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外膜蛋白CsgG影响致病性大肠杆菌生物被膜形成被引量:1
2025年
【背景】致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli,APEC)能够引起类气囊炎、心包炎等症状,严重制约养业的健康发展。同时,APEC与人类肠道外致病性大肠杆菌(extraintestinal pathogenic Escherichia coli,ExPEC)具有相似的毒力因子,严重威胁公共卫生。APEC形成生物被膜可抵抗抗生素杀伤及逃避宿主免疫。因此,探究APEC生物被膜形成的关键基因和调控机制,对于防控APEC具有重要的理论和实践意义。【目的】探讨外膜蛋白CsgG在APEC生物被膜形成中的作用,揭示APEC生物被膜形成的分子机制,为大肠杆菌病的防治提供理论基础。【方法】利用Red同源重组技术构建的csgG基因缺失株ΔcsgG及其互补株CΔcsgG,分析了csgG对APEC生长、运动能力、膜通透、胞外多糖(extracellular polysaccharides,EPS)产量及生物被膜形成能力的影响。【结果】csgG的缺失并不影响APEC的生长和细胞膜的通透,但增强了APEC的运动。csgG的缺失显著降低了APEC生物被膜形成能力,扫描电子显微镜观察发现缺失株生物被膜细菌组成由多层变为单层,细菌间黏附减少。激光扫描共聚焦显微镜观察发现csgG的缺失导致生物被膜结构松散,黏附的细菌数量减少,同时发现csgG缺失显著降低APEC的EPS产量。实时荧光定量PCR分析显示,csgG的缺失导致与生物被膜形成相关基因的转录水平显著降低。【结论】CsgG在APEC生物被膜形成过程中起着关键作用,严重影响生物被膜结构的完整
彭浩恒林子竹胡剑刚张贝贝郭伟奇王欣宇王芷洋祁晶晶田明星鲍衍清李海花王少辉
关键词:禽致病性大肠杆菌生物被膜胞外多糖
江苏省、山东省和安徽省致病性大肠杆菌的分子流行病学调查
2025年
为了探明江苏省、山东省和安徽省鸡源致病性大肠杆菌(APEC)的分子流行病学特征,本试验于2023年从三省部分规模化鸡养殖场采集鸡粪便、鸡毛蛋、鸡卵黄以及病死鸡的鸡腿、骨髓、关节、心脏、脾脏、肺脏和肠道内容物样品共918份,使用选择培养基分离APEC;利用微量肉汤稀释法测定分离菌株对常用抗菌药物的敏感;基于全基因组测序分析分离菌株的耐药基因和毒力基因携带情况;通过多位点序列分型(MLST分型)、菌体(O)抗原分型和系统发育树分析分离菌株的主要流行特征。结果显示,共分离获得390株APEC,分离率为42.48%;分离菌株对氨苄西林(91.03%,355/390)、头孢噻呋(82.82%,323/390)、庆大霉素(81.03%,316/390)和四环素(77.95%,304/390)的耐药率较高,对美罗培南(0.51%,2/390)和黏菌素(3.08%,12/390)比较敏感,耐药基因以blaEC(98.97%,386/390)、blaTEM(80.00%,312/390)、aph(6)-Id(54.10%,211/390)、erm(D)(98.46%,384/390)、tet(A)(81.79%,319/390)和floR(63.33%,247/390)为主;毒力基因分析发现,所有分离菌株至少含有4种毒力基因。共鉴定出68种血清型,其中优势血清型为O78(11.03%,43/390)、O180(7.95%,31/390)和O15(7.18%,28/390),MLST共鉴定出71种ST型,主要的ST型为ST117(15.90%,62/390)、ST155(8.46%,33/390)和ST162(8.21%,32/390);系统发育树结果显示,分离菌株共分为4个进化分支,不同省份鸡养殖场分离菌株之间的遗传进化关系相距较远。结果表明,江苏省、山东省和安徽省鸡源APEC的流行血清型为O78、O180和O15,主要流行ST型为ST117,携带的耐药基因和毒力基因较多,鸡养殖场应当继续加强APEC的流行病学监测。
邵立志吉星孙利厂朱树娇王佳芸何涛王冉杨章平
关键词:耐药基因毒力基因血清型流行病学调查
Tol-Pal系统tolQ基因对致病性大肠杆菌生物学特及毒力的影响
2025年
本研究利用Red同源重组系统和互补质粒构建致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli,APEC)菌株APCE50的tolQ基因缺失株ΔtolQ和互补株CΔtolQ,以探究tolQ基因对APEC生物学特以及对细菌致病性的影响。对APCE50、ΔtolQ和CΔtolQ的生长曲线、运动能力、形态特征、生物被膜形成能力、酸碱耐受、抗血清杀菌、细胞黏附侵袭能力及毒力进行了比较分析。结果显示,ΔtolQ与APCE50、CΔtolQ的生长速度无明显差异,但ΔtolQ的运动能力下降并影响细菌形态。缺失tolQ基因导致APEC生物被膜形成能力、酸碱耐受及抗血清杀菌能力显著降低。细胞及动物感染试验结果显示,tolQ基因缺失显著降低了APEC的黏附侵袭能力和毒力。综上表明,tolQ基因在APEC运动能力、生物被膜形成、耐受致病性方面发挥作用,这为阐明APEC的环境适应、生存能力及致病机制提供了参考。
李双阳张贝贝胡剑刚王欣宇祁晶晶田明星鲍衍清石玉祥王少辉
关键词:禽致病性大肠杆菌生物学特性毒力
致病性大肠杆菌lpxL和lpxM缺失减毒活疫苗的安全和保护效果评价
2025年
为研究致病性大肠杆菌(Avian pathogenic Escherichia coli,APEC)lpxL和lpxM缺失减毒活疫苗对SPF鸡的安全和免疫保护效果,试验通过对大肠杆菌双基因缺失减毒活疫苗株体外遗传稳定、疫苗培养工艺、免疫方式优化和免疫攻毒保护效果评价,探讨其作为大肠杆菌病活疫苗候选株的可能。结果显示:双基因缺失减毒活疫苗株E516ΔlpxLΔlpxM、E058ΔlpxLΔlpxM和E522ΔlpxLΔlpxM在体外传代50代遗传稳定,未发生回复突变,毒力较野生株下降显著(10000倍以上),优化的培养参数为液体初始培养12 h,以终浓度OD_(600 nm)为0.15转至LB肉汤再培养5 h,此时活菌比最高,优化的免疫方式和剂量为以1×10^(9)CFU/只(0.2 mL)进行颈部皮下接种具有良好的保护效果。研究表明,lpxL和lpxM缺失的APEC双基因缺失减毒活疫苗株具有大肠杆菌病活疫苗候选株的潜能。
蒋路遥祝谢民吴佳炎杨帆潘昊黄恩赐高清清郇长超王小波高崧
关键词:禽致病性大肠杆菌基因缺失活疫苗
致病性大肠杆菌菌影负载鸭源鸡杆菌flfA基因核酸疫苗的研制及免疫效果评价
2025年
【目的】研制致病性大肠杆菌菌影负载鸭源鸡杆菌flfA基因的核酸疫苗,并评估其在鸡体内的免疫保护效果。【方法】以鸭源鸡杆菌的菌毛基因flfA为目的基因,采用携带鸡β肌动蛋白启动子的pCAGGS-HA质粒作为表达载体,构建pCAGGS-flfA真核表达质粒;构建温控质粒PBV-E-SN,并将其转化至对氨苄青霉素敏感的致病性大肠杆菌分离株制备菌影;将pCAGGSflfA质粒装载入菌影制备菌影疫苗,设计菌影负载pCAGGS-flfA质粒组、pCAGGS-flfA质粒组、空菌影组、PBS组及正常对照组。对7日龄雏鸡进行首次免疫,首免2周后二次加强免疫,首免4周后对鸡进行鸭源鸡杆菌攻毒试验,检测疫苗的免疫保护效果。【结果】所构建的真核表达质粒pCAGGS-flfA能在体外细胞中成功表达;构建的致病性大肠杆菌菌影菌株在42℃热诱导210min后,裂解率达到99.94%;免疫保护试验结果显示,无论是通过ELISA检测的特异IgG抗体水平,还是对鸡泄殖腔拭子和咽拭子的排菌情况以及组织脏器中细菌载量的测定,菌影负载pCAGGS-flfA质粒组的免疫保护效果均显著高于其他免疫组,包括单独免疫pCAGGS-flfA质粒组。与单独免疫pCAGGS-flfA质粒组相比,菌影负载pCAGGS-flfA质粒组的免疫保护效果更为优越。【结论】本研究表明菌影作为pCAGGS-flfA的负载载体显著增强了该核酸疫苗的免疫保护效果。
马立静彭泽宇翟金丽于静玥王增隗梦蝶王新卫陈陆杨霞
关键词:核酸疫苗免疫效果
致病性大肠杆菌HlyE蛋白的免疫原研究被引量:2
2024年
为评估致病性大肠杆菌(APEC)溶血素HlyE蛋白的免疫原,本研究对APEC溶血素HlyE蛋白进行原核表达和纯化,并对表达的重组蛋白进行SDS-PAGE和western blot分析,将纯化蛋白利用透析袋在4℃透析后,利用血琼脂平板对其溶血活进行检测。SDS-PAGE和western blot结果显示,表达并纯化到分子量约为36 ku的重组HlyE蛋白(rHlyE),经ND-2000超微量核酸蛋白测定仪测定纯化后蛋白浓度为0.65 mg/mL;溶血活检测结果显示,rHlyE具有溶血活。以透析后的rHlyE作为抗原,按照50μg/只的剂量免疫小鼠,对照组于相同时间点注射等量PBS,共免疫3次间隔14 d,并于首免后不同时间采血,采用间接ELISA方法检测两组小鼠血清特异抗体水平,并于三免后18 d以2 LD_(50)的APEC菌液攻毒小鼠,观察7 d内小鼠的死亡情况;于首免后28 d剖杀各组小鼠取其脾脏制备脾淋巴细胞,采用流式细胞术分别检测CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)T淋巴细胞亚型比率,对rHlyE的免疫原进行评估。间接ELISA检测结果显示,该蛋白能够诱导机体产生体液免疫应答,分泌高表达量的IgG抗体,抗体水平于三免后15 d达到最高水平。rHlyE免疫攻毒保护试验结果显示,免疫组小鼠基本无明显临床症状,7 d内存活率达80%;而对照组小鼠表现明显临床症状,于攻毒后3 d内全部死亡。流式细胞术结果显示,与对照组相比,免疫组小鼠的CD3^(+)、CD4^(+)和CD8^(+)T淋巴细胞亚型比率均升高。上述结果表明,rHlyE在大肠杆菌BL21中为部分可溶表达,将其免疫小鼠后可诱导小鼠产生较高水平的体液免疫应答,并且可对小鼠产生较好的免疫保护效果。本研究明确了APEC HlyE蛋白的免疫原,为APEC免疫保护蛋白的筛选以及疫苗研发提供了借鉴与参考。
张春晓王利丽赵奇孙欣艺侯冠欣刘畅史秋梅吴同垒张志强
关键词:禽致病性大肠杆菌溶血活性免疫原性流式细胞术
一例致病性大肠杆菌的分离鉴定及耐药分析
2024年
为了探明河南地区白羽肉鸡养殖场肉鸡大量发病死亡原因,采用细菌平板划线法对病鸡病料进行细菌分离纯化,经LB琼脂平板与伊红美蓝鉴别琼脂平板划线培养,得到形状均匀、大小一致的菌落。PCR与生化试验鉴定结果显示,该菌株为致病性大肠杆菌。采用药敏纸片法试验测定常见抗生素药物敏感,结果显示该菌株对氨苄西林、阿莫西林、土霉素、哌拉西林、四环素、庆大霉素耐药,对恩诺沙星、氟苯尼考、阿米卡星和新霉素敏感,对左氧氟沙星、氯霉素、卡那霉素和金霉素中等耐药。
刘晓娟
关键词:禽致病性大肠杆菌生化鉴定耐药性
致病性大肠杆菌高效裂解噬菌体的筛选与初步应用
大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)所引发的疾病在人类和动物中频发,尤其在家养殖业中,发病率和死亡率的持续上升造成了巨额经济损失。抗生素的滥用加剧了细菌的耐药,并促进了耐药菌株的遗传演化,使得...
周琳娜
关键词:禽致病性大肠杆菌噬菌体基因组分析
湖南省部分地区致病性大肠杆菌分离鉴定及生物特分析被引量:1
2024年
为探究湖南省致病性大肠杆菌的生物特,从部分地区规模肉鸡场采集122份病死鸡临床肝脏样品,采用传统细菌培养方法进行分离培养和初步鉴定,利用大肠杆菌持家基因phoA进行PCR扩增,对纯化鉴定后的分离株进行血清型鉴定、种系发育群检测、多位点序列分型(MLST)、毒力基因检测、动物致病性试验及耐药分析。结果显示:共分离出83株致病性大肠杆菌,鉴定出15种血清型,其中O2、O1、O78、O14为优势血清型,种系发育群分为B2、B1、A和D群,高致病性株主要来自B2、B1群;MLST分析共得到12种ST型,其中ST95、ST481、ST350为主要ST型;分离株irp2、fyuA、iutA、fimC毒力基因携带率为100%,其中38.55%菌株同时携带irp2、afa、fyuA、iutA、hlyF、iss、papC、fimC毒力基因;雏鸡致病性试验检出高致病性菌株46株(55.42%)、中等致病性菌株31株(37.35%)、低等致病性菌株6株(7.23%);分离株对10种常用抗生素有不同程度耐药,其中对四环素和新生霉素耐药最严重,耐药率分别为96.38%和92.77%。结果表明,湖南省致病性大肠杆菌遗传关系整体复杂多态,且致病性较高,耐药广泛,提示该地区应加强对大肠杆菌病的防控。
刘伯承燕海峰罗阳王慧杨俊陈一峰周望平
关键词:禽致病性大肠杆菌血清型毒力基因MLST耐药性
双组份系统调控致病性大肠杆菌生物被膜的研究进展
2024年
致病性大肠杆菌是一种典型的肠道外致病性大肠杆菌,能够引起各种肠道外疾病,给类养殖业造成重大的经济损失。生物被膜作为一种保护细菌的物理屏障用于抵御抗生素的损伤及逃避宿主的免疫系统,从而导致宿主持续和反复感染。双组份系统是普遍存在于各类细菌中主要的信号传导系统,参与调控细菌抗生素耐药和生物被膜的形成。为了解由生物被膜造成的致病性大肠杆菌感染机制,文章详述了生物被膜的形成过程,并综述了双组份系统调控生物被膜形成的分子机制,以期探寻阻断双组份系统信号转导的新方法以破坏生物被膜的形成作为控制致病性大肠杆菌感染的治疗策略,从而为防治由生物被膜引起的抗生素耐药以及持续或反复感染提供研究方向。
于鲁敏王香菲王依洁徐仰慧刘若晗王晓哲
关键词:禽致病性大肠杆菌生物被膜

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祁克宗
作品数:365被引量:1,206H指数:17
供职机构:安徽农业大学
研究主题:禽致病性大肠杆菌 Β-防御素 PHOP 大肠杆菌 APEC
涂健
作品数:168被引量:398H指数:10
供职机构:安徽农业大学
研究主题:禽致病性大肠杆菌 PHOP APEC Q Β-防御素
王少辉
作品数:137被引量:391H指数:10
供职机构:中国农业科学院上海兽医研究所
研究主题:禽致病性大肠杆菌 鸭疫里默氏杆菌 毒力基因 血清型 生物学特性
韩先干
作品数:187被引量:401H指数:9
供职机构:中国农业科学院上海兽医研究所
研究主题:禽致病性大肠杆菌 鸭疫里默氏杆菌 原核表达 生物学特性 单克隆抗体
于圣青
作品数:248被引量:640H指数:14
供职机构:中国农业科学院上海兽医研究所
研究主题:鸭疫里默氏杆菌 新城疫病毒 禽致病性大肠杆菌 单克隆抗体 CLASS