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酵母双杂交系统被引量：6: 2003年; 就酵母双杂交系统的基本原理、主要进展和在蛋白质组研究中的应用作一综述。; 吴志聪王一飞; 关键词：酵母双杂交系统蛋白质组

酵母双杂交系统被引量：4: 2000年; 酵母双杂交系统是研究细胞内蛋白质之间相互作用的一种分子遗传学技术,用已知的蛋白质作为诱饵来筛选其可以相互作用的伙伴蛋白。本文简要叙述了酵母双杂交系统的原理、基本方法,以及这个技术的发展和应用。; 姜先荣杨杰任克勤; 关键词：蛋白质酵母双杂交系统

利用酵母双杂交系统筛选甜菜BvFVE1互作蛋白: 2025年; 【目的】为了探究甜菜WD-40重复蛋白MSI4(BvFVE1)在调控甜菜生长发育中的潜在功能。【方法】以甜菜品种‘KWS9147’幼苗为材料提取RNA,构建的酵母cDNA文库作为猎物蛋白。利用酵母双杂交系统鉴定酵母cDNA文库中与BvFVE1相互作用的蛋白。【结果】通过含有X-α-Gal四缺培养基筛选后,共鉴定出40种可能与BvFVE1相互作用的蛋白。对这些蛋白功能进行注释发现BvFVE1互作蛋白主要参与mRNA降解代谢、蛋白质翻译、细胞骨架的形成等过程。【结论】这些结果说明BvFVE1可能参与染色质重塑相关的基因表达,为今后探索BvFVE1的生物学功能提供了分子基础。; 徐蕊邳植柯立勋张春雪孙月; 关键词：甜菜酵母双杂交系统

酵母双杂交系统及其构建方法与用途: 本发明涉及基因工程和药物筛选技术领域，公开了一种酵母双杂交系统的构建方法，该酵母双杂交系统的构建方法为先提取SARS‑CoV‑2的Spike蛋白基因及人类的ACE2基因，再将Spike蛋白基因、ACE2基因分别克隆至酵母...; 郑俊霞黄钰景祖敦涛田陈婧杨健妮陈文霖段思妍严顺欣袁钰嘉谢俊涛于新范红霞周海波孙平华

利用酵母双杂交系统筛选玉米ZmPRR73的互作蛋白: 2024年; 为了阐明 ZmPRR73基因的生物学功能,构建诱饵表达载体pGBKT7-ZmPRR73,利用酵母双杂交技术,从长日照光照环境诱导的热带玉米自交系的cDNA文库中筛选与ZmPRR73互作的蛋白。结果显示:构建的诱饵载体pGBKT7-ZmPRR73对酵母菌株无毒性,且对报告基因无自激活活性,共鉴定出12个与ZmPRR73互作的候选蛋白。生物信息学分析表明,这些候选互作蛋白的功能涉及植物的转录调控、离子跨膜转运的调节、信号转导、电子传递链等多个方面,推测ZmPRR73蛋白与以上蛋白互作参与多个信号转导和代谢途径,研究结果补充和完善了ZmPRR73蛋白参与的调控途径,为进一步研究生物钟核心元件ZmPRR73的分子功能提供了新的分子证据。; 王盼盼王雷立张严玲刘青青董柯清李安然王翠玲; 关键词：玉米酵母双杂交生物钟

利用酵母双杂交系统筛选花生Ah SAP1的互作蛋白: 2024年; 【目的】种子大小直接影响花生的产量。前期通过QTL定位获得调控花生种仁大小的关键转录因子AhSAP1,构建花生胚酵母双杂交cDNA文库,并以AhSAP1为诱饵进行酵母双杂交筛选互作蛋白,分析候选互作蛋白基因的时空表达特征,为深入研究AhSAP1调控花生种仁发育的分子机制奠定基础。【方法】用SMART(switching mechanism at 5′end of the RNA transcript)法构建花生胚大肠杆菌cDNA文库并进行鉴定;构建诱饵载体pGBKT7-AhSAP1,并鉴定其对酵母细胞的毒性以及自激活性。将花生胚cDNA文库质粒与诱饵质粒pGBKT7-AhSAP1共转Y2H Gold酵母菌株,筛选长势较好且呈蓝色的阳性菌落,测序比对,获得候选互作蛋白基因序列,预测生物学功能。利用RNA-seq明确候选互作蛋白基因在花生不同组织器官、受外源植物激素诱导及低钙胁迫诱导下的表达特征。根据功能注释结果,选取可能参与植物种子发育的候选因子,扩增其CDS全长序列,构建到靶标载体pGADT7后,分别与pGBKT7-AhSAP1共转化酵母细胞进行点对点酵母双杂交互作验证。【结果】花生胚大肠杆菌次级cDNA文库滴度为1.05×10^(8) cfu/mL,重组率为98%,平均插入片段大小约1000 bp,文库质量较高;成功构建酵母双杂交诱饵载体pGBKT7-AhSAP1,在酵母细胞中没有自激活性且对酵母菌没有毒性;筛选得到68个酵母阳性克隆,经序列相似性比对,去除重复,共获得60个候选互作蛋白,主要参与能量产生与代谢、翻译、核糖体结构和生物发育、转录、信号转导机制、翻译后修饰、无机离子运输和代谢、染色质结构等。选取12个候选互作蛋白与AhSAP1进行一对一酵母双杂交验证,有8个候选互作蛋白与AhSAP1发生互作。【结论】成功构建了花生胚发育不同时期的混合cDNA文库,筛选出60个与AhSAP1互作的候选互作蛋白,主要涉及能量产生与代谢、翻译、核糖体结构和生物发生、转录、信号转导机�; 朱艳婷党浩牛思杰林婧怡杨华杨强张冲蔡铁城庄伟建陈华; 关键词：花生种子大小酵母双杂交

利用酵母双杂交系统筛选与辣椒轻斑驳病毒126 kDa蛋白互作的辣椒寄主因子: 2024年; 【目的】辣椒轻斑驳病毒(pepper mild mottle virus,PMMoV)是世界范围内危害辣椒的主要病毒之一。126 kDa蛋白是PMMoV编码的重要致病因子,但致病机制目前仍不清楚。本研究旨在筛选与126 kDa蛋白互作的辣椒寄主因子,为解析PMMoV的致病机制提供理论依据。【方法】首先,通过同源重组法构建诱饵载体pGBK-126 kDa;并以辣椒叶片为试验材料,利用Trizol法提取辣椒叶片总RNA,制备辣椒酵母cDNA文库;之后,使用pGBK-126 kDa对cDNA文库进行筛选,并通过NCBI和Uniprot等对筛选结果进行序列比对和生物信息学功能分析,根据比对分析结果,选取可能参与到植物抗病通路的寄主因子,克隆其全长CDS构建到pGADT7载体,酵母双杂交(Y2H)、双分子荧光互补(BiFC)和荧光素酶互补(LCI)进一步验证126 kDa与寄主因子之间的互作;最后,通过瞬时过表达寄主蛋白分析其在PMMoV侵染过程中的作用。【结果】提取获得高质量辣椒RNA,无降解;获得高质量酵母cDNA文库,成功构建诱饵质粒pGBK-126 kDa,筛选得到与126 kDa蛋白互作的辣椒寄主因子18个;生物信息学分析结果显示,18个寄主因子广泛参与到植物酶系统、物质及能量代谢调节过程、DNA结合转录过程、激素合成过程以及防御响应等多个通路;选取的其中3个寄主因子(LA2、PDHE1、BXL1)在一对一酵母双杂交互作验证中均存在与126 kDa的相互作用,表明初筛的结果可靠;通过BiFC和LCI进一步验证了126 kDa与BXL1之间体内外互作;瞬时过表达BXL1发现PMMoV的侵染受到了显著抑制。【结论】成功构建了pGBK-126 kDa诱饵质粒,基于该质粒对酵母cDNA文库进行筛选得到18个互作的寄主因子,广泛涉及植物生命活动过程中的多个通路,筛选结果验证可靠,其中,BXL1存在与126 kDa的体内外相互作用,并能够抑制PMMoV的侵染。研究结果可为深入探究PMMoV的侵染机制提供良好的理论和材料基础。; 何勇范晓珠陈新月段书静胡婷婷谢如雪王宇晴陈静; 关键词：辣椒轻斑驳病毒辣椒酵母双杂交致病机制

利用酵母双杂交系统筛选水稻中与OsCRK5互作蛋白被引量：1: 2023年; 水稻是重要的粮食作物,研究水稻生长发育调控机制可为水稻品种改良奠定理论基础。钙依赖蛋白激酶(calcium dependent protein kinases,CDPKs)是植物中重要的蛋白激酶,参与植物生长发育以及对环境反应的应答。水稻中的CRK5(CDPKrelated kinase 5)在蛋白序列和结构上与CDPK高度同源。为进一步研究OsCRK5在水稻干旱反应中的功能,本研究利用酵母双杂交筛库技术筛选了OsCRK5的互作蛋白。首先将OsCRK5的1-1332 bp片段克隆至pGBKT7载体中,获得诱饵载体pGBKT7-OsCRK5,经测序无误后,转化至酵母菌株Y2H Gold中。在营养缺陷培养基中观察到重组蛋白不具有毒性作用及自激活活性,同时利用Western blot分析重组蛋白的表达。进一步利用水稻cDNA文库筛选OsCRK5的互作蛋白,共得到77个阳性克隆。功能预测结果显示,互作蛋白涉及蛋白质合成、贮存和降解过程、转录调控、植物细胞生长和分裂过程、能量代谢和细胞代谢等方面的功能。最后,从阳性克隆中选取参与植物干旱胁迫应答的两个蛋白OsWR1和OsDi19-1,利用酵母双杂交和双分子荧光互补的方法验证其与OsCRK5的相互作用。研究结果为水稻抗旱的遗传改良奠定了基础。; 王子颖龙晨洁范兆宇张蕾; 关键词：水稻酵母双杂交 CDNA文库干旱胁迫

基于酵母双杂交系统验证连翘FsWRKY4/FsMAPK3蛋白互作的方法: 本发明涉及基于酵母双杂交系统验证连翘FsWRKY4/FsMAPK3蛋白互作的方法，即通过酵母双杂交验证两蛋白互作，过程为：克隆获得连翘<I>FsWRKY4</I>、<I>FsMAPK3</I>基因序列，并通过一步克隆法构...; 侯典云张佳琪吕淑芳郭菡刘浩王婷

利用酵母双杂交系统筛选金针菇DASH型隐花色素互作蛋白被引量：1: 2023年; 提取金针菇(Flammulina filiformis)单核体菌株Dan 3菌丝的总RNA,分离纯化mRNA,合成双链cDNA,依次构建酵母双杂交初级和次级cDNA文库。通过酶切连接法构建诱饵载体pGBKT 7-CRY,其无自激活活性和毒性,与构建的次级cDNA文库共转化酵母感受态细胞,筛选与金针菇DASH型隐花色素(FfCRY-DASH)互作的蛋白,对筛选到的6个蛋白进行回补验证,最终发现一个与金针菇DASH型隐花色素互作的蛋白。; 李婧霆陆欢李巧珍徐珍宋春艳尚晓冬王瑞娟刘建雨; 关键词：金针菇酵母双杂交

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