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- 山羊支原体山羊肺炎亚种的TaqMan探针实时荧光定量PCR试剂盒及方法
- 本发明涉及致病菌检测技术领域，具体涉及山羊支原体山羊肺炎亚种的TaqMan探针实时荧光定量PCR试剂盒及方法。首次通过对已公开的26株山羊支原体山羊肺炎亚种及235株其他支原体的基因组进行比较基因组学分析，成功鉴定出Mc...
- 苗永强张素辉闫晓阳徐登峰沈克飞余远迪付利芝
- 山羊支原体山羊肺炎亚种胞外多糖的制备及ELISA抗体检测方法的建立
- 山羊传染性胸膜肺炎(Contagious Caprine Pleuropneumonia,CCPP)是一种由山羊支原体山羊肺炎亚种(Mycoplasma capricolum subsp.capripneumoniae,...
- 葛家振
- 关键词：山羊支原体山羊肺炎亚种胞外多糖间接ELISA竞争ELISA
- 基于可见光测定的山羊支原体山羊肺炎亚种抗原定量被引量：1
- 2023年
- 山羊支原体山羊肺炎亚种(Mycoplasma capricolum subsp.capripneumoniae,Mccp)是山羊传染性胸膜肺炎(contagious caprine pleuropneumonia,CCPP)的病原,可用灭活疫苗和荚膜多糖(capsular polysaccharide,CPS)间接血凝试剂进行预防和血清学检测,但高昂的培养成本和复杂的抗原定量一直困扰着生产人员。为解决生产实际中出现的这些问题,本研究基于Mccp代谢组学的前期理论基础,通过改变初始pH值的方法,初步筛选出初始p H值为7.8的可以同时提高2种抗原产量的糖发酵培养基。利用紫外可吸收光谱可识别酚红,以及十六烷基三甲基溴化铵(cetyltrimethylammonium bromide,CTAB)可与阴离子荚膜多糖结合的理论依据,建立了利用紫外光谱分析Mccp达到的培养阶段,以及利用CTAB沉淀法相对定量发酵液荚膜多糖抗原产量的方法。通过紫外图谱观察的方法可对应Mccp生长曲线进行指导生产,大大节省传统颜色变化单位(color change unit,CCU)法的监测时间,提高了原肉眼观察方法的精确度。建立的CTAB沉淀法可在5 h内完成对CPS含量的监测,与传统的差值法相比大大缩短了时间,并且其准确度得到苯酚-硫酸法的验证。本研究优化的一种培养基和建立的两种相关性比较方法,可有效降低Mccp生产成本,提高生产效率,这些方法已在本实验室的研究阶段得到应用,为进一步改进CCPP灭活疫苗和荚膜多糖的生产工艺以及快速定量提供了实验数据。
- 葛家振高鹏程田彤彤吴晓妮李倩倩田可昕宋国栋郑福英储岳峰
- 关键词：山羊支原体山羊肺炎亚种荚膜多糖
- 山羊支原体山羊肺炎亚种特异性蛋白及间接ELISA试剂盒
- 本发明公开了一种山羊支原体山羊肺炎亚种特异性蛋白87.1及间接ELISA试剂盒，所述蛋白87.1具有如SEQ ID NO.1所示的核酸序列，所述山羊支原体山羊肺炎亚种特异性蛋白87.1制备的间接ELISA抗体检测试剂盒包...
- 储岳峰吴娅琴颜新敏郝华芳陈胜利马丽娜刘永生
- 山羊支原体山羊肺炎亚种重组酶聚合酶扩增技术的建立被引量：3
- 2023年
- 为检测山羊传染性胸膜肺炎,选择Mccp-arcA假基因作为靶基因,用Primer 3 plus设计筛选生物素标记的特异引物和荧光素标记的探针,将双标记扩增产物结合到核酸检测试纸条,通过优化反应温度和时间,建立了一种检测山羊支原体山羊肺炎亚种的重组酶聚合酶扩增技术,对其灵敏度、重复性、准确性和特异性进行了试验,并初步用于临床样品的检测。结果显示,山羊传染性胸膜肺炎核酸阳性样品能够在核酸检测试纸条上显示阳性条带,阴性样品无条带。试验具有良好的重复性和敏感性(达到10 copies/μL)。用建立的重组酶聚合酶扩增技术与普通PCR方法同时检测疑似山羊传染性胸膜肺炎8份样品,结果均为3份阳性和5份阴性,符合率100%。该检测方法适用于山羊传染性胸膜肺炎的快速诊断,为Mccp的快速检测提供了新的技术。
- 豆玲周峰张莉王志宇康文彪
- 关键词：山羊支原体山羊肺炎亚种山羊传染性胸膜肺炎
- 基于0507蛋白的山羊支原体山羊肺炎亚种抗体间接ELISA检测方法的建立被引量：1
- 2023年
- 为建立山羊支原体山羊肺炎亚种(Mycoplasma capricolum subsp.capripneumoniae,Mccp)抗体检测方法,对Mccp的0507基因进行克隆与载体构建,通过原核表达技术制备重组0507蛋白,建立Mccp抗体间接ELISA检测方法,验证该方法的特异性、灵敏性与重复性,并对临床收集的血清样品进行检测。结果显示,重组0507蛋白大小为39 ku,Western blot证明重组0507蛋白具有良好的反应原性;建立的ELISA检测方法抗原包被量为3μg/mL,血清稀释倍数为1∶200,酶标二抗稀释倍数为1∶2500,阴阳临界值为0.221。用该方法对山羊流产衣原体、立克次氏体与牛支原体的阳性血清进行检测,结果均为阴性;Mccp阳性血清最大稀释倍数为1024倍;批内、批间变异系数均小于10%。对陕西省部分羊场收集到的282份血清进行检测,Mccp阳性率为13.1%。该研究建立了一种检测Mccp抗体间接ELISA检测方法,为Mccp的实验室诊断和流行病学调查提供了技术支持。
- 李梦磊张锐铮于皓同张琪许信刚
- 关键词：山羊支原体山羊肺炎亚种酶联免疫吸附试验抗体检测
- 基于0507蛋白的山羊支原体山羊肺炎亚种抗体间接ELISA检测方法的建立及应用
- 山羊支原体山羊肺炎亚种(Mycoplasma capricolum subsp.Capripneumoniae,Mccp)是山羊传染性胸膜肺炎(Contagious caprine pleuropneumonia,CCP...
- 李梦磊
- 关键词：山羊支原体山羊肺炎亚种山羊传染性胸膜肺炎原核表达ELISA
- 山羊支原体山羊肺炎亚种MCCG-0521乳酸脱氢酶基因的克隆表达及其编码氨基酸的生物学分析被引量：1
- 2023年
- 旨在获得山羊支原体山羊肺炎亚种MCCG-0521乳酸脱氢酶(L-lactate dehydrogenase,LDH)的蛋白表达产物,分析其编码氨基酸的生物学特性,为进一步研究LDH蛋白的功能奠定基础。试验完成了LDH基因的克隆和密码子改造,成功将LDH基因中473、761、779 nt处的A突变为G,使改造后的LDH基因能在大肠埃希氏菌Rosetta中正确表达。SDS-PAGE电泳结果显示,IPTG诱导目的蛋白表达后获得一条大小约34 ku的蛋白条带,Western blot结果表明获得的原核表达产物可与抗6×His tag的单克隆抗体发生特异性反应,研究采用DNAStar Protean模块分析了LDH的二级结构、蛋白骨架柔性区域和可能的B细胞抗原优势表位,为进一步研究其功能奠定了基础。
- 刘威蒋鹏程杨克礼袁芳艳周丹娜刘泽文高婷郭锐孙裴田永祥
- 关键词：山羊支原体山羊肺炎亚种乳酸脱氢酶
- 一种比较山羊支原体山羊肺炎亚种菌株毒力的方法
- 本发明公开一种简单比较山羊支原体山羊肺炎亚种菌株毒力的方法。发明的方法就将等浓度的经复苏的山羊支原体山羊肺炎亚种接种于鸡胚上，再将接种后的鸡胚置于恒温箱内培养，定时检测鸡胚状态及死亡情况，统计各个菌株的鸡胚致死率，以此进...
- 陈胜利储岳峰郝华芳颜新敏刘永生毛婷
- 用于检测山羊支原体山羊肺炎亚种的特异性PCR引物
- 本发明公开了一种用于检测山羊支原体山羊肺炎亚种的特异性PCR引物，本发明首先通过对山羊支原体山羊肺炎亚种基因测序和对比，筛选到用于检测山羊支原体山羊肺炎亚种的靶序列，其基因序列如SEQ ID NO.1所示，然后设计了检测...
- 颜新敏吴娅琴储岳峰郝华芳陈胜利马丽娜刘永生
