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实时 荧光 定量PCR 法 检测左旋多巴中大肠埃希菌宿主细胞DNA残留量2025年 实时 荧光 定量PCR 技术,建立特异性强、灵敏度高的左旋多巴中大肠埃希菌(Escherichiacoli)宿主细胞DNA残留量的检测方法 ,并进行验证和初步应用。以大肠埃希菌中的相对保守的E.coli MB6菌株16S核糖体RNA基因序列作为目的基因设计多对引物,通过PCR 进行特异性扩增获得目的片段。将目的片段重组至pLENTI-BSD-CON载体构建重组质粒命名为pLENTI-BSD-CON-E.coli-16S,以其为标准品,结合磁珠法 提取纯化DNA,建立定量PCR 检测方法 (SYBR-Green法 )。对建立的方法 进行线性与范围、准确度、精密度、专属性、定量 限及耐用性的方法 学验证,应用于左旋多巴原料药的检测,并与试剂盒检测方法 (Taqman探针法 )进行比较。建立的定量PCR 检测方法 (SYBR-Green法 )正向引物序列:5'-TTCGATGCAACGCGAAGAAC-3';反向引物序列:5'-GTGTAGCCCTGGTCGTAAGG-3'。以重组质粒作为标准品,DNA质量浓度在10fg/μL~3 ng/μL范围内线性关系良好(R^(2)≥0.98),定量 限为10 fg/μL,加标溶液回收率在59.7%~80.7%范围内,RSD均小于30%。应用该法 对3批左旋多巴原料药进行检测,DNA残留量均在限度以下。结果表明,建立的检测方法 可用于定量 检测左旋多巴等由大肠埃希菌作为宿主细胞生产的生物制品的DNA残留量,并且其灵敏度优于试剂盒检测方法 。关键词：大肠埃希菌 左旋多巴 实时荧光定量PCR 实时 荧光 定量PCR 法 在食源性致病菌检测中的应用效果2024年 实时 荧光 定量PCR 法 在食源性致病菌检测中的临床应用效果。方法 选取2021年1月至2023年11月医院送检的300例食源性腹泻患者的粪便样本,以传统分离培养法 为金标准,均采用实时 荧光 定量PCR 技术检测所有样本的致病菌情况,比较阳性率,评价实时 荧光 定量PCR 法 的灵敏度和特异度。结果实时 荧光 定量PCR 法 对食源性腹泻患者粪便样本中沙门菌、志贺菌、金黄色葡萄球菌的检出率高于分离培养法 (P<0.05),实时 荧光 定量PCR 法 检测沙门菌、志贺菌、金黄色葡萄球菌具有特异性,可达到10-8cfu/ml的检测水平。结论实时 荧光 定量PCR 法 的检出率、灵敏度高,可达到10-8cfu/ml的检测水平,具有特异性,在食源性疾病致病菌的检测中具有应用价值。关键词：实时荧光定量PCR 沙门菌 志贺菌 金黄色葡萄球菌 采用实时 荧光 定量PCR 法 检测大曲中的3种高温放线菌 2024年 实时 荧光 定量PCR (real-time fluorescence quantitative PCR ,RT-qPCR )方法 对大曲中3种高温放线菌(Thermoactinomyces vulgaris、T.intermedius和T.daqus)进行特异性定量 检测。根据T.vulgaris、T.intermedius、T.daqus全基因组中特异性单拷贝核心基因recA、mdH、gyrA为参考序列分别设计了一对可扩增278、233、291 bp片段的引物;经特异性、有效性、准确性实验显示,在常见的13种白酒酿造微生物中,引物TV、TI、TD分别可特异性检测T.vulgaris、T.intermedius、T.daqus,检测范围为2.82~8.82 lg copies/μL,加标回收率95%~105%。进一步对大曲发酵过程样品检测,结果显示,T.vulgaris含量在呈现波动趋势,在第5天达到最高,为(6.06±0.02)lg copies/g;T.intermedius含量呈现先上升后下降的趋势,在第7天达到最高,为(6.33±0.13)lg copies/g;T.daqus含量在0~12 d呈现波动趋势,在12~14 d下降,随后一直上升,发酵结束时含量最高,为(7.62±0.02)lg copies/g。该研究建立的RT-qPCR 方法 可对大曲发酵过程中3种高温放线菌进行特异性鉴定和快速定量 ,为进一步监测高温放线菌在白酒酿造过程中的功能提供了方法 。关键词：大曲 高温放线菌 特异性引物 实时荧光定量PCR 基于核酸适配体竞争实时 荧光 定量PCR 法 灵敏检测抗生素的研究 法 研究,为人们对此类污染物进行深度...关键词：核酸适配体 实时荧光定量PCR 抗生素 胶体金法 与实时 荧光 定量PCR 法 检测甲乙型流感病毒的应用价值 2024年 法 与实时 荧光 定量 聚合酶链反应(PCR )法 检测甲乙型流感病毒的应用价值。方法 选取2023年1月至2023年12月我中心进行检测的80例流感患者,均行胶体金法 和PCR 法 检测,比较两种方法 检查所用时间和检查结果。以综合检查结果为金标准,分析两种方法 与金标准结果的一致性。结果 胶体金法 检查所用时间(15.46±3.82)min短于PCR 法 (180.28±32.09)min,差异有统计学意义(P<0.05)。80例流感患者经综合检查发现甲型44例、乙型36例;胶体金法 检出甲型42例、乙型31例,检出率为91.25%;PCR 法 检出甲型43例、乙型34例,检出率为96.25%。两种方法 诊断效能对比,差异无统计学意义(P>0.05)。胶体金法 、PCR 法 检查结果与金标准结果一致性均极好(Kappa=0.891、0.938,P<0.05)。结论 胶体金法 、PCR 法 鉴别诊断甲、乙型流感病毒的准确度、灵敏度及特异度均较高,与临床综合检查结果一致性均较好,胶体金法 检查所用时间更短,临床应用时可灵活选择检测方法 ,为临床鉴别诊断提供便利。关键词：胶体金法 实时荧光定量PCR法 胶体硒法 HIV快速检测与实时 荧光 定量PCR 法 检验的一致性研究 2024年 法 人类免疫缺陷病毒(HIV)快速检测与实时 荧光 定量PCR 法 检验的一致性。方法 :选取2020年1月—2021年1月到艾滋病自愿咨询检测(VCT)门诊就诊的987例患者为研究对象,均接受胶体硒法 、实时 荧光 定量PCR 法 检验,以免疫印迹法 为金标准,比较不同检测方式的诊断效能、不同检测方式之间检验的一致性,对比不同方式对“窗口期”弱阳性抗体检测情况及不同检测方式的一致性。结果:987例疑似HIV高感染风险患者中,经免疫印迹法 检测发现,373例阳性,614例为阴性;胶体硒法 与实时 荧光 定量PCR 法 比较无统计学差异(P>0.05)。胶体硒法 诊断结果与免疫印迹法 诊断结果之间具有一致性(Kappa值=0.539),等级为中度;实时 荧光 定量PCR 法 与免疫印迹法 诊断结果之间具有一致性(Kappa值=0.872),等级为高度;经免疫印迹法 检测45份“窗口期”弱阳性抗体实时 荧光 定量PCR 法 检测43例阳性,胶体硒法 检测42例阳性,实时 荧光 定量PCR 法 的灵敏度、准确度均显著高于胶体硒法 (P<0.05)。胶体硒法 与实时 荧光 定量PCR 法 胶在“窗口期”弱阳性抗体诊断结果中的一致性较差(Kappa值=0.357)。结论:胶体硒法 与实时 荧光 定量PCR 法 对HIV检测的效果具有一致性,实时 荧光 定量PCR 法 准确性略高;胶体硒法 与实时 荧光 定量PCR 法 在“窗口期”弱阳性抗体诊断结果中的一致性较差,实时 荧光 定量PCR 法 在“窗口期”弱阳性抗体血清检测中具有较高的检测价值。关键词：胶体硒法 艾滋病 HIV病毒 窗口期 实时荧光定量PCR法 细菌培养法 、免疫层析法 及实时 荧光 定量PCR 法 在孕晚期B族链球菌筛查中的应用对比研究 2024年 法 、免疫层析法 及实时 荧光 定量PCR 法 在孕晚期B族链球菌(Group B Streptococcus,GBS)筛查中的应用价值。方法 :选取2021年3月至2023年5月在我院接受产检的孕晚期孕妇154例。以病理活检为金标准,分析GBS筛查结果;对比细菌培养法 、免疫层析法 及实时 荧光 定量PCR 法 单独及联合诊断孕晚期GBS的效能;分析细菌培养法 、免疫层析法 及实时 荧光 定量PCR 法 单独及联合筛查与病理筛查结果的一致性。结果:154例孕晚期孕妇中,经病理活检检出39例孕妇GBS为阳性;三者联合诊断GBS的灵敏度、特异度、准确率、阳性预测值以及阴性预测值均高于细菌培养法 、免疫层析法 与实时 荧光 定量PCR 法 单独检测(P<0.05);三者联合检测与病理结果的Kappa值为0.936,均高于细菌培养法 、免疫层析法 、实时 荧光 定量PCR 法 单独检测。结论:在筛查孕晚期孕妇GBS中,实时 荧光 定量PCR 法 联合细菌培养法 、免疫层析法 诊断效能高于单独检测,可通过三者联合检测为早期诊断孕妇是否感染GBS提供依据。关键词：细菌培养 免疫层析 孕晚期 B族链球菌 TaqMan实时 荧光 定量PCR 法 检测对虾肝肠胞虫(EHP)步骤优化 2024年 实时 荧光 定量PCR 检测流程,目的是更准确、快速地检测出虾苗,饵料,亲虾体内携带的EHP。本研究采用酚/氯仿抽提法 与水生动物病原体核酸提取试剂盒两种DNA提取方法 ,对等量的病原组织样本进行了对比提取。此外,还设置不同浓度的裂解液以探究其对病原组织裂解效果的影响,并设定不同裂解时间以优化裂解步骤。最后,通过调整qPCR 反应的循环数,确定最佳的检测条件。结果显示,水生动物病原体试剂盒提取的DNA检出率高于酚/氯仿抽提法 提取,裂解液浓度90%时检测出的EHP含量最高;裂解时间30 min时检测出的EHP含量较高;循环数在40次时足以检测出EHP。综上,优化后的检测流程为用水生动物病原体核酸提取试剂盒提取病原组织DNA,裂解液浓度90%,裂解时间30 min及qPCR 检测条件的循环数控制在40次。关键词：DNA提取 一种基于实时 荧光 定量PCR 法 对毛霉菌检测的试剂盒及其使用方法 实时 荧光 定量PCR 法 对毛霉菌检测的试剂盒及其使用方法 ”，选择在毛霉属中的18S rRNA序列区域寻求保守度较高的基因片段进行引物探针的设计，从而保障检测系统的敏感性以达到更高的特异性，并拓展其检测范...应用Gene Xpert全自动医用PCR 分析系统实时 荧光 定量PCR 法 诊断肺结核患者痰液中结核分枝杆菌DNA的临床价值 2024年 PCR 分析系统实时 荧光 定量PCR 法 的具体临床价值。方法 :选取2020年1月~2022年12月医院收治的的肺结核患者50例,通过运用实时 荧光 定量PCR 法 ,对肺结核患者痰液分泌物中的结核分枝杆菌DNA进行分析。与此同时,还需要运用抗酸染色法 以及培养法 等分析手段,完成对患者结核分枝杆菌检测的对比分析。结果:实时 荧光 定量PCR 法 在检测肺结核患者痰液分泌物中的结核分枝杆菌DNA时,能够展现出较高水平的阳性率,而且检测敏感性要明显优于其他两种检测手段。数据对比差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:Gene Xpert全自动医用PCR 分析系统实时 荧光 定量PCR 法 ,在临床疾病检验中的应用具有操作简便、准确率高、使用成本低等突出优势,对于肺结核患者痰液中结核分枝杆菌DNA的检验与疾病诊断有着极高的临床应用价值。关键词：GENE 实时荧光定量PCR法 结核分枝杆菌DNA
