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组织荧光 定量聚合酶链反应 联合多方法学在淋巴结结核诊断中的临床应用 2025年 荧光 定量聚合酶链反应 (quantitative polymerase chain reaction,q-PCR)联合多方法学的诊断效能。方法 收集2023年1月至12月期间深圳市第三人民医院收治并确诊为淋巴结结核患者共计77例的临床资料,并同时进行组织q-PCR、组织结核分枝杆菌/利福平耐药检测(GeneXpert mycobacterium tuberculosis/rifampicin resistance test,GeneXpert MTB/RIF)、全血γ干扰素释放试验(interferon-gamma release assay,IGRAs)、组织抗酸染色、痰液MTB培养、组织病理苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色等方法的诊断阳性率比较分析。结果 在77例临床诊断为淋巴结结核患者中,组织病理HE染色诊断率为49.35%,组织q-PCR检测阳性率为75.32%,组织抗酸染色阳性率为25.97%,组织GeneXpert MTB/RIF检测阳性率为50.64%,痰液MTB培养阳性为23.37%,全血IGRAs检测阳性率为71.42%,血清结核抗体MMTB-Ab检测阳性率为64.93%。组织q-PCR检测方法阳性率显著高于组织抗酸染色(χ^(2)=37.512,P<0.001);组织q-PCR与组织GeneXpert MTB/RIF(χ^(2)=10.055,P<0.001)、组织病理HE染色法(χ^(2)=11.063,P<0.001),以及组织q-PCR与痰培养法比较(χ^(2)=41.565,P<0.001)比较差异具有统计学意义。组织q-PCR、GeneXpert MTB/RIF和IGRAs方法三者联合应用时,诊断阳性率高达90.90%。结论 q-PCR检测技术联合常规方法可有效提高FFPE组织中淋巴结结核的诊断率,对肺外结核病理组织样本的快速诊断具有临床实用价值。关键词：淋巴结结核 病理诊断 多重实时荧光 定量聚合酶链反应 对儿童社区获得性肺炎病原学的诊断价值 2025年 荧光 定量聚合酶链反应 (qPCR)对儿童社区获得性肺炎(CAP)病原学的诊断价值。方法选取2024年1-6月来该院就诊的120例CAP患儿作为研究对象,收集所有研究对象一般资料,并采集痰标本、血清标本、咽拭子标本、肺泡灌洗液标本,分别进行痰培养、免疫荧光 、单重PCR、多重qPCR检测,比较不同检测方法病原学检测结果的差异。结果痰培养检测CAP患儿细菌阳性率为17.50%(21/120);免疫荧光 检测CAP患儿肺炎支原体阳性率为55.83%(67/120),肺炎衣原体阳性率为7.50%(9/120);单重PCR检测CAP患儿细菌阳性率为30.83%(37/120),肺炎支原体阳性率为64.17%(77/120),肺炎衣原体阳性率为10.83%(13/120);多重qPCR检测CAP患儿细菌阳性率为36.67%(44/120),肺炎支原体阳性率为65.83%(79/120),肺炎衣原体阳性率为10.83%(13/120)。多重qPCR检测CAP患儿细菌阳性率高于痰培养,差异有统计学意义(P<0.05);多重qPCR检测与免疫荧光 检测CAP患儿肺炎支原体和肺炎衣原体阳性率比较,差异均无统计学意义(P>0.05);多重qPCR检测与单重PCR检测CAP患儿细菌、肺炎支原体和肺炎衣原体阳性率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。多重qPCR检测与痰培养、免疫荧光 、单重PCR检测阳性率均一致性良好(Kappa值>0.400,P<0.05)。结论多重qPCR对儿童CAP病原学诊断有积极意义,有较高的阳性率,有助于指导临床医生合理用药,且较单重PCR有更高的检测效率,有利于缩短临床诊疗流程。关键词：儿童 社区获得性肺炎 病原学诊断 痰培养 免疫荧光 荧光 定量聚合酶链反应 技术在快速产前诊断常见染色体非整倍体中的临床应用价值2025年 荧光 定量聚合酶链反应 (QF-PCR)技术在快速产前诊断常见染色体非整倍体中的临床应用价值,为染色体非整倍体的诊断提供参考。方法 选取2020年8月-2024年1月在赣州市妇幼保健院进行产前诊断的645例高危孕妇,进行QF-PCR技术检测和染色体核型分析,比较两种方法的检测报告时间与结果。以染色体核型分析结果为金标准,统计QF-PCR技术的诊断灵敏度、特异度、准确率,并比较不同产前诊断指征诊断染色体非整倍体的阳性率。结果 在645例孕妇中,QF-PCR技术检测报告时间为(2.53±0.35)d,染色体核型分析报告时间为(22.14±2.29)d, QF-PCR技术检测报告时间明显短于染色体核型分析,差异有统计学意义(t=214.985,P<0.05)。QF-PCR技术检测出染色体非整倍体31例,阳性率为4.81%,其中21-三体综合征18例(占58.06%),18-三体综合征4例(占12.90%),性染色体异常9例(占29.03%),包括47,XXX 2例,47,XXY 5例,45,X 1例,嵌合体45,X[22]/46,XY[26] 1例,检测结果与染色体核型分析结果一致。以染色体核型分析结果为金标准,QF-PCR技术诊断常见染色体非整倍体的灵敏度、特异度、准确率均为100.00%。单项指征中检出染色体非整倍体阳性率前3位分别为:无创产前检查(NIPT)异常组(26.47%)>夫妇一方染色体异常组(11.11%)>胎儿超声异常组(6.59%);两项指征检出染色体非整倍体阳性率(21.74%)明显高于单项指征(4.18%),差异有统计学意义(χ^(2)=14.947,P<0.05)。对31例染色体非整倍体孕妇进行随访,其中1例染色体核型分析结果为47,XXX,2例染色体核型分析结果为47,XXY的孕妇选择继续妊娠,其余孕妇均选择终止妊娠。结论 QF-PCR技术可在产前快速诊断常见染色体非整倍体,且产前诊断指征中以NIPT异常和夫妇一方染色体异常的常见染色体非整倍体检出率最高。关键词：染色体核型分析 产前诊断 染色体非整倍体 荧光 定量聚合酶链反应 检测脑脊液中结核分枝杆菌DNA对鉴别诊断结核性脑膜炎的应用价值分析2024年 荧光 定量聚合酶链反应 (polymerase chain reaction,PCR)检测脑脊液中结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis,MTB)DNA对鉴别诊断结核性脑膜炎(tuberculous meningitis,TBM)的应用价值。方法 选择2019年7月—2021年6月于安陆市普爱医院就诊的存在脑膜刺激征的80例患者作为研究对象,所有患者均经MTB培养后明确诊断,将确诊为TBM的37例患者分入脑膜炎组,疑似TBM的18例患者分入疑似组,非TBM的25例患者分入非TBM组,对3组患者行腰椎穿刺,留取5 m L脑脊液及时送检,分别行MTB培养法、抗酸染色涂片法、荧光 定量 PCR检测。对比3种检测方法在MTB中的阳性检出率,对比脑膜炎组与疑似组患者MTB的DNA检测数值。结果 脑膜炎组应用荧光 定量 PCR检测MTB的阳性检出率高于疑似组,差异有统计学意义(P<0.05);脑膜炎组与疑似组采用MTB培养法、抗酸染色涂片法的MTB阳性检出率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。脑膜炎组患者MTB的DNA检测数值为(4.71±0.97),疑似组患者MTB的DNA检测数值为(4.35±0.83),2组患者MTB的DNA检测值比较,差异无统计学意义(t=1.351,P=0.183)。结论 应用荧光 定量 PCR检测脑脊液中MTB的DNA,有助于判断TBM患者病情严重程度,在鉴别诊断TBM中具有较高的临床应用价值,为临床诊疗提供新思路及方向,值得临床推广应用。关键词：结核性脑膜炎 脑脊液 结核分枝杆菌 荧光定量聚合酶链反应 多重荧光 定量聚合酶链反应 法检测肉制品中的3种食源性致病菌 被引量：1 2024年 荧光 定量聚合酶链反应 法(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)快速检测肉制品中沙门氏菌、单增李斯特菌、大肠杆菌O157:H73种食源性致病菌的方法。方法根据沙门氏菌的invA基因、单增李斯特菌的hemolysin基因、大肠杆菌O157:H7的rfbE基因序列分别设计特异性引物及探针,通过优化反应 体系,测定其灵敏度、特异性和重复性,建立了可同时检测上述3种食源性致病菌多重qPCR方法。结果该方法只扩增3种靶细菌,对其他供试菌不扩增;沙门氏菌、单增李斯特菌、大肠杆菌O157:H7的检出限分别为10^(1)、10^(2)、10^(2)拷贝数/μL,并且拥有良好的重复性和特异性。人工污染的猪肉样品经SLE培养基富集8 h后,分别可以检测到初始菌液浓度为1.56×10^(2)CFU/25 g的沙门氏菌,2.13×10^(2)CFU/25 g的单增李斯特菌,2.32×10^(2)CFU/25 g的大肠杆菌O157:H7。结论所建立的多重qPCR灵敏度高、特异性强、重复性好,可同时检测肉制品中沙门氏菌、单增李斯特菌和大肠杆菌O157:H73种食源性致病菌,在提高食品安全和保护人类健康方面有重要意义。关键词：沙门氏菌 单增李斯特菌 大肠杆菌O157:H7 胶体金法与荧光 定量聚合酶链反应 法在流感样呼吸道感染病原体实验室检测的对比分析 2024年 荧光 定量聚合酶链反应 (PCR)法在流感样呼吸道感染病原体实验室检测。方法:选取2023年4月本院收治的245例流感症状上呼吸道感染患者,以荧光 定量 PCR法检查结果为金标准,比较荧光 定量 PCR法、胶体金法的阳性检出率。结果:245例流感症状上呼吸道感染患者,用荧光 定量 PCR法检测出阳性165例,用胶体金法进行甲型流感病毒抗原检测出阳性96例,通过对比两种不同检测方法发现,荧光 定量 PCR法的检测灵敏度高于胶体金法,Kappa值为0.904。荧光 定量 PCR法对不同病毒类型的诊断阳性率均高于胶体金法。结论:荧光 定量 PCR检测具有检测速度快、准确度高、假阳性率低等优点,有利于提高医务人员对流感病毒的检测质量,对合理控制流感疫情具有积极的影响。关键词：胶体金法 实时荧光 定量聚合酶链反应 对乙型肝炎病毒DNA的检验效果 被引量：2 2023年 荧光 定量聚合酶链反应 (PCR)对乙型肝炎(乙肝)患者进行乙肝病毒(HBV)DNA检验的效果。方法选择2020年9月—2022年10月在菏泽市第三人民医院进行健康体检的1000名受检者作为研究对象,其中500名纳入对照组,依托酶 联免疫吸附法(ELISA)法对HBV-DNA开展检测操作;其余500名纳入观察组,运用实时荧光 定量 PCR法对HBV-DNA开展检测操作,比较两组HBV标志物[包括乙肝表面抗原(HBsAg)、乙肝表面抗体(HBsAb)、乙肝e抗原(HBeAg)、乙肝炎e抗体(HBeAb)、乙肝核心抗体(HBcAb)]的检出率,分析不同阳性组合分布情况。结果观察组的HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb检出率均明显高于对照组(HBsAg:1.40%比0.20%,HBsAb:1.80%比0.40%,HBeAg:1.80%比0.20%,HBeAb:1.20%比0.00%,HBcAb:1.40%比0.00%,均P<0.05)。观察组的大三阳(HBsAg、HbeAg、HbcAb均阳性)、小三阳(HBsAg、HbeAb、HbcAb均阳性)检出率均明显高于对照组(大三阳:1.60%比0.20%,小三阳1.40%比0.20,均P<0.05)。对照组和观察组HBsAg及HBcAb均阳性、HBsAg及HBeAg均阳性、五项均阳性的检出率比较差异均无统计学意义(HBsAg及HBcAb均阳性:0.20%比0.20%,HBsAg及HBeAg均阳性:0.00%比0.20%,五项均阳性:0.20%比0.40%,均P>0.05)。结论应用实时荧光 定量 PCR法开展对HBV-DNA的检测效果较为突出,有较高的准确度,与ELISA相比应用价值理想。关键词：乙型肝炎 酶联免疫吸附试验 实时荧光定量聚合酶链反应 乙型肝炎表面抗原 反转录酶 在微小RNA实时荧光 定量聚合酶链反应 中的作用 被引量：1 2023年 荧光 定量聚合酶链反应 (RT-qPCR)检测结果的关键点,并筛选出最优的检测方法。方法采用3种miRNA提取方法(分别使用EasyPure^(■)miRNA提取试剂盒、miRNA提取试剂盒、TransZol Up Plus RNA提取试剂盒)和3种反转录方法(分别使用TransScript^(■)第一链 cDNA反转录试剂盒、Evo M-MLV反转录试剂盒、miRNA第一链 cDNA合成试剂盒)处理大鼠纹状体脑区,检测miRNA与c DNA的质量和效率,并使用常规RT-qPCR检测miRNA水平,比较不同方法所得结果。结果3种RNA提取方法得到的miRNA质量和效率比较差异均有统计学意义,其中方法2的效果较好,但方法1、2、3的RT-qPCR结果比较差异无统计学意义(miR-132:25.91±9.79、25.26±10.25、27.28±7.39,miR-U6:27.98±11.25、25.98±9.78、29.62±9.65,均P>0.05);3种反转录方法所得实验结果比较差异有统计学意义,方法3所得结果明显低于方法1、方法2(miR-132:16.53±3.17比35.20±1.06、31.42±2.95,miR-U6:16.63±1.73比36.06±2.57、35.59±1.54,均P<0.05),主要影响RT-qPCR的扩增效率和扩增特异性。结论使用能高效富集约18 nt大小RNA的提取方法和在miRNA的3’末端加多聚A尾(Poly A)的反转录酶 ,可以得到更可靠的RT-qPCR结果。关键词：实时荧光定量聚合酶链反应 微小RNA 不同激素处理下番茄实时荧光 定量聚合酶链反应 内参基因的筛选 被引量：1 2023年 荧光 定量聚合酶链反应 (real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)进行扩增,利用geNorm、NormFinder和BestKeeper 3个软件分析EF1α、L33、Act、Ubi、GAPDH、UK、CAC、TIP41这8个番茄候选内参基因的表达稳定性。结果表明,8个候选内参基因的平均CT值为26~34。综合3个软件的分析结果发现,在ABA诱导下,番茄中较稳定表达的内参基因为L33和Ubi;在MeJA诱导下,番茄中较稳定表达的内参基因为L33和EF1α;在SA诱导下,番茄中较稳定表达的内参基因为EF1α和L33。综上所述,L33基因是番茄在不同激素诱导下表达最稳定的候选内参基因。本研究筛选的最稳定内参基因将为后续番茄响应外源激素处理的差异基因表达分析和分子机制研究提供校准依据。关键词：番茄 激素诱导 实时荧光定量聚合酶链反应 内参基因 荧光 定量聚合酶链反应 法与免疫学化学发光法检测乙型肝炎病毒的比较被引量：2 2023年 荧光 定量聚合酶链反应 (FQ-PCR)法与免疫学化学发光法(CLEIA)检测乙型肝炎病毒(HBV)的价值。方法选择2020年8月—2022年6月上饶市人民医院检验科341份应用FQ-PCR法测定HBV-DNA阳性血清标本作为研究对象,所有血清标本均采用FQ-PCR法及CLEIA检测。分析HBV-DNA阳性标本中乙肝5项[乙肝表面抗体(HBsAb)、乙肝表面抗原(HBsAg)、乙肝核心抗体(HBcAb)、乙肝e抗体(HBeAb)、乙肝e抗原(HBeAg)]阳性检出率在不同血清模式下HBV-DNA载量分布情况,对比HBV-DNA载量于HBeAg阳性与HBeAb阳性中的分布情况。结果HBsAg+、HBcAb+、HBeAg+及HBsAg+、HBcAb+、HBeAb+阳性检出率最高,分别为38.42%、43.70%;HBsAg+、HBsAb+、HBcAb+、HBeAg+阳性检出率为4.99%,HBsAg+、HBsAb+、HBcAb+、HBeAb+阳性检出率为4.69%。另外,HBcAb阳性标本共331份,约占所有HBV-DNA阳性标本数的97.07%。大三阳组(131例)患者HBV-DNA平均载量为5.65×10^(8)U/mL,其中低载量占全组比例为17.56%(23/131)、中载量占全组比例为17.56%(23/131)、高载量占全组比例为64.89%(85/131);小三阳组(149例)患者HBV-DNA平均载量为1.82×10^(6)U/mL,其中低载量占全组比例为81.88%(122/149)、中载量占全组比例为15.44%(23/149)、高载量占全组比例为2.68%(4/149)。HBeAg阳性患者于高载量HBV-DNA中占比为60.67%,HBeAb阳性患者于低载量HBV-DNA中占比为77.71%,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论2种方法联合检测在判断HBV感染中具有较高的应用价值,可为诊断及治疗方案制定等提供可靠的参考依据。关键词：乙型肝炎病毒 荧光定量聚合酶链反应 乙肝5项
