搜索到25339篇“ 实时荧光定量RT-PCR“的相关文章
- 盖塔病毒TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立
- 2025年
- 盖塔病毒(GETV)是一种在我国广泛分布的虫媒病毒,可通过蚊虫传播感染人畜,导致猪、马等动物出现发热、出疹及淋巴结肿大等症状,可致妊娠母猪流产或死胎。目前尚无特效治疗方式。本研究根据GenBank公布的盖塔病毒nsP1基因序列,设计3组引物探针,筛选出最佳的引物探针,建立一种灵敏度高、特异性强的针对盖塔病毒的TaqMan探针实时荧光定量RTPCR检测方法。对该方法进行敏感性、特异性、重复性试验和临床样品检测。标准曲线Ct值与相应质粒标准品浓度存在良好的线性关系,相关系数(R^(2))为0.9989;对含GETV基因的重组质粒pCDNA3.1-nsP1体外转录RNA进行敏感性试验,最低检出限达10 copies,是普通RT-PCR方法的1000倍,敏感性高;与PRRSV、CSFV与PEDV的核酸不发生交叉反应,特异性好;变异系数小于2%,重复性好。本研究建立了一种敏感、特异的GETV检测方法,对GETV的快速诊断具有重要意义。
- 顾志刚郭洁真王子涵孙彤陈鸿军孙竹筠陈丹清
- 关键词：盖塔病毒TAQMAN探针实时荧光定量RT-PCR
- 探讨实时荧光定量RT-PCR在麻疹和风疹病毒检测中的应用
- 2025年
- 分析观察实时荧光定量RT-PCR在麻疹和风疹病毒检测中的应用效果。方法 研究选取我院2023年1-12月收治的怀疑麻疹和风疹的患者各100例,根据采用检验方式不同分为ELISA组与RT-PCR组各100例。比较患者采用不同检验方式的诊断效果等指标。结果 RT-PCR组诊断有效性较高,P<0.05,差异显著。结论 实时荧光定量RT-PCR在麻疹和风疹病毒检测中的应用效果理想,可以提高麻疹和风疹病毒检测率并对疾病的诊断进行指导。
- 高玉青
- 关键词：荧光定量RT-PCR酶联免疫吸附试验
- 鹅星状病毒通用型TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用
- 2025年
- 为建立用于鹅星状病毒1(GAstV 1)和鹅星状病毒2(GAstV 2)感染快速检测的实时荧光定量RT-PCR方法,试验根据部分GAstV ORF2基因和部分3′非编码区序列设计合成特异性引物和探针,采用矩阵法获得引物和探针的最优浓度,在优化退火温度的基础上,分别建立扩增GAstV 1和GAstV 2的标准曲线,进一步验证该方法的特异性、敏感性和重复性,建立的方法用于临床样品的检测,并与文献报道的常规RT-PCR方法进行比较。结果显示:优化后的反应体系中最优上、下游引物浓度均为0.40(或0.50)μmol/L,探针浓度均为0.50μmol/L,扩增线性范围分别为3.26×10^(3)~3.26×10^(8)拷贝/μL和7.09×10^(3)~7.09×10^(8)拷贝/μL,相关系数均为0.998;该方法可特异性检出两种GAstV,但对新城疫病毒、H9亚型禽流感病毒、鸭坦布苏病毒、新型鸭呼肠孤病毒、鹅细小病毒和血清4型禽腺病毒6种鹅病相关病毒的核酸均无扩增信号;其检测限分别为3.26×10^(2)拷贝/μL和7.09×10^(1)拷贝/μL;组内变异系数和组间变异系数均低于3%。建立的实时荧光定量RT-PCR方法对临床样品的检测结果显示,GAstV阳性率为90.57%(96/106);而文献报道的常规RT-PCR方法对GAstV 1和GAstV 2的混合阳性率为62.26%。研究表明,建立的TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法为同时检测GAstV 1和GAstV 2提供了快速、敏感、特异且能满足临床样本需求的检测方法。
- 陈立功穆英丽张诚潘保革潘保革魏忠华魏忠华王学静
- 关键词：荧光定量RT-PCRTAQMAN探针
- 发热伴血小板减少综合征病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用
- 2025年
- 目的建立一种基于Taqman探针的高灵敏度一步法实时荧光定量RT-PCR方法,用于检测发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)。方法靶向发热伴血小板减少综合征病毒基因组S片段保守区域设计引物和Taqman探针建立实时荧光定量RT-PCR方法。评价方法的灵敏度、特异性和重复性,并应用临床样本进行应用评价。结果该方法最低检测限为100拷贝/ml,其灵敏度为普通RT-PCR的1000倍。在线性范围内,循环阈值(Ct值)与病毒RNA标准品之间表现出较强的线性相关性(R 2>0.999)。批内和批间重复性的变异系数均小于1.0%。该方法还具有高度特异性,不与其他病毒核酸交叉反应。应用发热伴血小板减少综合征确诊患者和健康志愿者血清样本对该方法进行了评估,结果显示,该方法检测灵敏度和特异度均为100.0%。此外,用该方法对288例疑似SFTSV感染患者的样本进行检测,有14.9%的患者感染了SFTSV。该方法速度较快,包括核酸提取步骤在内仅需2 h。结论本研究建立的实时荧光定量RT-PCR检测方法可作为SFTSV感染早期诊断的可靠方法。
- 李鹏飞李全李梦兰吴玲李志锋
- 关键词：实时荧光定量RT-PCR特异性检测限
- 一种检测禽流感病毒H3、H4、H6和H9亚型的实时荧光定量RT-PCR引物探针组及试剂盒
- 本发明提供了一种检测禽流感病毒H3、H4、H6和H9亚型的实时荧光定量RT‑PCR引物探针组及试剂盒，属于动物病毒检测技术领域。本发明所述的引物探针组包括检测H3亚型禽流感病毒的引物探针、检测H4亚型禽流感病毒的引物探针...
- 尹彦文熊陈勇施开创李军郑敏韦显凯冯淑萍龙凤屈素洁陆文俊黄美芝
- 一种羊肠道病毒TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测引物、探针及检测试剂盒
- 本发明提供了一种羊肠道病毒TaqMan实时荧光定量RT‑PCR检测引物和探针，所述引物和探针的核苷酸序列为：上游引物CEV‑qF：5'‑TCCTCCGGRGCCGTGAATGC‑3'；下游引物CEV‑qR：5'‑CCGA...
- 孙普李平花马雪青张雨星魏达礼赵志荀张婧袁红李坤李冬白兴文卢曾军
- 3种苹果病毒实时荧光定量RT-PCR检测体系的建立
- 2024年
- 苹果茎沟病毒(Apple stem grooving virus,ASGV)、苹果茎痘病毒(Apple stem pitting virus,ASPV)和苹果坏死花叶病毒(Apple necrotic mosaic virus,ApNMV)对果树的生长发育危害严重,而且复合侵染几率较高,为快速、灵敏和高效的检测3种病毒,本研究根据ASPV、ASGV和ApNMV基因组保守序列设计特异引物建立了3种病毒高灵敏度的实时荧光定量PCR检测体系(Real-time fluorescence quantitative reverse transcription PCR,RT-qPCR)。结果表明:引物ASGV-qF/qR-1、ASPV-qF/R-2和ApNMV-qF/R-3有较高的特异性,最适宜的退火温度分别为60℃、58℃和58℃,ASGV、ASPV和ApNMV 3种病毒的RT-qPCR体系比常规RT-2 PCR检测体系灵敏度高100倍,最低检出限分别为82.6、1.49×10^(2)和13.3 copies/μL。检测体系的Ct值的变异系数均小于5%,组间的变异系数在5%以内。河北农业大学果园中经RT-PCR确定带毒的88棵苹果树RT-qPCR检出率为100%,表明建立的RT-qPCR方法的可靠性和稳定性高,适用于田间果树3种病毒的检测,为苹果病毒的准确诊断提供了技术支撑。
- 李紫腾潘媛马子文胡同乐王树桐曹克强王亚南
- 关键词：苹果茎沟病毒苹果茎痘病毒
- 实时荧光定量RT-PCR在麻疹和风疹病毒检测中的应用
- 2024年
- 目的探讨实时荧光定量RT-PCR在麻疹和风疹病毒检测中的应用效果。方法选取2021年12月—2022年12月盘锦市疾病预防控制中心接收的麻疹与风疹患者76例为研究对象,入院后所有研究对象均接受酶联免疫吸附试验法和实时荧光定量RT-PCR法检测,以检测患者恢复期血免疫球蛋白G(IgG)抗体水平(相对急性期是否4倍升高)为麻疹诊断金标准,对比两种检测方法的检测准确率、不同检测时间的阳性检出率。结果实时荧光定量RT-PCR法总诊断准确率为97.37%;酶联免疫吸附试验法中总诊断准确率为88.16%,比较两种方法的诊断准确率差异有统计学意义(P<0.05)。第1d,实时荧光定量RT-PCR法阳性检出率高于酶联免疫吸附试验法,差异有统计学意义(P<0.05)。第5d,实时荧光定量RT-PCR法阳性检出率低于酶联免疫吸附试验法,差异有统计学意义(P<0.05)。第2d、第3d、第4d实时荧光定量RT-PCR法和酶联免疫吸附试验法阳性检出率对比差异无统计学意义(P>0.05)。结论实时荧光定量RT-PCR对麻疹、风疹检测有一定诊断作用,可以有效提高检测准确率,同时操作简单,灵敏性较高,值得在麻疹与风疹病毒检测中推广。
- 张博奇
- 关键词：麻疹实时荧光定量RT-PCR风疹
- 猪轮状病毒TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用被引量：3
- 2024年
- 根据猪轮状病毒VP6基因序列保守区设计特异性探针和引物,建立一种特异、灵敏、通用、高效检测Po RV的实时荧光定量RT-PCR检测方法。扩增目的片段为173 bp,以构建的重组质粒p MD19-T-VP6为模板进行反应程序的优化。结果显示,该方法的标准曲线为y=-3.1139x+39.298,R^(2)=0.9937,E=109.5%;用该方法检测猪常发传染病病原时结果均为阴性;对标准品质粒的最低检测限为1.32 copies/μL;批内、批间变异系数分别小于0.600%、1.300%,该方法特异性强、灵敏度高、重复性好。利用该方法检测114份临床腹泻病料,阳性检出率(39/114)优于常规RT-PCR(22/114),39份阳性样品经测序鉴定均为Po RV,扩增VP7基因后成功构建22份阳性质粒,测序结果显示共检出6种G型Po RV,检出率依次为9.09%(G3)、22.72%(G4)、18.18%(G5)、31.82%(G9)、4.54%(G11)、9.09%(G26)。上述结果表明,本试验建立了一种快捷、准确检出Po RV的Taq Man探针通用型实时荧光定量RT-PCR方法,对该病的诊断、病原监测、流行病学调查具有重要意义。
- 柳佳佳梁海英曾智勇汤德元王彬叶泥边孟婷黄书田红利潘向英
- 关键词：猪轮状病毒TAQMAN探针荧光定量RT-PCR
- 帕利亚姆病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用被引量：1
- 2024年
- 本研究拟建立帕利亚姆病毒(Palyam virus,PALV)血清型特异性实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)方法用于临床样本或媒介中PALV血清型鉴定。根据我国流行PALV毒株的基因节段2序列,设计扩增引物和TaqMan探针,建立PALV血清型特异型qRT-PCR方法,对方法的特异性、灵敏性与重复性进行评估;以我国分离的28株PALV和90份核酸阳性血液样本评估检测方法的可靠性;利用建立的方法对采集库蠓样本中携带的PALV进行血清型鉴定。结果显示,建立的PALV血清型qRT-PCR检测方法具有良好的特异性与灵敏性,可检出核酸拷贝数下限在22至28 copies·μL^(-1)。对28株PALV的qRT-PCR检测结果与病毒测序鉴定结果一致;对PALV不同感染阶段哨兵动物血液(90份)中的qRT-PCR鉴定结果与分离病毒的血清型鉴定结果一致;建立的方法可准确鉴定库蠓中携带PALV的血清型。本研究建立的PALV血清型qRT-PCR定型方法具有良好的特异强、敏感性与重复性,可用于PALV感染动物与媒介中PALV血清型的鉴定,具有良好的应用价值。
- 杨恒杨恒宋子昂高林高林廖德芳廖德芳肖雷
- 关键词：血清型鉴定实时荧光定量RT-PCR
