaYMV)是马铃薯卷叶病毒属(Polerovirus)的新成员^([1])。MaYMV基因组全长5642nt,为正义单链RNA,包含7个开放阅读框(ORF),其中ORF3编码一个23.6kDa的蛋白,为MaYMV外壳蛋白(coat protein,CP)。2016年,我国首次报道了MaYMV病毒为害玉米造成黄花叶症状^([2]),随后在国外多地也报道了该病毒的危害.
史亚娟谢莉娜孙书豪崔荧钧李好海周涛陈琳琳施艳杨雪李洪连
关键词:外壳蛋白CP基因
基于CP基因的中国云南省烟草TMV群体遗传多样性分析
2024年
为探明云南烟草上烟草花叶病毒(tobacco mosaic virus,TMV)的群体遗传多样性特征,本研究使用TMV外壳蛋白(coat protein,CP)基因的特异性引物对采自云南各烟区的疑似烟草花叶病样品进行检测,通过克隆测序获得138个TMV CP基因序列,对其进行了一致性比对,及系统发育、错配分布、遗传变异、群体多样性等分析。变异分析显示,138条CP基因序列共有变异位点数122个,占总位点数的25.42%,变异类型只有核苷酸替换,核酸多样性为0.018,单倍型多样性为0.970;一致性比对结果显示,138条序列的核苷酸和氨基酸序列一致性均为96%~100%;重组分析未检测到重组信号;对来自云南烟草,NCBI上其他地区烟草及云南地区其他寄主的TMV分离物的CP基因进行系统发育分析,结果显示,所有TMV分离物在进化上可分为4个组,本试验获得的分离物分布在1、2、3组,其中只有来源昭通地区的分离物倾向于聚成簇,表明云南烟草TMV分离物的适应性进化受地理适应性所驱动,与寄主适应性基本无关;错配分布分析显示,云南烟草TMV群体呈多峰分布,表明该群体近期未经历群体扩张事件;群体间遗传分化分析结果表明,除昭通和曲靖烟草TMV群体与其他TMV群体之间很容易发生遗传漂变促使群体发生遗传分化外,其余大部分TMV群体之间的基因流都可以抵制遗传漂变。本研究首次报道了云南各烟区TMV分离物群体遗传变异情况,研究结果可为TMV的抗病育种和制定更为有效的防治策略提供重要参考。
赵正婷盖晓彤张俊蕾夏振远刘弟姜宁刘雅婷
关键词:烟草烟草花叶病毒CP基因
基于CP基因的云南烟草花叶病毒RT-LAMP快速检测体系的构建被引量:1
2024年
为快速检测云南烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV),本研究根据来自云南烟草TMV分离物的外壳蛋白(CP)基因保守核苷酸序列,设计了5组引物进行筛选,并采用单一变量法对反应的温度、时间、甜菜碱浓度、dNTPs浓度、Mg2+浓度及内、外引物浓度比等进行逐一优化,建立了云南烟草TMV逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测体系。结果表明,最佳引物组为第4组,最适反应温度为60℃,甜菜碱、dNTPs、Mg^(2+)的最佳反应浓度分别为0.6、0.4、2.0 mmol/L,最佳内、外引物浓度比为4∶1,最佳反应时间40 min。优化后的RT-LAMP经SYBR Green I染色可肉眼判断结果,特异性高,灵敏度是常规RT-PCR的10倍。RT-LAMP检测体系的建立为云南烟草TMV的检测提供了一种便捷、高效、可靠的方法。
赵正婷盖晓彤张俊蕾卢灿华姜宁刘雅婷
关键词:烟草花叶病毒CP基因RT-LAMP特异性
苹果坏死花叶病毒CP基因原核表达及其抗血清制备
2024年
苹果坏死花叶病毒(Apple necrotic mosaic virus,ApNMV)是近年新发现的病原物,并且是与我国苹果花叶病症状高度相关的重要病毒,进行ApNMV外壳蛋白(coat protein,CP)基因原核表达、制备多克隆抗血清,以建立快速、灵敏、准确的ApNMV常规检测方法尤为必要.通过设计特异性引物,以RT-PCR方法成功获得ApNMV CP基因序列,插入到原核表达载体pET-28a(+)中构建重组质粒,转化至大肠杆菌BL21(DE3),利用IPTG进行重组蛋白(含His-tag)诱导表达.SDS-PAGE和Western blot分析结果表明,CP基因在大肠杆菌中获得了高效表达,用Ni Sepharose 6 Fast Flow进行蛋白纯化,回收共得到重组蛋白2.4 mg.在屏障环境下免疫2只SPF级新西兰兔,制备出多克隆抗血清,稀释400倍后仍能与ApNMV阳性苹果叶片样品发生免疫反应.由此证明,本研究建立的ApNMV间接ELISA检测方法具有较好的灵敏性,检测效率高,能够用于田间大量样品ApNMV的诊断.
邢飞王红清李世访
关键词:外壳蛋白基因原核表达抗血清
拟康宁木霉CP基因家族的鉴定和功能研究
梁洁容
云南烟草TMV基于CP基因的RT-LAMP检测体系构建及群体遗传多样性分析
赵正婷
云南茉莉花病毒种类初步鉴定及CMV茉莉花分离物CP基因序列分析被引量:1
2024年
2021-2022年在云南省玉溪市和昆明市采集95份表现为花叶、黄化、褪绿、环斑嵌纹等症状的茉莉花病毒病叶片样品,利用菜豆金色花叶病毒属(Begomovirus)、黄症病毒属(Luteovirus)、马铃薯卷叶病毒属(Polerovirus)、马铃薯X病毒属(Potexvirus)、马铃薯Y病毒属(Potyvirus)、烟草花叶病毒属(Tobamovirus)、幽影病毒属(Umbravirus)等病毒属的通用引物以及黄瓜花叶病毒(cucumber mosaic virus,CMV)、茉莉花叶伴随病毒(jasmine mosaic-associated virus,JMaV)、茉莉C病毒(jasmine virus C,JaVC)、茉莉H病毒(jasmine virus H,JaVH)、茉莉T病毒(jasmine virus T,JaVT)、烟草线条病毒(tobacco streak virus,TSV)等病毒的特异性引物,对茉莉花进行上述病毒的RT-PCR检测。发现侵染云南省玉溪市元江县和昆明市呈贡区的茉莉花病毒有JaVT、JaVH、JMaV、JaVC和CMV五种,检出率分别为60.00%、57.89%、15.79%、13.68%和6.32%,JaVT和JaVH是侵染云南茉莉花的优势病毒;这5种病毒在元江县和呈贡区的茉莉花样品中均检测到,优势病毒均为JaVT和JaVH,但呈贡区的病毒检出率均低于元江县。病毒大多以复合侵染的形式对茉莉花产生危害,5种病毒共有11种复合侵染类型,JaVC和CMV通常与JaVH、JaVT等病毒复合侵染,JaVH+JaVT复合侵染类型检出率最高,为26.32%。本研究首次在茉莉花上发现了CMV的感染,为了探明云南CMV茉莉花分离物与来自其他地区和寄主植物CMV分离物的分子变异和系统发育情况,将获得的CMV茉莉花分离物(CMV-YYJMLH)的CP基因序列(GenBank登录号:OQ870529)与GenBank中报道的其他35个CMV分离物CP基因序列进行比对分析,其核苷酸序列一致性为77.17%~99.09%,其中CMV-YYJMLH与CMV云南辣椒分离物(GenBank登录号:MT786689)的一致性最高,为99.09%。将不同来源的CMV分离物CP基因序列构建系统发育树,结果显示,CMV-YYJMLH分离物属于亚组I中的IB亚组,该分离物与CMV云南辣椒分离物亲缘关系最近。这是�
张天毅余代宏曹玉莲鲁慧兰平秀李梅会谭冠林李凡
关键词:茉莉花病毒鉴定黄瓜花叶病毒
一种对AMV致病力具有调控作用的WCMV-CP基因及其应用
本发明提供了一种对AMV致病力具有调控作用的WCMV‑CP基因及其应用,属于植物病害防治技术领域。本发明提供了一种对AMV致病力具有调控作用的WCMV‑CP基因,所述WCMV‑CP基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1...
梁巧兰陈应娥田龙周鑫
山西草莓斑驳病毒cp基因克隆及遗传多样性分析被引量:1
2023年
旨在研究草莓斑驳病毒(SMoV)在山西省的分布、结构变异及遗传多样性。从山西省7个主要草莓种植区随机采取159份草莓叶片进行RT-PCR病毒检测,结合在线数据库,使用MEGA5构建系统发育树,采用SDTv 1.2软件进行序列相似性分析,运用DnaSP v5.10软件分析cp基因的遗传多样性,采用RDP v.4.31软件检测SMoV中的重组事件。RT-PCR检测后发现,从山西省各地区收集的159份草莓叶片中有65份样品呈阳性,检出率为38.46%。这些阳性样品经过分离、测序、克隆,获得16个SMoV分离物。结合在线的19个SMoV分离物系统进化树分析显示,35个SMoV分离物被分成两组,组1包含28个分离物,均来自中国;组2包含7个分离物,分别来自加拿大、日本和美国。经选择压分析和中性检验,组1和组2 SMoV分离物之间存在显著的遗传差异,且中性检验均为负值,SMoV种群呈扩张状态。序列相似性分析表明,35株分离物的核苷酸同一性为81.34%~100%,氨基酸的一致性为94.77%~100%,呈现出较高的相似性。可见:SMoV存在较高的遗传变异,负选择压力可能是导致SMoV遗传多样性的原因。
陈伟李志卫玉山江·麦麦提聂园军李亚娟赫娟柴敏罗永平
关键词:CP基因

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洪霓
作品数:214被引量:644H指数:19
供职机构:华中农业大学
研究主题:病毒 分离物 柑橘 病毒病 砂梨
王国平
作品数:526被引量:1,825H指数:25
供职机构:华中农业大学植物科学技术学院
研究主题:棉花 病毒 分离物 柑橘 移栽
韦传宝
作品数:107被引量:275H指数:8
供职机构:皖西学院
研究主题:抗血清制备 原核表达 CP基因 出血毒素 精氨酸酯酶
郑银英
作品数:80被引量:204H指数:7
供职机构:石河子大学生命科学学院
研究主题:加工番茄 棉花 原核表达 DELLA蛋白 CP基因
郭宝太
作品数:85被引量:451H指数:11
供职机构:青岛农业大学
研究主题:花生 条斑紫菜 马铃薯卷叶病毒 离体诱变 CP基因