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腺病毒载体介导编辑chNHE1基因对J亚群禽白血病病毒抗性研究: 2025年; 鸡Na^(+)/H^(+)离子交换蛋白-1(chNHE1)是J亚群禽白血病病毒(ALV-J)的细胞受体,是ALV-J感染的细胞靶点。为了探索鸡抗禽白血病的育种目标,试验构建了定点编辑chNHE1基因的CRISPR/Cas9腺病毒系统,并对编辑后细胞抗ALV-J感染能力进行评价。结果显示:使用CRISPR/Cas9腺病毒载体介导的ssODNs同源重组方案可以在chNHE1中引入突变,其中36%单克隆细胞株存在W38缺失;T37缺失的细胞对ALV-J感染具备极显著的抗性;W38缺失的细胞对ALV-J感染具有完全抗性,同时具有E35A替换、P36缺失、T37缺失的细胞对ALV-J感染也具有完全抗性。研究表明,CRISPR/Cas9腺病毒载体可以有效地编辑鸡DF-1细胞,W38缺失或E35A替换P36、T37缺失都可以使DF-1对ALV-J感染具有抗性,该方案为培育抗ALV-J感染的基因编辑鸡提供技术储备。; 王震陈运通魏天悦陈洪岩王旭光王旭光高玉龙夏长友; 关键词：J亚群禽白血病病毒腺病毒载体

腺病毒载体介导的IRAK4基因敲低对兔膝骨关节炎滑膜炎的影响: 目的探讨关节腔注射IRAK4 sh RNA的腺病毒(Ad-sh IRAK4)介导的IRAK4敲低对兔膝骨关节炎(OA)滑膜炎、软骨损伤和软骨下骨异常变化的影响,明确IRAK4是否可以作为干预滑膜炎、改善OA病理的新靶点。...; 李沐哲; 关键词：IRAK-4 滑膜炎膝骨关节炎

腺病毒载体介导NGF基因转染大鼠肌源性干细胞的实验研究: 2021年; 目的探讨腺病毒载体介导神经生长因子(NGF)体外转染大鼠肌源干细胞(MDSCs)应用于基因治疗的可行性。方法培养并纯化MDSCs细胞株,采用具有高效转染能力的腺病毒载系统将NGF基因导入MDSCs中,采用绿色荧光蛋白(EGFP)荧光技术检测转染率、实时荧光定量PCR (qPCR)检测目的基因NGF的表达情况。结果腺病毒感染MDSCs的感染复数为1000时最佳,感染率可达80%。EGFP自72 h时荧光表达开始逐渐增强。转染的MDSCs中NGF基因高表达。结论通过携带NGF的腺病毒载体可以成功转染MDSCs,从而上调目的基因在肌源干细胞中的表达;且通过腺病毒介导转染的目的基因NGF不会导致肌源干细胞的过度增殖和凋亡。; 方建雄刘豪圣刘天琦张振辉刘久敏蒲小勇; 关键词：干细胞神经生长因子

腺病毒载体介导的共表达质粒STAT3-SiRNA-STAT1治疗脑胶质瘤的体内实验研究: 目的：探讨重组腺病毒载体介导的STAT1蛋白质表达及RNAi干扰STAT3基因表达对人U87-MG脑胶质瘤裸鼠皮下移植瘤模型的生长抑制作用，探索其可能机制，为胶质瘤的基因治疗提供新的实验依据。　　方法：（1）构建重组腺病...; 张国栋; 关键词：皮下移植瘤基因治疗腺病毒

腺病毒载体介导C/ebp delta改善小鼠心脏缺血性损伤: 2019年; 目的探讨腺病毒载体介导C/ebp delta对缺血性心脏病的治疗作用。方法构建腺病毒C/ebp delta增强型绿色荧光蛋白(Ad C/ebp delta-EGFP)载体,局部注射小鼠心脏左心室前壁,观察其对心肌细胞的转染效率。取C57BL/6小鼠,以腺病毒空载体局部注射心肌为对照组,Ad C/ebp delta-EGFP载体局部注射心肌为实验组。2组小鼠心肌局部注射腺病毒载体后行冠状动脉左前降支结扎,用心脏超声检测C/ebp delta对心脏功能的影响。无痛苦处死小鼠,收获心脏,TUNEL染色观察C/ebp delta对心肌细胞凋亡的影响;CD31免疫组化观察C/ebp delta对心肌梗死后梗死交界区毛细血管密度的影响;蛋白免疫印迹检测C/ebp delta对心肌梗死后心脏低氧诱导因子-1(HIF-1)、血红素加氧酶-1(HO-1)及血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达的影响。结果成功构建Ad C/ebp delta-EGFP载体。超声显示实验组小鼠心肌梗死后心脏左室短轴缩短分数(LVFS,0.323±0.031)和心脏左室射血分数(LVEF,0.605±0.085)较对照组(0.221±0.031和0.464±0.071)显著改善(P<0.05);心肌细胞凋亡率较对照组明显减少(20.36%±3.07%vs. 44.26%±6.25%,P<0.01);心肌梗死交界区毛细血管密度(毛细血管数目/每个视野)较对照组显著增加(145.41±15.52 vs. 77.60±5.19,P<0.01);HIF-1、HO-1和VEGF蛋白的表达较对照组均显著增加(P<0.01)。结论腺病毒介导的C/ebp delta可能通过激活HIF-1信号通路增加HO-1和VEGF表达,进而通过保护心肌细胞及促进心脏血管新生治疗缺血性心脏病。; 王丹丹陶贵周黄建华刘华; 关键词：缺氧诱导因子1

腺病毒载体介导CagA基因表达对原代胃癌细胞糖酵解代谢酶表达的影响: 2019年; 目的研究过表达CagA对原代胃癌细胞糖酵解代谢酶表达的影响。方法构建CagA重组腺病毒载体pAdeno-MCMV-CagA-3Flag-IRES2-EGFP(pAdeno-CagA),转染HEK293细胞,包装腺病毒,以感染复数(Multiplicity of infection, MOI) 50感染原代胃癌细胞72 h,并用幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)东亚株GZ7(CagA^+)以MOI 50感染原代胃癌细胞24 h,通过Western blot检测CagA和已糖激酶2(HK2)、葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)、烯醇化酶1(ENO1)、丙酮酸激酶1/2(PKM1/2)、乳酸脱氢酶A(LDHA)糖酵解代谢酶的蛋白表达,采用流式细胞术检测胃癌细胞周期分布。结果成功构建了CagA重组腺病毒载体pAdeno-CagA,用pAdeno-CagA腺病毒和Hp GZ7感染原代胃癌细胞后糖酵解代谢酶HK2、ENO1、GLUT1的表达与空载组或Hp非感染组比较均显著下调(P<0.05)。与空载组比较,pAdeno-CagA感染胃癌SGC-7901细胞24、48、72 h,其G2/M期细胞百分比显著增加(P<0.05),感染72 h的空载组和CagA腺病毒组G2/M期的比值分别为16.90%和65.93%。结论 Hp通过CagA使原代胃癌细胞糖酵解代谢酶表达下调,可能与DNA损伤使细胞阻滞在G2/M期有关。; 杨丽萍贾岑岑龙妮娅骆梅杨丹王珺谢渊赵艳赵艳周建奖; 关键词：腺病毒 CAGA 胃癌糖酵解

腺病毒载体介导的PTEN基因对黑色素瘤SK-MEL-3细胞化疗敏感性的影响: 2019年; 目的探讨腺病毒载体介导的PTEN基因对黑色素瘤SK-MEL-3细胞化疗敏感性的影响。方法以pcDNA3.0-PTEN重组质粒为模板,加入PTEN引物,构建重组腺病毒载体PTEN(Ad-PTEN),并用其感染QBI-293A细胞,进行病毒扩增和效价测定。将SK-MEL-3细胞分为对照组(PBS组)、空载体腺病毒组(ADDP处理组)、Ad-PTEN基因治疗组(Ad-PTEN处理组)、顺铂对照组(DDP处理组)、Ad-PTEN+DDP联合处理组。采用RT-PCR和Westernblot法检测PTEN、Bax、Bcl-2、P21、P53和Caspase-3的表达水平。分别用划痕实验、侵袭实验、MTT法、流式细胞仪检测各组细胞的迁移、侵袭能力及生长、凋亡情况。结果本研究成功构建了Ad-PTEN,且感染QBI-293细胞后可进行增殖,病毒效价为108pfu·mL-1。与PBS处理组和ADDP处理组比较,Ad-PTEN处理组、DDP处理组、Ad-PTEN+DDP联合处理组细胞活力减弱,凋亡率上升,Bax、P21、P53及Caspase-3的转录和表达水平上调,Bcl-2下调,差异均具有统计学意义(P<0.0001)。Ad-PTEN+DDP联合处理组与Ad-PTEN处理组、DDP处理组比较,细胞活力减弱,凋亡率上升,Bax、P21、P53及Caspase-3的转录和表达水平上调,Bcl-2下调,差异均具有统计学意义(P<0.0001)。结论 Ad-PTEN可抑制SK-MEL-3细胞增殖并诱导其凋亡,呈现明显的抑癌作用;Ad-PTEN与DDP联合使用对SK-MEL-3细胞的增殖抑制作用和诱导凋亡作用显著优于单用Ad-PTEN或DDP,具有化疗增敏作用。; 黄辉云沈二栋唐四清粟钰淇; 关键词：腺病毒 PTEN

腺病毒载体介导Smad3基因在秦川牛前体脂肪细胞中的过表达和沉默被引量：4: 2018年; 旨在通过在秦川牛前体脂肪细胞中过表达和沉默Smad3基因,探讨其在秦川牛前体脂肪细胞分化过程中的生物学功能,从而为阐明TGF-β信号通路在牛脂肪组织生长发育过程中发挥的作用提供理论依据。本试验采用Ad5腺病毒改建的AdMaxTM重组腺病毒包装系统成功重组获得了过表达腺病毒pDC316-EGFP-bSMAD3和干扰腺病毒pDC316-EGFP-ShRNA-bSMAD3-1405。感染牛前体脂肪细胞后,利用实时荧光定量检测Smad3基因及脂肪形成相关基因mRNA的表达。结果表明,将获得的具有较高滴度的过表达腺病毒pDC316-EGFP-bSMAD3感染秦川牛前体脂肪细胞3、6、9d后,分别较对照组Smad3基因表达量显著上调了1 031、1 286、633倍(P<0.001)。与对照组相比,高滴度干扰腺病毒pDC316-EGFP-ShRNA-bSMAD3-1405感染牛前体脂肪细胞3、6、9d后,Smad3基因的表达量分别下调了70%、55%、57%(P<0.01)。油红O染色和实时荧光定量结果均证明,Smad3基因抑制了前体脂肪细胞脂质积累并促使标志基因PPARγ、FABP4、C/EBPα和C/EBPβ的表达显著下调。综上所述,腺病毒载体介导体外表达载体可以成功的实现Smad3基因在秦川牛前体脂肪细胞中的过表达和沉默,并对秦川牛前体脂肪细胞的成脂分化具有一定的调控作用。; 张乐宁越李佩韦王洪宝昝林森; 关键词：SMAD3基因前体脂肪细胞腺病毒载体

腺病毒载体介导Smad2基因在秦川牛成肌细胞中的超表达和沉默: 本实验旨在研究转化生长因子β1(TGF-β1)信号转导通路下游信号分子Smad2基因在秦川牛成肌细胞细胞的表达情况及生物学功能的发挥,从而为研究TGF-β信号通路在秦川牛肌肉和脂肪形成过程中的功能研究奠定基础.本试验首先...; 张乐宁越李佩韦王洪宝昝林森; 关键词：SMAD2基因肌肉生长

重组腺病毒载体介导人乳铁蛋白对宫颈癌干样细胞增殖与凋亡的影响: 2017年; 背景:基因工程在人类治疗恶性肿瘤的过程中起着重要作用,腺病毒是常用的基因工程载体,近年来发现乳铁蛋白在多种肿瘤的发生、发展及转移中有着重要作用,但目前对于乳铁蛋白通过腺病毒载体导入人体内的表达情况的研究报道目前还比较少。目的:观察重组腺病毒载体介导的人乳铁蛋白对宫颈癌干样细胞的增殖及凋亡的影响。方法:通过体外培养小鼠宫颈癌原代细胞,采用SP法分选出宫颈癌干样细胞,将构建好的载有乳铁蛋白的重组腺病毒载体人乳铁蛋白转染于宫颈癌干样细胞,分组为空白对照组、空病毒组和重组腺病毒人乳铁蛋白组。而在人乳铁蛋白感染宫颈癌干样细胞后,通过MTT法检测人乳铁蛋白感染后宫颈癌干样细胞的增殖情况,划痕实验检测宫颈癌干样细胞的迁移,通过Western blot法检测乳铁蛋白在宫颈癌干样细胞内的表达,采用Annexin V-FITC/PI法测定宫颈癌干样细胞的凋亡情况。结果与结论:与其他2组相比,重组腺病毒人乳铁蛋白组宫颈癌干样细胞增殖数量及划痕处细胞的数目减少,凋亡细胞增加(P<0.05或P<0.01)。结果证实,载有乳铁蛋白的重组腺病毒载体人乳铁蛋白用于感染体外培养的宫颈癌干样细胞后,能稳定在宫颈癌干样细胞内表达,且能明显抑制宫颈癌干样细胞增殖,减少细胞迁移,并促进细胞凋亡。; 张霞都治香王娜孟亚丽; 关键词：细胞增殖乳铁蛋白宫颈癌增殖凋亡 MTT

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