搜索到35篇“ 氧化复性“的相关文章
- rhIFN-κ包涵体的氧化复性与纯化
- 2023年
- 干扰素卡帕(Interferon-Kappa, IFN-κ)是一种具有抗病毒、抗肿瘤及免疫调节等重要功能的蛋白质,独特的分泌方式和生理功能使其在临床上具有良好的应用前景。通过大肠杆菌以包涵体形式表达的重组人干扰素卡帕(rhIFN-κ)需要经过体外折叠复性才能获得生物活性,由于IFN-κ含两对二硫键,因此复性时面临易生成沉淀和二硫键难以正确氧化等双重挑战。本研究采用强阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠(SDS)溶解包涵体,并在复性过程添加多元醇2-甲基-2,4-戊二醇(MPD)逐渐剥离与蛋白质紧密结合的SDS,实现rhIFN-κ的氧化复性。研究发现,rhIFN-κ复性后主要形成了二硫键不同氧化程度的三种结构,包括完全氧化的正确结构、部分氧化的中间体和完全未氧化的变性蛋白。在SDS/MPD复性体系中,rhIFN-κ完全氧化的复性收率与两者浓度及比例密切相关。SDS浓度过低或MPD浓度过高易导致蛋白质沉淀或聚集,SDS浓度过高或MPD浓度过低则会抑制二硫键的正确氧化。进一步对氧化还原体系及pH值进行优化,确定了最优的复性缓冲液:添加0.05wt%SDS, 1 mol/L MPD, 0.2 mmol/L氧化型谷胱甘肽(GSSG), 0.1 mmol/L还原型谷胱甘肽(GSH)的20 mmol/L Tris, pH=9.5。且在此条件下,蛋白质浓度提高至2.0 mg/mL时,rhIFN-κ复性收率基本不变。室温复性24 h,rhIFN-κ的复性收率达66%。利用制备反相高效液相色谱一步纯化,可有效去除杂质及复性中间体等错误结构,获得非还原电泳为单一条带的纯度90%的rhIFN-κ。结果表明,SDS/MPD体系能抑制包涵体复性时沉淀形成的同时还能有效提高二硫键的正确氧化,该结果可为rhIFN-κ的规模化生产奠定良好的基础。
- 吴佳奇张宇翔张路瑶颜灵樱余蓉刘永东张耀张纯
- 关键词:包涵体氧化复性
- 质量源于设计在白介素-2氧化复性中的应用
- 2017年
- 目的:阐述质量源于设计理念应用于药品工艺开发的具体做法。方法:将Qb D理念应用于白介素-2(IL-2)氧化复性中,使用实验设计(DOE)的方法,以天然结构复性收率为关键质量属性,研究优化了IL-2(Ser125和Cys125)氧化复性工艺的关键参数及其水平。结果:在设计空间内,复性后天然结构IL-2(Ser125和Cys125)的最优回收率分别>90%和>70%,聚合体含量不高于6%。在此基础上,对IL-2(Cys125)优化的工艺参数进行放大验证,试验结果基本与预期相符。结论:Qb D理念可应用于IL-2氧化复性的工艺开发。
- 王晓山刘婷婷王文文朱鹿燕李博苏鸿声
- 关键词:白介素-2
- 精氨酸对牛胰核糖核酸酶氧化复性的时相性抑制作用被引量:2
- 2014年
- 精氨酸常在重组蛋白的体外复性中,作为一种小分子添加剂用于抑制蛋白聚集。精氨酸对蛋白复性折叠过程本身的影响尚不清楚。首次以不易聚集的牛胰核糖核酸酶为研究对象,通过飞行质谱检测氧化复性中间体的变化,通过酶学活性检测蛋白活性的恢复过程,观察了精氨酸对氧化复性的直接影响。发现不同浓度精氨酸对牛胰核糖核酸酶的氧化复性有直接的抑制作用。特别在0.5 mol/L浓度时,精氨酸对牛胰核糖核酸酶氧化复性的抑制作用具有独特的时相依赖性:早期复性可持续至4 h,其活性恢复达30%后,晚期复性基本终止。这种抑制特征与脲的抑制作用有明显的不同,精氨酸没有完全抑制关键结构中间体的形成。结果说明,牛胰核糖核酸酶的氧化复性,除经关键结构中间体的主要通路外,还可能存在一个潜在复性通路,它是其氧化复性后期的关键限速通路。该复性通路可以被0.5 mol/L精氨酸完全阻断。
- 冯崔香邓丽刚闫征杜国华王楠
- 关键词:精氨酸氧化复性中间体
- 含分子内二硫键的寡肽分子及在辅助蛋白质氧化复性中的应用
- 本发明公开了一种含分子内二硫键的寡肽分子及在辅助蛋白质氧化复性中的应用,能与DTT构成氧化还原对来辅助蛋白质氧化复性的寡肽小分子。所述寡肽包括两条寡肽,具有SEQ ID No.1及SEQ ID No.2氨基酸序列。采用此...
- 孙彦王国珍史清洪董晓燕
- 模拟折叠酶功能的小分子化合物N-烷基酰胱胺、制备方法及用于辅助蛋白质氧化复性的方法
- 本发明涉及一种模拟折叠酶功能的小分子化合物N-烷基酰胱胺、制备方法及用于辅助蛋白质氧化复性的方法;此小分子作为氧化剂使用则即使在强还原的环境下也能够促进蛋白质二硫键的形成,所以省去将强还原剂DTT从还原变性的蛋白质溶液中...
- 孙彦王国珍史清洪董晓燕
- 文献传递
- 含分子内二硫键的寡肽分子及在辅助蛋白质氧化复性中的应用
- 本发明公开了一种含分子内二硫键的寡肽分子及在辅助蛋白质氧化复性中的应用,能与DTT构成氧化还原对来辅助蛋白质氧化复性的寡肽小分子。所述寡肽包括两条寡肽,具有SEQ ID No.1及SEQ ID No.2氨基酸序列。采用此...
- 孙彦王国珍史清洪董晓燕
- 蛋白质氧化复性新方法
- 本发明公开了将活性状态下含二硫键的蛋白,由还原变性状态转化为活性状态,从而获得生物活性蛋白产品的方法。该方法通过色谱基质与变性蛋白的接触和/或吸附,在变性剂和其它杂质与蛋白分子分离后,使变性蛋白、或/和其结构中间体迅速形...
- 王楠芦娜吕春婉
- 文献传递
- 模拟折叠酶功能的小分子化合物N-烷基酰胱胺、制备方法及用于辅助蛋白质氧化复性的方法
- 本发明涉及一种模拟折叠酶功能的小分子化合物N-烷基酰胱胺、制备方法及用于辅助蛋白质氧化复性的方法;此小分子作为氧化剂使用则即使在强还原的环境下也能够促进蛋白质二硫键的形成,所以省去将强还原剂DTT从还原变性的蛋白质溶液中...
- 孙彦王国珍史清洪董晓燕
- 折叠酶模拟物(酰基胱胺)辅助蛋白质氧化复性
- 蛋白质氧化折叠不仅与体内的一些疾病过程相关,而且目前已经成为了含有二硫键的蛋白质包含体复性过程的瓶颈.蛋白质二硫键异构酶(PDI)和DsbA 蛋白是体内催化二硫键形成的重要折叠酶.为了有效地辅助体外蛋白的氧化复性,人们已...
- 王国珍董晓燕孙彦
- 关键词:氧化复性二硫键
- 文献传递
- 重组Hepcidin融合蛋白的氧化复性及活性鉴定
- 2010年
- 将诱导表达的His-hepcidin融合蛋白包涵体通过固定化金属离子配体亲和层析(IMAC)柱分离纯化后,在cys-teine/cystine氧化还原体系中氧化形成二硫键,稀释复性后用肠激酶将融合蛋白的his-tag切除。酶切后所得的Hepcidin经抑菌圈试验检验,对枯草芽孢杆菌等革兰氏阳性菌和部分革兰氏阴性菌具有抗菌活性。
- 王继雯谢宝恩甄静周伏忠陈国参
- 关键词:HEPCIDIN纯化氧化复性抑菌圈
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- 梁宋平

- 作品数:321被引量:1,084H指数:19
- 供职机构:湖南师范大学
- 研究主题:虎纹捕鸟蛛毒素 虎纹捕鸟蛛 蜘蛛 多肽 质谱
- 曾雄智

- 作品数:39被引量:88H指数:6
- 供职机构:湖南师范大学
- 研究主题:氧化复性 V 活性鉴定 钠通道 双语教学
- 邓梅春

- 作品数:30被引量:31H指数:3
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- 研究主题:膜片钳 氧化复性 钠通道 虎纹捕鸟蛛毒素 虎纹捕鸟蛛
- 王国珍

- 作品数:8被引量:1H指数:1
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- 研究主题:复性 氧化复性 胱胺 蛋白质 模拟物
- 孙彦

- 作品数:277被引量:718H指数:15
- 供职机构:天津大学
- 研究主题:蛋白质 复性 溶菌酶 配基 琼脂糖凝胶