为了探究雌激素对牛成肌细胞发育的影响并挖掘相关蛋白与通路,试验首先通过在牛成肌细胞中加入不同浓度的17β-雌二醇(17β-estradiol,E2),研究其对牛成肌细胞发育的影响;然后利用4D-DIA蛋白质组学技术对E2处理(处理组)和未处理(对照组)的牛成肌细胞进行蛋白质丰度测定,筛选两组之间的差异表达蛋白(differentially expressed proteins,DEPs),并对其进行基因本体论(gene ontology,GO)功能注释与京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and germoes,KEGG)富集分析;对DEPs中细胞组分进行亚细胞定位分析;通过蛋白质互作网络(protein protein interaction,PPI)分析挖掘DEPs之间的相互作用,鉴定核心蛋白;通过实时荧光定量PCR方法检测核心蛋白对应基因的mRNA表达水平,以验证蛋白质丰度测定结果。结果表明:10 nmol/L E2对牛成肌细胞发育具有一定的促进作用,共筛选到243个DEPs;与对照组比较,处理组有128个DEPs[CAMP依赖性蛋白激酶(PRKACA)、白细胞黏附分子(ALCAM)、丝裂原活化蛋白激酶12(MAP3K12)等]上调,115个DEPs[Rab家族11A(RAB11A)、β-1,3-半乳糖基转移酶相关蛋白(B3GNT9)、甾醇-27-羟化酶(CYP27A1)等]下调。这些DEPs显著富集在214个GO功能条目中,包括细胞过程、代谢过程、生物调节、生物过程调控等23个生物过程条目,细胞解剖实体和含蛋白复合物2个细胞组分条目,结合、催化活性、分子功能调节活性、转录调节因子活性等9个分子功能条目。DEPs富集到235条KEGG信号通路,根据显著性排名前15位的KEGG信号通路包括细胞黏附过程(甘露糖型O-聚糖的生物合成、细胞黏附分子)、细胞代谢过程(代谢途径、PPAR信号通路、色氨基酸代谢、精氨酸和脯氨酸代谢、氨基糖和核苷酸糖代谢、酪氨酸代谢)、细胞凋亡相关信号通路(P53信号通路)、机体系统(补体和凝血级联反应、胰腺分泌、初级胆汁酸生物合成、脂肪细胞
Male fertility is built on the proper proliferation and differentiation of germline cells within the seminiferous epithelium in the testis,which continuously produces millions of sperm per day in mammals[1].RNA modifications are emerging as crucial epitranscriptomic regulators.
