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前体脂质体 法 负载葡萄籽原花青素优化其抗氧化活性及稳定性 被引量：2 2020年 脂质体 的制备工艺增加稳定性。方法 通过1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除试验、铁离子还原/抗氧化能力法 (ferric ion reducing antioxidant power,FRAP)Fe3+还原能力试验进行筛选。载体沉淀法 制备复合磷脂前体脂质体 ,最后对其包封率、形态、粒径、稳定性、体外释放性进行评价。结果筛选出协同增效最优的复合天然抗氧化剂为原花青素和VE,其复合摩尔配比为1:1,原花青素包封率为86%,原花青素-VE复合磷脂前体脂质体 稳定性良好。结论该组合的抗氧化性能明显优于单个抗氧化效果的总和,复合磷脂前体脂质体 制备技术可以显著提高其稳定性。该结果可指导具有高抗氧化潜力的功能性食品的配制和开发。关键词：DPPH FRAP 原花青素 腺病毒及脂质体 法 介导脐静脉内皮细胞转染的实验研究 2016年 脂质体 转染脐静脉内皮细胞探讨转染脐静脉内皮细胞的理想条件。方法 :分别使用腺病毒载体和Lipofectamine 2000脂质体 介导VEGF165基因转染脐静脉内皮细胞。转染后通过倒置荧光显微镜检测转染效率,对比探讨转染脐静脉内皮细胞的理想方法 。结果:采用脂质体 法 转染脐静脉内皮细胞效果不理想,转染率约11.60%。采用腺病毒载体转染率明显高于脂质体 法 ,且随感染复数增加而增加。结论:采用腺病毒介导VEGF165转染脐静脉内皮细胞较脂质体 法 转染效率高,当M0I=50时可作为转染安全有效的条件.这为细胞转染技术在脐静脉内皮细胞的研究提供实验基础。关键词：脐静脉内皮细胞 细胞转染 腺病毒载体 脂质体转染 利用脂质体 法 建立转Toll样受体4基因大尾寒羊胎儿成纤维细胞株的研究 2016年 脂质体 转染法 获得转Toll样受体4(Toll-like receptors 4,TLR4)基因的成纤维细胞,将其作为供体细胞,再通过体细胞核移植技术构建重构胚,最终生产出转TLR4基因且性别可控的大尾寒羊。本研究通过原代培养大尾寒羊胎儿皮肤成纤维细胞,并进行SRY基因性别鉴定,利用脂质体 转染法 转入TLR4基因,然后分别从形态学与分子水平检测TLR4基因的表达,将稳定表达转TLR4的成纤维细胞核移植入绵羊去核卵母细胞中构建重构胚。最终获得5个稳定表达TLR4的阳性细胞克隆,经SRY基因性别鉴定为雌性细胞株,通过实时荧光定量PCR分析,在第4代转染的细胞中TLR4表达量最高,比未转染细胞高出7.4816倍(P<0.01),卵裂的重构胚中有EGFP的表达。试验成功构建出含TLR4基因的重构胚,为今后生产出性别可控的抗病转基因绵羊地方新品种奠定基础。关键词：大尾寒羊 脂质体转染 重构胚 慢病毒及脂质体 法 转染原代软骨细胞的实验研究 2015年 脂质体 转染大鼠原代软骨细胞,探讨转染软骨细胞的理想条件。方法 采用机械—酶消化法 获取原代软骨细胞,经Ⅱ型胶原(ColⅡ)鉴定后,使用慢病毒载体介导GFP及利用Lipofectamine 2000介导的FAM-siRNA分别转染原代软骨细胞,倒置荧光显微镜检测转染效率,MTT法 测定原代软骨的增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果采用脂质 法 转染软骨细胞不理想,转染率不到10%。运用慢病毒载体后转染率明显高于脂质体 法 ,且随感染复数(病毒滴度×病毒液体积/细胞数,MOI)增加而增加,MOI为100时,转染率可达92.85%。MTT及流式结果显示,低MOI时,软骨细胞活力及凋亡率与对照组相比差异无统计学意义;当高MOI(200)时,细胞活力[(81.32±10.72)%]明显低于对照组,而细胞凋亡率[(21.37±2.80)%]明显高于对照组。结论当MOI为100时可作为转染软骨细胞安全有效的条件,这为细胞转染技术在软骨细胞的研究领域提供实验基础。关键词：细胞转染 慢病毒载体 脂质体 细胞凋亡 脂质体 法 与电穿孔法 转染两种细胞效率的比较被引量：12 2014年 脂质体 与电穿孔法 对HepG2、SGC7901/ADM两种细胞的转染效率。方法 以HepG2、SGC7901/ADM细胞为研究对象,采用脂质体 法 和电穿孔法 分别转染pcDNA3.1-EGFP质粒,流式细胞仪计算细胞存活率,借助绿色荧光标志蛋白eGFP测算转染效率。结果利用脂质体 转染eGFP质粒至HepG2细胞所获得的阳性转染率为(20.8±2.1)%,而电穿孔法 转染效率增高至(49.6±2.5)%,二者比较差异有统计学意义(P<0.05)。利用脂质体 转染eGFP质粒至SGC7901/ADM细胞所获得的阳性转染率为(25.4±1.3)%,而电穿孔法 转染效率增高至(52.6±2.1)%,二者比较差异亦有统计学意义(P<0.05)。结论使用电穿孔法 能明显提高大片段载体的转染效率。关键词：电穿孔 脂质体转染 PCDNA3 脂质体 法 构建广西巴马小型猪转基因体细胞及转基因克隆胚的生产被引量：12 2014年 脂质体 法 是一种传统的向哺乳动物细胞导入外源基因的方法 ,然而其转染效率受多种因素影响。本研究将从脂质体 和质粒DNA量、转染暴露时间以及混合孵育时间等四方面进行探索,以寻找最佳的转染体系。试验结果表明最佳转染体系为:脂质体 1.25μL、DNA 0.7μg、脂质体 -DNA混合孵育0 min以及转染暴露6 h。随后我们用优化过的转染体系对新生广西巴马小型猪肾脏成纤维细胞进行转绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)操作,获得了(26.45±2.11)%的转染率,并以此为核供体经体细胞核移植技术成功构建表达GFP的广西巴马小型猪克隆胚胎,同时证实转基因克隆胚的体外发育能力比得上非转基因克隆胚。这为我们构建用于人类疾病研究的基因修饰广西巴马小型猪奠定了基础。关键词：脂质体转染法 转基因 克隆 广西巴马小型猪 三种脂质体 法 转染试剂转染原代大鼠气道平滑肌细胞效果的比较 被引量：1 2013年 关键词：气道平滑肌细胞 原代大鼠 脂质体法 分泌细胞因子 气道高反应性 细胞分子机制 脂质体 法 介导EGFP基因在细胞中的表达分析2013年 脂质体 法 介导真核表达质粒EGFP-C1转染PK15细胞和JEG-3细胞,分别在转染的24小时和48小时观察荧光的表达情况。结果表明:在荧光显微镜下,EGFP蛋白在PK15细胞和JEG-3细胞中均得到表达,相同条件下PK15细胞的转染效率高于JEG-3细胞,且在JEG-3细胞中EGFP均一表达,而在部分PK15细胞中EGFP表达主要聚集于细胞核区域,细胞状态对亚细胞定位存在重要的影响。关键词：绿色荧光蛋白 脂质体 PK15细胞 JEG-3细胞 脂质体 法 转染山羊骨骼肌特异细胞条件的优化被引量：1 2013年 脂质体 转染法 检测pIMAU-EGFP载体在山羊骨骼肌细胞中的表达情况，并探索其最佳的转染条件。在构建的适合携带外源基因的山羊骨骼肌特异表达载体pIMAU-EGFP基础上，以绿色荧光蛋白为报告基因，采用脂质体 转染法 检测了pIMAU-EGFP载体在山羊骨骼肌细胞中的表达，并对转染条件进行了摸索。试验结果表明，成功把测序验证正确的pIMAU-EGFP载体转染到山羊骨骼肌细胞中，筛选的最佳转染条件：脂质体 与质粒的最佳比例为1：2，质粒浓度为3.5 μg/μL，细胞密度不低于80%，以转染24-36 h观察记录转染效率为宜。本试验初步建立了转染山羊骨骼肌细胞的方法 ，绿色荧光蛋白可作为报告基因优化脂质体 转染条件，这将为快速和规模化筛选山羊肉质特性相关基因提供新思路和研究方法 。关键词：山羊 骨骼肌细胞 脂质体转染 脂质体 法 转染水牛肾脏成纤维细胞条件的优化被引量：4 2013年 脂质体 介导基因转染水牛肾脏成纤维细胞时如何获得较高的转染效率。本研究将以绿色荧光蛋白基因为标记基因,利用Lipofectamine LTX介导外源DNA转染水牛肾脏成纤维细胞,探讨脂质体 用量、质粒用量、质粒大小、转染时间、细胞初始接种密度对转染效率的影响。结果表明,4μg pmaxGFP质粒DNA与4μL脂质体 转染6h,其细胞活性达98%,可获得较满意的转染效率。关键词：脂质体 成纤维细胞 转染 水牛
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