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高分辨率熔解曲线检测三种虫媒病毒方法的建立: 2025年; 本文建立三种虫媒病毒(登革病毒、寨卡病毒、基孔肯雅病毒)高分辨率熔解曲线检测方法。分别针对三种虫媒病毒设计特异性引物,建立高分辨率熔解曲线检测方法,并对该方法的特异性、检测下限、重复性、符合率进行评价。建立的高分辨率熔解曲线检测方法,重复性良好,寨卡病毒的检测下限为1.0×10^(3)拷贝/mL,而登革病毒和基孔肯雅病毒的检测下限均为1.0×10^(2)拷贝/mL,能特异性地扩增这三种虫媒病毒,而对其他可致发热反应的病原体,包括甲型H1N1流感病毒、甲型H3N2流感病毒、乙型流感病毒、新型冠状病毒等无特异性扩增;盲样检测结果符合率达100%。本研究建立的高分辨率熔解曲线检测方法灵敏度高、特异性好、重复性好,可为这三种虫媒病毒检测提供可行的方法。; 徐君婷许显芳周海棠汪海波陈新彬; 关键词：特异性引物虫媒病毒高分辨率熔解曲线

基于高分辨率熔解曲线分析技术鉴别丹参及其混伪品: 2024年; 本研究旨在建立一种基于高分辨率熔解曲线(high resolution melting,HRM)技术高效鉴别丹参及其混伪品的方法。研究采用硅胶吸附柱法纯化基因组DNA,并针对鼠尾草rDNA ITS2区序列设计特异性引物,通过依次对引物浓度、DNA模板浓度、退火温度和循环次数进行系统优化,建立了ITS2熔解曲线模型,并采用HRM技术对不同来源丹参及其混伪品(甘西鼠尾草、云南丹参和鼠尾草)进行鉴别。结果表明,在最适引物浓度为2.5~10.0μmol/L,DNA模板浓度为26.95~53.90 ng/μL,退火温度为58℃,循环数为35~45时可获得稳定、均一、特异的PCR扩增曲线。该方法通过对比熔解温度(Tm)即可实现对丹参与甘西鼠尾草、云南丹参及鼠尾草的真伪鉴别,在丹参及其伪品的快速检测方面具有独特的优势。; 赵景莹张玉娟柳展基赵方洲汤慧丽王宪昌朱彦威田北京韩金龙邬爽高春华单成钢; 关键词：高分辨率熔解曲线分子鉴定丹参伪品

高分辨率熔解曲线技术在定量检测中的应用进展被引量：1: 2024年; 为保障人民合法权益和生命健康,食药安全、临床诊断等各领域的检测手段必不可少。高分辨率熔解曲线技术是一种基于序列中单核苷酸熔解温度不同而形成不同形态熔解曲线的基因分析技术。该技术具有灵敏度高、成本低、通量高、速度快、结果准确等优点,被广泛应用于药材、食品及微生物鉴定等相关领域。对高分辨率熔解曲线技术定量检测鉴定相关应用进行梳理和综述,以期进一步规范和推动该技术的发展,拓宽其应用范围。; 王心洁郭晓青董玉琢王雪燕陈欣张颜王晓玥; 关键词：高分辨率熔解曲线分子鉴定

一种铁皮石斛高分辨率熔解曲线鉴别引物、应用及鉴别方法: 本发明一种铁皮石斛高分辨率熔解曲线鉴别引物、应用及鉴别方法，上游引物TPHML‑F的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，下游引物TPHML‑R的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。本鉴别引物可用于鉴别铁皮石斛药材...; 李振皓李明焱王瑛李振宇徐靖史月姣李建淼

基于高分辨率熔解曲线检测MD肿瘤微卫星不稳定性: 2024年; 本研究旨在通过高分辨率熔解曲线(high-resolution melting,HRM)方法检测马立克病(Marek′s disease,MD)肿瘤中存在的微卫星不稳定现象(microsatellite instability,MSI)。通过临床症状、病理剖检、组织病理学、PCR及测序确定为马立克病。采集5只发病鸡的肌肉、肝、脾、血液及肿瘤组织,提取DNA,采用15对扩增微卫星DNA序列的引物进行HRM检测,得到归一化处理的差异熔解曲线,比较分析各组织熔解曲线的差异,分析15个微卫星标记是否存在基因突变(即MSI)。结果表明,发病鸡的各种临床、病理表现符合为马立克病的特征,病毒meq基因序列与近年来国内流行的MDV强毒株有较高的同源性。HRM分析结果显示,MD发病鸡的肌肉、肝、脾、血液、肿瘤组织中微卫星标记PCR扩增后的熔解曲线存在明显的差异,即存在MSI现象,而且不同的病鸡个体和不同的微卫星标记发生MSI的频率不同。15个微卫星标记在5只鸡的病料中存在MSI的微卫星标记的个数分别为14、7、5、3和1。在15个微卫星标记中,MCWO200、MCW0220这两个微卫星标记在所有的病鸡中都存在MSI,而ADL0158微卫星标记在所有的病鸡中都不存在MSI。通过非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和测序分析进一步证明这些微卫星PCR扩增片段确实存在片段大小不同,碱基序列中存在微卫星重复单位的增多、减少或基因片段的插入或缺失。结果提示,通过HRM分析可以检测MD肿瘤中的MSI现象,是一种灵敏、准确、简便、高通量的方法。; 史泽风李翎旭郭译文廖云孙昭宇王来荣杨德吉姚大伟; 关键词：高分辨率熔解曲线马立克病微卫星不稳定性肿瘤

高分辨率熔解曲线检测结核分枝杆菌对氧氟沙星耐药性研究: 2024年; 评价高分辨率熔解曲线法在结核分枝杆菌氧氟沙星耐药性检测的有效性。采用传统比例法、DNA测序法、高分辨率熔解曲线法对84株结核分枝杆菌临床分离株进行氧氟沙星耐药性检测,分别以药敏结果和DNA测序结果为参照,应用卡方检验分析各检测结果之间的差异性,Kappa检验分析检测结果一致性。药敏结果显示,12株菌对氧氟沙星耐药,72株敏感。DNA测序结果显示,10株菌存在gyrA基因耐药相关突变,74株菌不存在gyrA基因耐药相关突变。高分辨率熔解曲线检测结果显示,有14株耐药株,70株敏感株。以比例法药敏结果为参照,DNA测序检测菌株耐药性的敏感性为83.3%、特异性为100%、符合率为97.6%,检测结果具有高度一致性;高分辨率熔解曲线法检测菌株耐药性的敏感性为75%、特异性为93.1%、符合率为90.5%,检测结果具有中度一致性。以DNA测序结果为参照,高分辨率熔解曲线法检测gyrA基因耐药突变的敏感性为80%,特异性为91.9%,符合率为90.4%,检测结果具有中度一致性。本研究结果表明高分辨率熔解曲线法对结核分枝杆菌氧氟沙星耐药性检测的效能良好,可用于氧氟沙星耐药结核分枝杆菌的快速辅助筛查,为早期治疗方案制定提供重要依据。; 杨彩虹张萍买买提艾力·艾合木提黄巧玲王震曹旭东; 关键词：结核分枝杆菌耐药性高分辨率熔解曲线氧氟沙星

高分辨率熔解曲线快速检测结核分枝杆菌对链霉素耐药情况的研究被引量：2: 2024年; 探讨高分辨率熔解曲线(HRM)技术检测结核分枝杆菌对链霉素耐药性的可行性。用传统药物敏感性试验进行结核分枝杆菌链霉素耐药性检测;以Rpsl和rrs的耐药决定区为靶点设计引物进行HRM分析,判断菌株是否对链霉素耐药;以药敏结果为标准,应用SPSS17.0分析两种检测结果之间的符合率;Kappa检验分析两种结果的一致性。药敏结果显示,84株菌株中有20株对链霉素耐药,64株为敏感株;HRM检测结果显示,24株菌株对链霉素耐药,60株为敏感株;以药敏结果为参照,HRM检测结核分枝杆菌对链霉素耐药性的敏感性为75%,特异性为85.9%,经Kappa检验显示,两种方法检测结果具有中度一致性。本研究结果表明HRM可快速检测结核分枝杆菌对链霉素的耐药性,具有较好的灵敏度,在耐药结核病的早期辅助诊断方面具有一定的应用价值。; 杨彩虹张萍买买提艾力·艾合木提黄巧玲王震曹旭东; 关键词：结核分枝杆菌耐药性高分辨率熔解曲线链霉素

基于高分辨率熔解曲线的GSTM1基因分型方法的建立与评价: 2024年; 目的:采用高分辨率熔解曲线(High Resolution Melting,HRM)法检测GSTM1基因多态性,并评价其准确性,以期为临床抗肿瘤药物与抗结核药物的临床个体化应用提供参考。方法:2019年3月—2019年10月就诊于四川省人民医院等3家医疗机构的94例患者的外周静脉血样本,纳入标准为:年龄为16—88周岁;签署知情同意书;留存血液样本的体检患者。采用离心柱法提取其全血基因组DNA,对提取后的DNA进行浓度及纯度检测,并采用HRM法对产物进行分析;同时使用Stata17软件采取随机种子从GSTM1 null和GSTM1 non-null共2种基因型样本中随机选取33例样本使用焦磷酸测序法进行准确性验证。结果:94例样本DNA浓度范围为10~60 ng·μL^(–1),纯度OD260/280位于1.6~2.0之间。所有样本扩增反应均正常,其中37例患者(39.36%)检测到GSTM1 non-null基因型,57例患者(60.64%)检测到GSTM1 null基因型。随机选取的33例样本使用焦磷酸测序进行验证,17例患者(51.52%)检测到GSTM1 non-null基因型,16例患者(48.48%)GSTM1 null基因型。与焦磷酸测序法结果进行比对,HRM法的结果与之完全相符。结论:该研究建立了HRM方法检测GSTM1的实验体系和方法,用于检测GSTM1基因位点的2种不同基因型,准确性高,为临床肿瘤和结核等患者用药方案的优化提供了一种快速、准确的药物基因检测方法,对于抗肿瘤药物与抗结核药物的临床应用具有重要的指导意义。; 白妞妞李星星何霞陈维红童荣生陈维红童荣生李志敏高伟祺王菲张敏; 关键词：高分辨率熔解曲线 GSTM1 药物基因基因分型

一种AIE荧光分子在实时荧光定量PCR或高分辨率熔解曲线分析中的应用: 本发明公开了一种AIE荧光分子在实时荧光定量PCR或高分辨率熔解曲线分析中的应用；所述AIE荧光分子选自式(1)、式(2)结构中的任意一种。本发明AIE荧光分子用于实时荧光定量PCR和高分辨率熔解曲线分析，集灵敏度高、抗...; 唐本忠蓝琳王志明刘勇龚晚君

以高分辨率熔解曲线为基础的新型冠状病毒5种点突变S基因鉴别试剂盒及其鉴别方法: 本发明公开了一种以高分辨率熔解曲线为基础的新型冠状病毒5种点突变S基因鉴别试剂盒及其鉴别方法，属于生物医药领域，特点是根据新型冠状病毒S基因的5个不同突变位点设计扩增引物，通过优化的高分辨率熔解曲线反应体系鉴别不同位点突...; 滕新栋刘迪侯伟陈晓光张娟徐翮飞徐颖

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