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潮霉素抗性油菜遗传转化体系优化
2023年
油菜分子育种有赖于高效的遗传转化技术。为提高甘蓝型油菜的遗传转化效率,采用油菜品种中双6号为材料,以下胚轴为外植体,通过农杆菌介导遗传转化,通过改变筛选培养基状态,增加液体培养基筛选处理的方式,对以潮霉素为筛选剂的油菜遗传转化体系进行了优化。在传统的固体筛选培养基培养21 d后,以液体筛选培养基形式对愈伤组织进行3 d再筛选培养。与传统方法相比,优化后再生苗形成提前约一周,出苗率提高6.94%,转基因苗阳性率提高15%,总转化效率提高6%。综上,该优化后的方法可为油菜基因功能解析与转基因育种研究提供有效技术支撑。
刘婧琳范世航华玮李俊
关键词:甘蓝型油菜潮霉素下胚轴农杆菌介导法
一种快速检测转基因马铃薯潮霉素抗性的方法
2022年
[目的]研究离体叶片的潮霉素筛选体系是否可用于鉴定马铃薯转基因植株。[方法]首先,PCR扩增检测TO代转基因植株的潮霉素标记。其次,将离体叶片浸泡在对照(6-BA)以及不同浓度的处理溶液(6-BA和潮霉素)中,观察TO代及T1代离体叶片的颜色变化。[结果]转基因T0代植株和阴性对照的潮霉素筛选结果与PCR鉴定结果一致。将该筛选体系用于转基因植株自交后代分离群体,发现群体植株表现出明显的潮霉素抗感分离。试验结果表明,潮霉素筛选体系可以准确、高通量地鉴别转基因马铃薯植株。
颜雅文王野高冬丽
关键词:转基因马铃薯潮霉素离体叶片
一种含潮霉素抗性基因的转基因玉米的三环筛选方法
本发明公开了一种含潮霉素抗性基因的转基因玉米的三环筛选方法,将转基因玉米种子消毒后放到含有潮霉素的MS培养基上,待种子发芽出苗后,初步判断在潮霉素培养基上长出的玉米苗具有潮霉素抗性;将获得的在含潮霉素培养基上长出的玉米苗...
鞠会艳丛登立张婷婷郭铭凯省慧范冰玉
宁夏枸杞潮霉素抗性浓度筛选研究被引量:3
2022年
研究旨在探索适合枸杞的潮霉素筛选剂量,为枸杞基因功能的研究、遗传转化提供参考。以宁夏枸杞无菌苗叶片为外植体,设置4个潮霉素浓度梯度,研究其对诱导愈伤组织和愈伤组织诱导分化芽的影响,以选出适合枸杞转化体筛选的抗生素剂量。结果表明,随着潮霉素浓度的升高,其对枸杞诱导愈伤组织和愈伤组织诱导芽分化的抑制作用加强。潮霉素浓度越高,枸杞叶片的出愈率越低,愈伤组织的褐化率越高,且叶片逐渐变黄、白化甚至死亡。将潮霉素作为抗性选择标记时,抗性浓度以2 mg/L为最佳。
樊云芳刘露露张晶罗青张波曹有龙
关键词:宁夏枸杞潮霉素
一种潮霉素抗性高效油菜遗传转化的方法
本发明公开了一种潮霉素抗性高效油菜遗传转化的方法,其步骤是:A.油菜种子的灭菌及播种;B.以农杆菌介导,将携带潮霉素筛选标记的目的载体转入油菜下胚轴;C.愈伤筛选过程中固体筛选培养基培养21天后,转入相同成分液体筛选培养...
华玮李俊刘婧琳范世航
一种含有eGFP标记和潮霉素抗性双元载体的构建方法
本发明公开了一种含有eGFP标记和潮霉素抗性双元载体的构建方法,以载体pCAMBIA3301为基础构建潮霉素抗性双元质粒,与含有eGFP标记基因的表达盒无缝克隆连接。摒弃了传统转化子鉴定中基因组PCR过程,采取了更为直观...
胡懋曾杨璇杨正凤张榕赵元昊者园园黄遵锡
一种敲除转基因植物中潮霉素抗性基因的方法
本发明公开了一种敲除转基因植物中潮霉素抗性基因的方法,解决了现有转基因植物普遍存在的选择标记基因潮霉素抗性基因的去除问题。从而在技术上解决了再次转基因选择标记基因难找的问题,而且在农业生产上,也排除了潮霉素抗性基因存在于...
陈克贵彭梅芳范晓丽
潮霉素抗性基因及其应用
本发明涉及一种潮霉素抗性基因及其应用,其解决了潮霉素抗性基因在假丝酵母菌中不能正常表达,从而不能作为筛选标记来使用的技术问题,其编码区核苷酸序列如序列表的序列12和13所示。本发明同时提供了其应用,可用于假丝酵母菌的基因...
张子娟赖小勤葛书华晏礼明杨勇陶勇傅深展
巨霸杨组培再生体系的建立及潮霉素抗性试验被引量:7
2015年
以巨霸杨为试材,采用不同植物激素组合及潮霉素不同浓度梯度筛选法,研究了巨霸杨组培再生体系建立及潮霉素对叶片和茎尖苗生长分化的影响。结果表明:诱导叶片芽分化的最佳培养基为MS4-6-BA0.25mg/L+IBA0.1mg/L,再生芽在1/2MS+IBA0.3mg/L上生根形成完整植株。通过对无菌苗叶片和茎尖材料不同浓度梯度潮霉素抗性筛选试验,发现潮霉素(Hygromycin)对巨霸杨产生了较为敏感的选择压力,随着培养天数的增加潮霉素的抑制作用越来越明显。同茎尖苗比,叶片对潮霉素更为敏感。叶片培养2d后即有明显受损表现,茎尖苗在培养4d后才出现损伤。14d后,在4mg/L潮霉素条件下只有个别叶片在叶柄基部有少量芽分化;6mg/L以上潮霉素条件下叶片及茎尖苗则全部失绿死亡。经过对比,确定巨霸杨的潮霉素筛选临界浓度范围为4~6mg/L。该研究为巨霸杨的基因转化奠定了技术基础。
王桂英刘晓杰李珊珊孙超杨金库杨敏生刘美玲
关键词:潮霉素
潮霉素抗性基因筛选标记质粒的构建及LL37的表达被引量:4
2012年
为了实现以潮霉素磷酸转移酶基因(hpt)为选择标记的质粒在毕赤酵母中高效表达抗菌肽LL37,在pGAPZαA质粒的基础上,通过EcoRⅤ、BamHⅠ双酶切将Zeocin抗性基因替换成潮霉素磷酸转移酶基因,获得的表达质粒命名为pGAPHαA。根据LL37氨基酸序列,通过毕赤酵母密码子偏嗜性改造,合成的LL37基因片段克隆到pGAPHαA质粒中,获得重组分泌型表达质粒pGAPHαA-LL37,线性化后电击转化毕赤酵母SMD1168,经潮霉素B筛选阳性转化子。72h表达上清LL37蛋白含量约为167μg/mL,表达产物耐热性好,对大肠杆菌DH5α、猪链球菌最小抑菌浓度分别为2.94、7.06μg/mL。
徐义兵刘娜黄毓茂
关键词:毕赤酵母

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陈发棣
作品数:652被引量:3,217H指数:30
供职机构:南京农业大学
研究主题:菊花 切花菊 菊属 菊花品种 菊属植物
陈素梅
作品数:348被引量:1,293H指数:21
供职机构:南京农业大学
研究主题:菊花 切花菊 菊花品种 菊属 植物表达载体
管志勇
作品数:260被引量:772H指数:16
供职机构:南京农业大学
研究主题:菊花 切花菊 菊花品种 菊属 菊花新品种
薛栋升
作品数:210被引量:111H指数:7
供职机构:湖北工业大学
研究主题:白酒 纤维素酶 黑曲霉 限制性内切酶 发酵
王泽生
作品数:176被引量:490H指数:15
供职机构:福建省农业科学院
研究主题:双孢蘑菇 蘑菇 食用菌 RAPD 杂交育种