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一种草鱼呼肠病毒Ⅱ型敏感的草鱼脑细胞系及其应用
本发明涉及生物技术领域。本发明提供了一种草鱼呼肠病毒Ⅱ型敏感的草鱼脑细胞系,于2024年10月19日保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCC NO:C2024101。本发明所构建的草鱼脑细胞系表现出显著的稳定...
郭文丽肖武汉刘兴
基因Ⅱ型草鱼呼肠病毒VP6 N端蛋白原核表达及多克隆抗体制备
2025年
为了给基因Ⅱ型草鱼呼肠病毒(Grass carp reovirus,GCRV-Ⅱ)诊断方法的建立和相关基因工程疫苗的研制提供材料,试验采用PCR方法扩增了GCRV-ⅡVP6 N端蛋白编码基因,将其克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,构建重组表达质粒pET32a(+)-VP6-N,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,构建重组菌pET32a(+)-VP6-N/BL21,经IPTG诱导并优化诱导条件表达GCRV-ⅡVP6 N端蛋白,并对表达的重组蛋白进行可溶性分析,采用Western-blot分析重组蛋白的抗原性,以纯化的重组蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,采用间接ELISA法测定多克隆抗体效价,采用体外中和试验测定多克隆抗体的体外中和效价。结果表明:扩增出大小为684 bp的GCRV-ⅡVP6 N端蛋白编码基因,构建的重组表达质粒pET32a(+)-VP6-N的PCR鉴定、酶切鉴定结果均与预期大小一致且无碱基突变。重组菌pET32a(+)-VP6-N/BL21诱导后超声破碎沉淀在40 ku处出现特异性条带,与预期蛋白质分子质量大小一致;而上清液未出现明显特异性条带。重组蛋白表达的IPTG最佳诱导浓度为0.6 mmoL/L,最佳诱导时间为6 h。重组蛋白能够与GCRV-Ⅱ阳性草鱼血清发生特异性反应,但与健康草鱼血清不发生反应。所制备多克隆抗体效价为1∶1000000,体外中和效价为1∶40。说明试验成功表达了重组GCRV-ⅡVP6 N端蛋白并制备了多克隆抗体,重组蛋白以包涵体形式存在,具有良好抗原性和免疫原性,制备的多克隆抗体效价较高且具有中和活性。
李威吴辉亮张澳晴王英英郑树城李莹莹莫绪兵任燕潘厚军尹纪元施雯周文礼王庆
关键词:草鱼呼肠孤病毒原核表达多克隆抗体抗原性中和活性
富马酸在防治草鱼呼肠病毒感染的用途
本发明涉及水产养殖领域。本发明公开了富马酸在制备防治草鱼呼肠病毒(GCRV)感染的药物的新用途。本发明研究表明,富马酸在体外实验及体内实验中均展现出对GCRV显著的抗病毒效力。富马酸于细胞培养体系中不仅有效抑制了GCR...
黄容谢巨洪李勇明桂彬杨诚廖兰杰汪亚平
黄芩素在制备草鱼呼肠病毒的抑制剂方面的应用
本发明涉及农业渔业和药物领域,具体为水产养殖病害防控和抗病毒药物。具体公开了黄芩中的有效成分黄芩素能够有效抑制鱼类尤其是青鱼的呼肠病毒,半数抑制浓度为2.183μg/mL。因此,黄芩素可用于制备呼肠病毒抑制剂、制备预...
胡光耀吕利群李菲然
Ⅱ型草鱼呼肠病毒在稀有鮈鲫中的传播途径被引量:1
2024年
为了研究Ⅱ型草鱼呼肠病毒(GCRV-Ⅱ)的流行规律,本实验基于稀有鮈鲫感染GCRV-JX02的研究模型,利用分子生物学检测、逆转录实时定量聚合酶链式反应(RTqPCR)等方法开展GCRV-Ⅱ水平和垂直传播的研究。结果显示,水平传播中浸泡感染和共培养感染都能使稀有鮈鲫成为GCRV-Ⅱ的无症状携带者,阳性检出率分别为50%和80%;其中共培养感染直接导致8%的稀有鮈鲫死亡。感染后无症状的稀有鮈鲫经热休克处理,浸泡感染与共培养感染组的死亡率分别为57.14%和100%,总体阳性检出率分别为80.95%和100%。腹腔注射感染GCRV-JX02后存活的无症状稀有鮈鲫每0.01 g精巢与卵巢中病毒拷贝数分别为3.64×10^(6)和6.84×10^(6)个。垂直传播实验中稀有鮈鲫单个的卵子、未受精卵、受精卵和幼鱼的平均病毒拷贝数为1.98×10^(3)、1.15×10^(4)、4.75×10^(3)和6.74×10^(4)个,幼鱼中病毒的拷贝数显著高于卵子与受精卵时期,表明GCRV-JX02不仅能够在稀有鮈鲫中垂直传播,还能伴随幼鱼的发育不断扩增。本研究阐明了不同传播途径下GCRV-Ⅱ的传播潜力,有助于评估草鱼出血病的流行风险,且为筛选阻断草鱼呼肠病毒传播的药物提供了有效的动物模型。
倪秦伟孙阳刘林怡吕利群
关键词:草鱼呼肠孤病毒
一种检测II型草鱼呼肠病毒的RPA-CRISPR/Cas12a试剂盒及其应用
本发明公开了一种检测II型草鱼呼肠病毒的RPA‑CRISPR/Cas12a试剂盒及其应用。所述试剂盒包含检测Ⅱ型草鱼呼肠病毒的crRNA和/或扩增II型草鱼呼肠的引物对。基于试剂盒构建一种新型II型草鱼呼肠病毒的...
尹纪元王浩王庆韦锐忠王英英张德锋李莹莹莫绪兵潘厚军任燕
多相快速检测II型草鱼呼肠病毒的检测溶液体系、制备方法、检测方法及应用
本发明公开了一种多相快速检测II型草鱼呼肠病毒的检测溶液体系、制备方法、检测方法及应用,其中,所述检测溶液体系用于检测II型草鱼呼肠病毒,所述检测溶液体包括RAA扩增溶液体系以及位于其上层的CRISPR检测体系,所述RA...
王浩侯泽玮吕利群徐伟
一种厚朴酚衍生物B54、制备方法及其在抗草鱼呼肠病毒上的应用
本发明属于新药领域,具体公开了一种厚朴酚衍生物B54、制备方法及其在抗草鱼呼肠病毒上的应用。本发明提供的厚朴酚衍生物B54的抗病毒活性实验中发现,该结构化合物具有很高的抗草鱼呼肠病毒的作用,且其对正常细胞的毒负作用小...
范玉顶 薛明洋周勇 许晨 李逸群
三株蛙病毒草鱼呼肠病毒感染两株鱼类精原干细胞系及转录组分析
张世文
短期热休克对稀有鮈鲫感染高致病性Ⅱ型草鱼呼肠病毒后宿主-病毒相互作用的影响
倪秦伟

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王庆
作品数:292被引量:791H指数:15
供职机构:暨南大学
研究主题:草鱼呼肠孤病毒 呼肠孤病毒 细胞系 轮虫 锦鲤疱疹病毒
曾伟伟
作品数:137被引量:227H指数:12
供职机构:中国水产科学研究院珠江水产研究所
研究主题:草鱼呼肠孤病毒 呼肠孤病毒 锦鲤疱疹病毒 细胞系 试剂盒
石存斌
作品数:410被引量:1,607H指数:20
供职机构:中国水产科学研究院珠江水产研究所
研究主题:草鱼呼肠孤病毒 剑尾鱼 嗜水气单胞菌 呼肠孤病毒 细胞系
王英英
作品数:156被引量:156H指数:9
供职机构:中国水产科学研究院珠江水产研究所
研究主题:草鱼呼肠孤病毒 呼肠孤病毒 细胞系 病毒 试剂盒
吕利群
作品数:197被引量:331H指数:11
供职机构:上海海洋大学
研究主题:草鱼呼肠孤病毒 草鱼 疱疹病毒 呼肠孤病毒 嗜水气单胞菌