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- 马BMSCs成软骨细胞诱导分化及其关键lncRNAs-mRNAs的筛选分析
- 2025年
- 为进一步筛选BMSCs(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成软骨细胞诱导分化中关键lncRNAs、mRNAs,本研究以马BMSCs为研究对象,对向软骨细胞诱导不同分化阶段的细胞开展全转录组测序,筛选出在BMSCs成软骨细胞分化中具有重要功能的lncRNAs和mRNAs,并对mRNAs和lncRNAs及其靶基因进行验证,并构建lncRNAs对BMSCs成软骨细胞分化的调控网络。结果表明:1)体外成功建立了马BMSCs系,并成功诱导分化成软骨细胞。2)对不同分化阶段的BMSCs进行高通量转录组测序后,共鉴定出3592个lncRNAs,其中,差异高表达的lncRNAs有250个,低表达的116个,差异高表达的mRNAs有280条,低表达的105条。3)筛选并验证了5个调控马BMSCs向软骨细胞诱导分化中的潜在候选因子,包括lnc-cpm、lnc-traf3、lnc-22173、lnc-acvr2a及lnc-pde4d,以及9个对应靶标基因MDM2、TRAF3、USP25、ACVR2A、PDE4D、BCL2、WAF1、SIRT1及NRF2。4)构建了差异表达的lncRNA与mRNA互作调控网络,主要富集于Wnt信号通路、p53信号通路、MAPK及NF-κb信号通路中。综上,本研究经全转录组测序与分析,成功筛选到马BMSCs分化为软骨细胞过程中表达显著的差异基因,可为后续进一步揭示软骨细胞分化过程中lncRNAs与靶基因的互作机制奠定了必要的前期基础,为BMSCs用于软骨修复的细胞治疗提供了科学依据。
- 赵方歆魏奥凌宇房君朱纯霄焦如月赵赟瑶韩静吴凯峰李雪琼李涛曹俊伟周欢敏张焱如刘春霞
- 关键词:BMSCS诱导分化软骨细胞
- 过度机械应力调控Piezo1介导成软骨细胞铁死亡的机制探讨
- 2025年
- 目的探讨过度机械应力调控Piezo1通道诱发小鼠成软骨细胞铁死亡的作用机制。方法选取小鼠ATDC5成软骨细胞系进行实验,使用siRNA-Piezo1干扰质粒和Piezo1过表达质粒转染细胞,给予机械应力刺激(MS),构建对照组(Control组)、MS组、MS+siRNA-Piezo1组(MS+sh组)和MS+Piezo1过表达组(MS+OV组)。用细胞增殖和毒性检测法(CCK-8)检测各组细胞增殖活力,透射电镜观察线粒体的形态和结构,生化检测氧化应激和亚铁离子(Fe^(2+))水平,流式细胞术检测脂质活性氧(ROS)水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、Ⅱ型胶原蛋白(CollagenⅡ)、基质金属蛋白酶(MMP)-13、蛋白聚糖(Aggrecan)及p53蛋白的表达水平。结果与Control组比较,MS组细胞活力下降,Fe^(2+)、ROS、丙二醛(MDA)水平升高,还原型谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)水平降低(均P<0.05),电镜示线粒体嵴减少,SLC7A11、GPX4、CollagenⅡ、Aggrecan蛋白水平下降,p53和MMP-13蛋白水平则升高(均P<0.05)。与MS组比较,MS+sh组的Fe^(2+)、ROS、MDA水平下降,GSH、SOD水平升高(均P<0.05),SLC7A11、GPX4、Collagen Ⅱ、Aggrecan蛋白水平升高,MMP-13和p53蛋白水平下降(均P<0.05)。与MS组比较,MS+OV组的细胞活力下降,Fe^(2+)、ROS、MDA水平升高,GSH、SOD水平降低,SLC7A11、GPX4、CollagenⅡ、Aggrecan蛋白水平下降,MMP-13和p53蛋白水平上升(均P<0.05)。结论过度机械应力能够通过Piezo1通道蛋白介导成软骨细胞铁死亡,促进细胞外基质降解。
- 吴斌刘兆祥张月红王昌耀
- 关键词:骨关节炎软骨细胞
- 一种间充质干细胞诱导成软骨细胞制备方法和应用
- 本发明公开了一种间充质干细胞诱导成软骨细胞制备方法和应用,包括以下步骤:步骤一,设备消毒杀菌;步骤二,细胞清理离心;步骤三,培养基制备;步骤四,细胞扩增;步骤五,接种培养;步骤六,切片鉴定;本发明通过在诱导培养基中加入丙...
- 易科青罗志勇方超
- 大鼠纤维环源干细胞分离培养及中药诱导成软骨细胞分化的实验研究
- 目的:通过贴壁法与纤维连接蛋白差别粘附法相联合分离培养鉴定大鼠纤维环源干细胞,观察纯化效果及分化潜能,探讨纤维环源干细胞的生物学特性;应用中药对纤维环源干细胞成软骨诱导分化进行干预,筛选能有效促进纤维环源干细胞向成软骨细...
- 马东
- 关键词:椎间盘退行性疾病中药纤维连接蛋白
- 成软骨细胞培养基及成软骨细胞的培养方法
- 本发明公开了一种成软骨细胞培养基及成软骨细胞的培养方法;其中,培养基包括1%~10%胎牛血清的DMEM培养基、终浓度为0.5~1.5g/ml的鹿角胶、终浓度为0.1~0.2g/m的氨基葡萄糖、终浓度为0.8~1.2ng/...
- 李勇谢海涛薛卫巍刘家飞
- 文献传递
- lncRNA调控小鼠成软骨细胞炎症损伤机制的研究进展被引量:1
- 2020年
- 骨性关节炎(OA)是一种慢性退行性疾病,主要表现为慢性疼痛和活动障碍,并伴有关节软骨的进行性退化。软骨细胞退变是OA发生发展的主要原因,但具体机制尚不明确。小鼠成软骨(ATDC5)细胞具有软骨细胞的表型且易增殖,因此该细胞系广泛用于OA的研究。近期研究表明长链非编码RNA(lncRNA)正在成为基因调控的新参与者,lncRNA可以调控软骨细胞增殖、分化和凋亡,影响软骨细胞外基质(EMC)分泌,参与软骨炎症反应,在软骨退行性变的发生发展中发挥重要作用。本文就阐明lncRNA调控ATDC5细胞炎症损伤作一综述,以深度剖析lncRNA与OA中软骨细胞退变的作用关系。
- 林涛王国栋郑海艺田珂张元民
- 关键词:长链非编码RNA软骨细胞骨性关节炎
- 两种不同的体外诱导人脐带间充质干细胞成软骨细胞方法的比较被引量:3
- 2019年
- 该课题探讨了3D悬滴培养与贴壁培养体外诱导人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUC-MSCs)在成软骨分化特性上的差异。采用机械匀浆法和组织块贴壁培养法体外分离培养获得第5代h UC-MSCs,流式细胞术检测干细胞表面免疫标记物,经3D悬滴培养与贴壁培养诱导应用番红O和阿利辛蓝染色及荧光定量检测富含透明质酸糖胺聚糖的细胞外基质形成情况以及不同时间点(3天、7天、14天)成软骨相关基因ACAN、MIA、COL1A2、COL2A1和COL10A1表达,并用免疫组化染色的方法检测II型胶原的表达情况。结果显示,流式细胞术检测的第5代h UC-MSCs间充质干细胞表面标记物结果符合国际细胞疗法协会制定的鉴定标准;3D悬滴培养的h UC-MSCs可形成致密的细胞聚合物,贴壁培养的细胞形态成长梭形;番红O和阿利辛蓝染色结果显示,3D悬滴培养和贴壁培养的h UC-MSCs均能形成软骨细胞;但荧光实时定量PCR结果显示,3D悬滴培养的h UC-MSCs形成软骨细胞的成软骨相关基因的表达明显多于贴壁培养细胞形成软骨细胞的成软骨相关基因;II型胶原免疫组化染色的阳性细胞染色及统计结果显示,3D悬滴培养比贴壁培养的诱导的h UC-MSCs成软骨能力更强。3D悬滴培养法是一种理想的h UC-MSCs诱导成软骨培养方法。
- 张权陈恋常铖张亚奇肖翠红饶巍韩兵武栋成
- 关键词:人脐带间充质干细胞
- 马BMSCs成软骨细胞诱导分化过程中关键lncRNA与mRNA的筛选与互作
- 骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)是一类存在于骨髓基质内的多能干细胞。BMSCs因易分离且含量丰富,已成为组织工程和再生医学领域比较理想的种子细胞。马在运...
- 魏奥
- 关键词:BMSCS软骨细胞分化MRNA
- 桑橙素调控miR-203a-3p/Smad1促进BMSCs成软骨细胞分化
- 目的:骨关节炎(Osteoarthritis,OA)是临床上的常见慢性病与多发病,多见于老年人,主要表现为关节囊增厚、骨组织异常增生、软骨的磨损破坏,常导致关节疼痛、关节破坏、功能丧失。由于OA的病因病机目前尚未完全明确...
- 吴玉琼
- 关键词:骨髓间充质干细胞SMAD1
- 文献传递
- 慢病毒介导TGF-β3转染兔脂肪间充质干细胞对其向成软骨细胞分化的影响被引量:3
- 2019年
- 目的探讨转化生长因子-β3((TGF-β)3)基因对脂肪间充质干细胞体向成软骨分化能力的影响。方法用含TGF-β3目的基因的慢病毒载体转染脂肪间充质干细胞,通过流式细胞术及共聚焦检测转染效率、细胞活性检测法(CCK-8)、荧光定量-PCR(RT-PCR)等实验方法进行成软骨分化相关内容的检测。结果转染96 h时感染复数MOI=50及MOI=100二者检测EGFP绿色荧光蛋白的表达无明显差异,TGF-β3慢病毒转染的脂肪间充质干细胞的长梭形细胞形态优于慢病毒空载体转染后脂肪间充质干细胞的形态。与空白组比较慢病毒转染后的细胞数量无明显减少。转染含有TGF-β3慢病毒的脂肪间充质干细胞从基因水平可合成更多的成软骨分化相关的聚蛋白多糖(Aggrecan)、Ⅱ型胶原(COL2A1)、性别决定区Y框蛋白(SOX-9)明显高于空白组(P<0.05),形成更多的细胞外基质。结论 TGF-β3目的基因由慢病毒载体导入细胞内,是诱导ADSCs成软骨分化的理想的途径,可作为软骨组织工程的种子细胞来源。
- 许颖捷邵博曾雪敏尹小朋尹小朋宋志强王冰
- 关键词:转化生长因子-Β3脂肪间充质干细胞细胞分化
相关作者
- 冯均伟

- 作品数:19被引量:50H指数:5
- 供职机构:四川省人民医院
- 研究主题:骨髓间充质干细胞 成软骨细胞 体外诱导 骨科 藻酸钙
- 张志光

- 作品数:448被引量:833H指数:14
- 供职机构:中山大学
- 研究主题:颞下颌关节 颞下颌关节紊乱病 髁突 髁状突 关节内压
- 焦国华

- 作品数:8被引量:11H指数:2
- 供职机构:中山大学
- 研究主题:脂肪干细胞 颞下颌关节 成软骨细胞 ADSCS 小型猪
- 索明环

- 作品数:36被引量:179H指数:8
- 供职机构:中山大学附属中山医院检验医学中心
- 研究主题:糖化血红蛋白 免疫法检测 糖化血红蛋白A1C 血红蛋白A 糖基化
- 匡世军

- 作品数:71被引量:128H指数:6
- 供职机构:中山大学
- 研究主题:髁突 颞下颌关节 碱性成纤维细胞生长因子 骨髓间充质干细胞 不可复性关节盘前移位