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多色熔解 曲线 法 快速检测5种小鼠病原体 2025年 熔解 曲线 分析技术(multicolor melting curve analysis,MMCA),建立起一套高效、低成本的同时检测5种小鼠病原体(金黄色葡萄球、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、嗜肺巴斯德杆菌、变形杆菌)的多重检测方案,用于快速检测实验动物感染情况。同时添加辣椒基因组作为内参,排除假阴性干扰,使结果更准确可靠。通过对探针进行设计,使不同病原菌在不同荧光通道的不同的Tm值处出现熔解 峰:在FAM荧光通道,金黄色葡萄球菌和肺炎克雷伯菌的熔解 峰Tm值分别为(53.51±0.94)℃、(61.23±0.34)℃;在ROX通道,铜绿假单胞菌和嗜肺巴斯德杆菌的熔解 峰Tm值分别为(61.70±0.66)℃、(55.98±0.10)℃;在CY5通道,变形杆菌和辣椒内参的熔解 峰Tm值分别为(63.91±0.19)℃、(57.43±0.31)℃。经验证,该方法 对不同病原体具有不同的检测限,分别为金黄色葡萄球菌102 copies/μL、肺炎克雷伯菌101 copies/μL、铜绿假单胞菌102 copies/μL、嗜肺巴斯德杆菌102 copies/μL、变形杆菌102 copies/μL。综上,研究建立的多色熔解 曲线 方法 能够对多种小鼠常见病原体在单管内进行快速有效的检测。关键词：分子检测 一种基于熔解 曲线 法 检测核酸变异的探针和引物、方法 熔解 曲线 法 检测核酸变异的探针和引物、方法 。一种基于熔解 曲线 法 检测核酸变异的探针和引物，引物由上游引物和下游引物组成；探针为发夹型结构探针，从5'端到3'端依次为茎、环和茎，两条茎...一种荧光PCR熔解 曲线 法 检测HLA基因型的试剂盒 熔解 曲线 法 检测HLA基因型的试剂盒，包含HLA‑A、HLA‑B、HLA‑DRB1、HLA‑DQB1的基因分型，以含引物的96孔光学反应板进行扩增，藉由SYBR Green I对扩增的双股DNA产...一种基于熔解 曲线 法 检测核酸变异的探针和引物、方法 熔解 曲线 法 检测核酸变异的探针和引物、方法 。一种基于熔解 曲线 法 检测核酸变异的探针和引物，引物由上游引物和下游引物组成；探针为发夹型结构探针，从5'端到3'端依次为茎、环和茎，两条茎...高胆红素血症基因荧光PCR熔解 曲线 法 检测试剂盒及方法 熔解 曲线 法 检测试剂盒，包括包括核酸反应液、DNA聚合酶混合液、W1引物探针试剂、W2引物探针试剂、W3引物探针试剂、W4引物探针试剂、W5引物探针试剂、野生型质控品A、野生型质控品B...一种利用四通道荧光标记的熔解 曲线 法 检测人乳头瘤病毒基因分型的试剂、试剂盒和应用 熔解 曲线 法 检测人乳头瘤病毒基因分型的试剂、试剂盒和应用，采用4X Lyo‑PCR buffer可冻干扩增试剂搭配设计的特异性引物和探针组合，使用独特的全组分冻...荧光PCR熔解 曲线 法 联合Sanger测序技术在新生儿耳聋基因筛查中的应用 2025年 熔解 曲线 法 在新生儿耳聋基因筛查中的准确性,了解本地区常见耳聋基因的变异类型及频率,为今后耳聋基因筛查和耳聋防控提供参考。方法 回顾性选取2022年11月-2023年10月于宁波大学附属妇女儿童医院分娩,并进行耳聋基因检测的5563例新生儿。采用荧光PCR熔解 曲线 法 检测4个常见耳聋基因(GJB 2、SLC 26 A 4、线粒体12 S rRNA和GJB 3)的15个变异位点,再采用Sanger测序验证阳性样本。结果5563例新生儿中,检出耳聋基因变异256例,总检出率为4.60%,其中GJB 2基因变异156例,检出率为2.80%;SLC 26 A 4基因变异73例,检出率为1.31%;线粒体12S rRNA基因变异10例,检出率为0.18%;GJB 3基因变异16例,检出率为0.29%;同时检出1例复合杂合变异,检出率为0.02%。阳性样本经Sanger测序验证,发现9例结果不相符,因此,荧光PCR熔解 曲线 法 的准确率为96.48%。结论本地区新生儿耳聋基因变异以GJB 2和SLC 26 A 4基因为主;荧光PCR熔解 曲线 法 联合Sanger测序法 可准确检出耳聋基因变异情况,有助于及早发现先天性、药物性和迟发性耳聋,对早期预防和早期治疗耳聋具有重要意义。关键词：耳聋基因 基因变异 新生儿 基于多重探针熔解 曲线 法 的八种食源性致病菌联检试剂盒 熔解 曲线 法 的八种食源性致病菌联检试剂盒，属于微生物检测技术领域。本发明提供的试剂盒中的引物探针Mix包括SEQ ID NO.1‑16所示的引物、SEQ ID NO.17‑24所示的探针和SEQ I...一种基于FRET探针熔解 曲线 法 检测微卫星位点PentaC的试剂盒及方法 熔解 曲线 法 检测微卫星位点PentaC的试剂盒及方法 ，试剂盒包括特异扩增PentaC位点的限制性引物SEQ ID NO.1和过量引物SEQ ID NO.2，一对特异检测PentaC位点状态的...荧光PCR熔解 曲线 法 在耐多药结核病诊治中的应用及分析 2024年 熔解 曲线 法 在耐多药结核病(MDR-TB)的快速诊断和有效药物快速筛选中的应用价值。方法 以利福平(RFP)、异烟肼(INH)、乙胺丁醇(EMB)、氟喹诺酮类(FQs)为检测药物,应用熔解 曲线 法 和微孔板药敏法 ,对比检测2021年1~7月贵阳市公共卫生救治中心罗氏固体培养阳性的84株菌株。两种方法 药敏结果不一致的菌株用基因测序法 作验证。结果 以微孔板法 为标准,熔解 曲线 法 对MDR-TB(微孔板诊断)的检出符合率、灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和Kappa值依次为89.3%(75/84)、91.5%(43/47)、86.5%(32/37)、89.6%(43/48)、88.9%(32/36)、0.78。溶解曲线 法 对RFP、INH、EMB、FQs的检出符合率、灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和Kappa值分别为76.2%~97.6%、86.7%~95.7%、73.9%~100%、41.9%~100%、94.1%~98.6%和0.45~0.95。对22份(26.19%,22/84)微孔板法 敏感、熔解 曲线 法 耐药的菌株进行测序验证,结果均显示含有耐药突变;而微孔板法 耐药、熔解 曲线 法 敏感的6份(0.71%,6/84)菌株在测序区域均为野生型。结论 荧光PCR熔解 曲线 法 对微孔板药敏法 检测结果的灵敏度、特异度、符合率、一致性均较高,可为耐多药结核病的初筛诊断及治疗方案制定提供实验室依据。关键词：熔解曲线法 耐多药结核病 耐药基因检测 药物筛选
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