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移植前供受者混合淋巴细胞反应后转录组测序预测重度急性移植物抗宿主病
本文分为以下几个部分进行探讨:  第一部分 移植前供受者混合淋巴细胞反应后转录组测序预测重度急性移植物抗宿主病  研究背景:  异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)是目前治疗多种恶性血液病和非恶性血液病的重要方法,...
刘佳
关键词:急性移植物抗宿主病混合淋巴细胞反应转录组测序
一种用于混合淋巴细胞共培养试验检测的方法和试剂盒
本发明公开了一种用于混合淋巴细胞共培养试验检测的方法和试剂盒。本发明的方法和试剂盒可用于混合淋巴细胞共培养试验的检测,适用于器官移植前的组织配型试验,免疫力低下患者的免疫功能检测,药物及移植物的免疫排斥作用检测,其他细胞...
杜飞
ILT基因转染小鼠树突状细胞抑制混合淋巴细胞反应
2016年
通过体外培养扩增受体小鼠来源的骨髓树突状细胞,转染ILT基因后体外与供体造血干细胞移植物混合培养,通过抑制混合淋巴细胞反应,从而改善移植物抗宿主反应;方法 分离培养小鼠DC,以ILT重组腺病毒转染培养的DC,混合淋巴细胞反应检测转染细胞的功能。结果 与对照组相比转染细胞能明显地抑制混合淋巴细胞反应。
胡慧平王恺张晋萍
关键词:树突状细胞基因转染
冬虫夏草提取物对混合淋巴细胞培养体系Treg/Th17轴的影响被引量:5
2016年
目的观察冬虫夏草提取物对混合淋巴细胞(MLC)培养体系Treg/Th17轴的影响,探讨冬虫夏草提取物的免疫调节机制。方法体外建立单向混合淋巴细胞培养体系,用冬虫夏草提取物干预培养体系,在不同的时间点收集细胞,采用流式细胞术检测细胞中辅助性T细胞17(Th17细胞)和CD4+CD25+T调节性T淋巴细胞(Treg细胞)的比例,并计算出Th17细胞与Treg细胞的比值;采用酶联免疫吸附试验法分别检测培养液白细胞介素(IL)-17、IL-23、IL-2和IL-6的浓度。结果冬虫夏草提取物干预组12、24、36h三个时间点T细胞中Treg细胞比例分别为(13.17±1.25)%、(12.3±1.31)%、(11.89±1.46)%,同时间点对照组T细胞Treg细胞比例分别为(11.04±1.32)%、(10.16±1.15)%、(8.91±0.97)%,差异均有统计学意义(P<0.05);干预组T细胞中Th17细胞比例分别为(2.81±0.13)%、(4.02±0.38)%、(4.95±0.49)%,同时间点的对照组T细胞中Th17细胞比例分别为(4.65±0.31)%、(6.63±0.63)%、(8.03±0.76)%,差异均有统计学意义(P<0.05)。冬虫夏草提取物干预组12、24、36h三个时间点T细胞中Th17细胞与Treg细胞的比例均显著低于同时间点的对照组(P<0.05)。冬虫夏草提取物干预组12、24、36h三个时间点培养液IL-2水平明显高于同时间点对照组(P<0.05),而干预组培养液IL-6、IL-17、IL-23水平低于同时间点的对照组(P<0.05)。结论冬虫夏草提取物能够明显促进MLC体系细胞中Treg细胞增殖,抑制Thl7细胞增殖,降低Th17/Treg细胞比值,改变Th17/Treg轴的平衡,同时增加IL-2分泌、减少IL-6、IL-17、IL-23分泌,有利于诱导免疫耐受。
杨梅张岩金昊李一夫夏鹏郑少玲蔡勇陈必成杨亦荣
关键词:冬虫夏草提取物辅助性T细胞17调节性T细胞
PDL_1Ig基因修饰的恒河猴肝细胞混合淋巴细胞反应中的效应研究被引量:1
2015年
目的探讨恒河猴来源的PDL1Ig在体外混合淋巴细胞反应中的作用。方法在Gen Bank中检索到恒河猴目的基因PDL1和Ig G1Fc的序列,采用重叠延伸PCR法合成该目的基因,与p GEM-T连接转化感受态E.coli TOP10,经鉴定得到PDL1Ig基因,p Shuttle-CMV线性化后连接目的基因转化感受态E.coli TOP10,克隆p Shuttle-CMV/PDL1Ig重组穿梭质粒。将p Ad Easy-1和线性p Shuttle-CMV/PDL1Ig共电转至BJ5183细胞中同源重组,构建重组腺病毒载体p Ad Easy-1/PDL1Ig骨架,以脂质体2000将p Ad Easy-1/PDL1Ig转染至293细胞中包装成有活性的重组腺病毒。感染恒河猴肝细胞,RT-PCR和Western blotting检测目的基因的表达。混合淋巴细胞反应(MLR)测定其生物学活性。结果成功构建了PDL1Ig重组腺病毒载体,能感染恒河猴肝细胞,RT-PCR和Western blotting检测有目的基因表达,在混合淋巴细胞反应中其能抑制T细胞增殖。结论成功构建了p Ad Easy-1/PDL1Ig重组腺病毒载体,其可在恒河猴肝细胞中高效表达,该重组蛋白可在体外通过PD-1/PDL1通路抑制T淋巴细胞增殖。
李鹏张玉毅李恒平丁正华王毅赵云邓仲鸣
关键词:腺病毒载体混合淋巴细胞反应
沉默CD86树突状细胞在异种胰岛混合淋巴细胞培养中的作用研究
2015年
目的探讨沉默CD86的树突状细胞(DC)在异种胰岛混合淋巴细胞培养中的作用。方法分离培养BALB/c小鼠骨髓来源DC,流式细胞仪鉴定后,以CD86siRNA转染DC。分离纯化SD大鼠胰岛,吖啶橙(AO)/碘化丙啶(PI)双荧光染色方法检测胰岛细胞活性;提取SD大鼠脾脏淋巴细胞,与经siRNA沉默CD86的DC混合培养,使DC负载SD大鼠抗原。在400胰岛当量SD大鼠胰岛细胞+1×106个BALB/c小鼠淋巴细胞(对照组1)基础上,混合普通DC(负载SD大鼠抗原)(对照组2)或siRNA沉默CD86的DC(负载SD大鼠抗原)(实验组)进行体外培养,另以单纯SD大鼠胰岛细胞为空白组,培养3d后倒置显微镜下检测细胞形态学变化,测定上清液中反映淋巴细胞增殖的细胞因子白介素(IL)-2、IL-4、IL-10及干扰素(IFN)-γ水平,AO/PI染色观察胰岛活性,并行葡萄糖刺激胰岛素释放实验,计算刺激指数。结果培养所得的细胞具有典型的DC形态,流式细胞仪检测DC表面CD11c、CD80、CD86的表达阳性率分别为(86.26±9.73)%、(72.64±8.55)%、(77.18±10.23)%。CD86siRNA转染DC后CD86沉默。SD大鼠胰岛杂质较少,形态正常,细胞活性>95%。混合细胞培养3d后,与对照组1、2比较,实验组的IL-10水平升高(P<0.05),IL-4水平相当(P>0.05),IL-2、IFN-γ均降低(P<0.05),淋巴细胞增殖最少,胰岛功能最好,刺激指数最高。实验组4种细胞因子均高于空白组(P<0.05),刺激指数低于空白组(P<0.05)。结论沉默CD86的DC负载供体抗原后,与供体胰岛、受体淋巴细胞混合培养,可在一定程度上减轻免疫排斥反应,从而保护供体胰岛功能。
苏安平田伯乐张肇达李全生
关键词:树突状细胞异种胰岛移植CD80/CD86
表达US3腺病毒载体对混合淋巴细胞和NK细胞反应中γ干扰素和穿孔素表达的影响
2015年
目的探讨表达US3基因的重组腺病毒载体介导其转染供体外周血单个核细胞(PBMCs)的免疫逃逸活性。方法首先构建表达US3基因的腺病毒载体,扩增纯化后转染供体PBMCs,利用混合淋巴细胞和NK细胞反应,通过检测反应中γ干扰素和穿孔素的表达量,观察表达US3基因重组腺病毒载体的免疫活性。结果表达US3基因重组腺病毒载体r-US3能够明显降低混合淋巴细胞和NK细胞反应中细胞因子γ干扰素和穿孔素的产量,抑制混合淋巴细胞和NK细胞反应活性。结论表达US3基因腺病毒载体在一定程度上能够介导其转染供体PBMCs的免疫逃逸,降低机体免疫系统对其转染细胞的排斥反应。
王鹏阚全程李玲潘雪余祖江
关键词:免疫逃逸Γ干扰素穿孔素
MG132诱导HL-60细胞表达共刺激分子CD86及其对混合淋巴细胞反应的影响(英文)
2014年
本研究探讨蛋白酶体抑制剂MG132诱导HL-60细胞表达共刺激分子CD80、CD86及其对混合淋巴细胞反应的作用。流式细胞仪检测MG132诱导HL-60细胞表达共刺激分子CD80、CD86及细胞活力;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分析CD80和CD86 mRNA表达情况;MG132诱导HL-60细胞表达共刺激分子CD86后,用75 Gy Co-60照射HL-60细胞,杀死HL-60细胞,保留抗原性作为刺激细胞,用健康人外周血单个核细胞作为反应细胞,用不同浓度HL-60细胞刺激健康人单个核细胞,HL-60细胞对健康人单个核细胞的增殖作用。结果表明:MG132上调HL-60细胞表达CD86,MG132诱导HL-60细胞的凋亡率呈浓度依耐性和时间依耐性。结论:高浓度的MG132对HL-60细胞有直接杀灭作用,低浓度MG132诱导HL-60细胞表达共刺激分子CD86,对健康人单个核细胞有增殖作用。MG132诱导HL-60细胞表达共刺激分子CD86,能促进健康人单个核细胞的增殖。
余美霞刘迅周咏明程艳香程静邱宇珍邢晓磊姚春红白如君
关键词:蛋白酶体抑制剂共刺激分子CD86
牙髓干细胞MHC分子表达与体外混合淋巴细胞的增殖被引量:6
2014年
背景:若牙髓干细胞诱导分化后仍然具有与未分化时相似的免疫调节能力,则有可能为组织工程提供同种异体种子细胞来源。目的:观察牙髓干细胞表面免疫分子的表达以及体外调节淋巴细胞反应的功能。方法:从C57BL/6小鼠牙髓组织中分离获取牙髓干细胞,体外培养至第2代,流式细胞仪检测免疫分子MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ的表达。以1×105/孔牙髓干细胞刺激异体淋巴细胞,观察细胞增殖情况。以1×105/孔数量的牙髓干细胞或经γ-干扰素作用后的牙髓干细胞加入混合双向淋巴细胞反应体系中,观察淋巴细胞增殖情况。结果与结论:牙髓干细胞表达MHC-Ⅰ类分子,但未检测到MHC-Ⅱ类分子阳性表达。γ-干扰素刺激48 h后,MHC-Ⅰ表达未见明显增高,MHC-Ⅱ类分子表达明显增高。异体或经γ-干扰素作用的牙髓干细胞均未能刺激淋巴细胞体外增殖。说明牙髓干细胞可在体外调节淋巴细胞增殖反应,有可能成为组织工程或细胞治疗中同种异体细胞来源。
聂姗姗刘佳张瑞涵王璇李伯琦孙大磊热甫卡提刘奕杉
关键词:干细胞牙髓牙髓干细胞混合淋巴细胞培养MHC抗原
霉酚酸及其衍生物对人T淋巴细胞混合淋巴细胞免疫应答的影响被引量:1
2013年
目的探讨霉酚酸及霉酚酸衍生物对人T淋巴细胞混合淋巴细胞免疫应答的影响。方法从正常人外周血中分离单个核淋巴细胞(PBMC),在抗CD3刺激下和混合淋巴细胞反应体系中,加入或不加霉酚酸及其衍生物共培养,应用ELISA和流式细胞术检测CD4+和CD8+T细胞细胞因子的产生、细胞活化和增殖情况。结果经抗CD3刺激后,PBMC产生的细胞因子明显增加,加入霉酚酸及其衍生物后,IFN-γ及TNF-α明显降低,IL-2产生略有增加。在混和淋巴细胞反应体系中,3种细胞因子产生皆被抑制。抗CD3刺激和混和淋巴细胞反应后,T细胞表面活化分子CD25及CD69表达增加,加入霉酚酸及其衍生物共培养24、48 h后,T细胞CD25及CD69的表达并未被抑制。霉酚酸及其衍生物可抑制抗CD3刺激下和混和淋巴细胞反应后T细胞的增殖。结论霉酚酸及其衍生物对T淋巴细胞混合淋巴细胞体系中因子的产生和细胞增殖都有抑制作用,为其在临床自身免疫疾病及移植排斥中的广泛应用提供了理论依据。
孙怡杨滨燕王慧吴长有
关键词:霉酚酸T细胞混合淋巴细胞培养

相关作者

张学光
作品数:1,065被引量:2,583H指数:19
供职机构:苏州大学附属第一医院
研究主题:单克隆抗体 树突状细胞 共刺激分子 CD40 T细胞
易善红
作品数:73被引量:257H指数:9
供职机构:第三军医大学新桥医院
研究主题:HLA衍生肽 膀胱癌 多药耐药性 血红素氧化酶-1 肾脏
汪泽厚
作品数:112被引量:252H指数:9
供职机构:空军总医院
研究主题:肾移植 HLA衍生肽 肾移植术后 免疫抑制剂 免疫耐受
吴雄文
作品数:173被引量:415H指数:10
供职机构:华中科技大学
研究主题:实验教学 HLA-A2 可溶性 HLA 教学改革
张艮甫
作品数:244被引量:566H指数:10
供职机构:第三军医大学新桥医院
研究主题:肾移植 肾病 移植肾 肾移植受者 排斥反应