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- 乳酸干预破骨细胞条件培养基促进内皮细胞血管的生成
- 2025年
- 背景:聚乳酸作为可降解的骨组织工程支架材料被广泛用于组织再生与修复研究,在促进组织愈合与新骨形成、血管生成中具有重要作用。目的:观察聚乳酸降解终产物乳酸对破骨细胞的作用,以及乳酸干预后破骨细胞条件培养基对血管内皮细胞增殖、迁移和小管形成功能的影响。方法:(1)取对数生长期的小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7,贴壁后分别加入含0,5,10,20 mmol/L乳酸的破骨诱导培养基(含核因子κB受体活化因子配体、体积分数10%胎牛血清的DMEM培养基),培养5 d后分别进行抗酒石酸酸性磷酸酶与细胞骨架纤维状肌动蛋白染色,培养24h后采用RT-PCR检测抗酒石酸酸性磷酸酶5 m RNA表达。(2)取对数生长期的RAW264.7细胞,贴壁后分2组培养:对照组加入破骨诱导培养基,实验组加入含10 mmol/L乳酸的破骨诱导培养基,培养5 d后更换为无血清DMEM培养基继续培养24 h,离心取上清液,分别与等体积含体积分数10%胎牛血清DMEM培养基混合后作用条件培养基备用。取对数生长期的人脐静脉内皮细胞,分别与对照组、实验组条件培养基共培养,通过CCK-8、Transwell、划痕、成管实验观察细胞的增殖、迁移和成管能力,通过RT-PCR和Western Blot检测血管生成相关基因和蛋白的表达。结果与结论:(1)抗酒石酸酸性磷酸酶与肌动蛋白染色结果显示,5,10 mmol/L乳酸可促进RAW264.7细胞破骨向分化,其中以10 mmol/L乳酸的促进作用更显著;RT-PCR检测结果显示,5,10,20 mmol/L乳酸均可提高酒石酸酸性磷酸酶5 m RNA的表达,其中以10 mmol/L乳酸的提高作用最显著;(2)与对照组条件培养基相比,实验组条件培养基可促进人脐静脉内皮细胞的增殖、迁移与成管能力(P<0.05),提高血管内皮生长因子、血管生成素1的m RNA和蛋白表达(P<0.05);(3)结果表明,乳酸诱导分化的破骨细胞条件培养基可促进内皮细胞的血管生成,机制可能与提高血管内皮�
- 黄宏莉聂闻麦昱颖覃媛廖红兵
- 关键词:破骨细胞条件培养基乳酸人脐静脉内皮细胞血管生成内皮细胞
- 骨髓间充质干细胞条件培养基修复坏死性小肠结肠炎肠上皮损伤
- 2025年
- 目的本研究旨在探讨骨髓间充质干细胞条件培养基(Mesenchymal stem cell-conditioned medium,MSC-CM)对坏死性小肠结肠炎肠上皮的修复作用。方法我们将大鼠小肠隐窝上皮细胞(IEC-6)分为对照组、NEC损伤组和NEC损伤+治疗组,后两组经受脂多糖诱导以构建NEC的体外模型,其中对照组和NEC损伤组加入正常培养基,而NEC损伤+治疗组则加入MSC-CM。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和荧光定量PCR(qPCR)来检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)以及白介素10(IL-10)的表达水平。PCNA法和Tunel法检测细胞增殖和凋亡。结果与对照组和NEC损伤组相比,经过MSC-CM干预后,NEC损伤+治疗组促炎因子TNF-α、IL-1β、IL-6的水平,细胞凋亡水平显著降低(P<0.05),而抗炎因子IL-10水平和细胞增殖水平显著提高(P<0.05)。结论MSC-CM可能通过抑制炎症反应以及细胞凋亡,增进细胞增殖以修复NEC损伤的小肠隐窝上皮细胞,这为NEC提供了有前途的药物。
- 张丽君沙卫红陈浩
- 关键词:骨髓间充质干细胞条件培养基坏死性小肠结肠炎
- 人脐带间充质干细胞条件培养基及外泌体对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响
- 2025年
- 背景:间充质干细胞可通过分泌含细胞因子、生长因子和外泌体的细胞外囊泡调节肿瘤微环境,对肿瘤细胞生物学行为进行精准调控。目的:研究人脐带间充质干细胞条件培养基及外泌体对肝癌细胞生物学特性的影响。方法:收集人脐带间充质干细胞培养上清,通过高速离心并过滤获得人脐带间充质干细胞条件培养基;收集人脐带间充质干细胞培养上清,通过超高速梯度离心法提取人脐带间充质干细胞外泌体。使用PKH26标记人脐带间充质干细胞外泌体,与肝癌细胞MHCC97-H共培养,荧光显微镜观察MHCC97-H细胞摄取外泌体情况。通过CCK-8增殖实验、Transwell迁移和侵袭实验以及流式凋亡实验评估人脐带间充质干细胞条件培养基、人脐带间充质干细胞外泌体对肝癌细胞生物学功能的影响。结果与结论:(1)人脐带间充质干细胞外泌体可被MHCC97-H细胞摄取且主要分布于细胞质中;(2)人脐带间充质干细胞条件培养基处理后,MHCC97-H细胞的增殖、迁移和侵袭能力显著增强(P<0.001,P<0.05,P<0.01),凋亡能力显著下降(P<0.001);而人脐带间充质干细胞外泌体处理后,MHCC97-H细胞的增殖能力下降(P<0.001),迁移、侵袭及凋亡能力显著增强(P<0.001);(3)结果表明,人脐带间充质干细胞条件培养基具有促进MHCC97-H细胞增殖、迁移、侵袭和抑制凋亡的能力;而人脐带间充质干细胞外泌体则具有促进MHCC97-H细胞迁移、侵袭及凋亡和抑制增殖的能力。
- 金凯唐婷李美乐谢裕安
- 关键词:肝癌人脐带间充质干细胞外泌体条件培养基增殖迁移凋亡
- 人诱导多能干细胞来源的皮肤类器官条件培养基对高糖诱导的人真皮成纤维细胞功能的影响
- 2025年
- 目的探讨人诱导多能干细胞(iPSC)来源的皮肤类器官条件培养基(SO-CM)对高糖诱导的人真皮成纤维细胞(Fb)功能的影响,为糖尿病创面提供治疗思路。方法该研究为实验研究。将人iPSC诱导成皮肤类器官。将人iPSC来源的皮肤类器官、人真皮Fb分别接种至皮肤类器官培养基(SOM)培养3 d后,收集细胞培养上清液,分别作为SO-CM和Fb条件培养基(Fb-CM)。采用酶联免疫吸附测定法检测SOM、Fb-CM和SO-CM中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素10(IL-10)、IL-18、CC类趋化因子配体2(CCL-2)以及血小板源性生长因子(PDGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、转化生长因子β(TGF-β)、表皮生长因子(EGF)、VEGF-β的含量。将高糖诱导的第8、9代人Fb按照随机数字表法分为SOM组、Fb-CM组、SO-CM组,分别使用均含终物质的量浓度35 mmol/L葡萄糖的SOM、Fb-CM、SO-CM培养。培养24 h后,行免疫荧光染色后计算Ki67阳性细胞比,采用细胞计数试剂盒-8检测细胞吸光度值,代表细胞增殖活力;行细胞划痕试验,计算划痕后13 h的细胞迁移率。培养48 h后,采用荧光探针法检测细胞中活性氧表达,采用β-半乳糖苷酶染色试剂盒检测细胞β-半乳糖苷酶阳性染色率(代表细胞衰老情况)。样本数均为3。结果3种培养基中TNF-α、IL-18、VEGF-β、PDGF、TGF-β含量比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。与SOM相比,Fb-CM和SO-CM中IL-10、EGF含量均明显减少(P<0.05),Fb-CM中CCL-2含量、SO-CM中VEGF含量均明显增加(P<0.05)。培养24 h后,Fb-CM组和SO-CM组的Ki67阳性细胞比[(45.2±6.0)%、(57.4±4.0)%]和吸光度值(124±5、158±12)均明显高于SOM组[(29.6±2.1)%、100±6,P<0.05],SO-CM组的Ki67阳性细胞比和细胞吸光度值均明显高于Fb-CM组(P<0.05)。划痕后13 h,Fb-CM组、SO-CM组细胞迁移率均明显高于SOM组(P<0.05)。培养48 h后,SO-CM组细胞活性氧水平明显高于SOM组、Fb-CM组(P值均<0.05)。培养48 h后,3组细胞β-半乳糖苷酶�
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