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一种超快速实时定量PCR方法及其应用: 本发明提供一种超快速实时定量PCR方法。所述方法为：优选扩增子GC含量，同时提高引物探针Tm值，并加入添加剂，从而缩短PCR变性和退火/延伸的温度差，减少每轮PCR扩增所需要的时间，实现对目标序列的快速扩增，所述快速扩增...; 左红伟严俊张琳李彪李庆伟杜赞花罗承梅储丽娜欧阳学良严江燕童慧娟巫益鸣陈才夫熊磊

实时定量PCR应用于研讨式分组实验教学实践被引量：1: 2024年; 实时定量PCR作为一项生命科学及其相关领域的重要技术,已成为高校生物实验教学中不可或缺的知识内容。以分子生物学实验基础教学内容为依托,围绕实时定量PCR技术面向本科生开设了综合性实验。在充分考虑学生的理论和操作水平以及本科实验教学特点的基础上,对实验设计和实验方法进行了优化,并采取研讨式分组教学模式,提高教学效率与教学质量的同时,更突出了学生在实验教学中的主体地位,有助于培养学生的科学思维、科学素养以及综合实践能力。; 李欣张伟英陈容容赵玉红石建党; 关键词：实时定量PCR 分子生物学实验教学

一种自动核酸提取与实时定量PCR装置及配套反应盒: 本发明公开了一种自动核酸提取与实时定量PCR装置及配套反应盒，由配套反应盒、光源和荧光接收装置、升降温装置、配套反应盒支撑结构、电机组及超声变幅装置和控制器组成；配套反应盒主要包括主体、顶盖、反应室和注射器等；光源和荧光...; 周汉宇

一种基于实时定量PCR对小麦品种抗旱性进行鉴定的方法: 本发明属于鉴定检测领域，具体涉及一种基于实时定量PCR对小麦品种抗旱性进行鉴定的方法。本发明通过对小麦品种在苗期生长过程中进行干旱胁迫，同时设置对照组，提取小麦植株的总RNA，并对其中TaNF‑YA9基因表达量进行检测，...; 赵颖佳张经廷吕丽华翟立超张丽华郑孟静崔永增董志强姚艳荣

实时定量PCR在皮肤癣菌病分子诊断中的研究进展: 2024年; 皮肤癣菌是皮肤癣菌病的致病真菌。传统直接镜检和培养,存在耗时费力、敏感性低、经验要求高等缺点。实时定量PCR(quantitative real time PCR,qPCR)技术具有快速、特异性高、敏感性高、无PCR后污染等优点,目前已应用于皮肤癣菌临床标本检测。该文通过回顾国、内外文献,介绍qPCR在皮肤癣菌病分子诊断研发、临床应用的研究进展。; 刘孝艳张云平王冲; 关键词：皮肤癣菌病实时定量PCR 分子诊断

罗非鱼戴维斯黄杆菌实时定量PCR检测方法的建立及应用: 2024年; 戴维斯黄杆菌(Flavobacterium davisii)是柱形病病原之一,严重影响罗非鱼养殖产业.为了实现对其快速和准确的诊断,本研究以TonB基因为靶基因构建了重组质粒,建立了戴维斯黄杆菌的实时定量PCR检测方法,并将其应用到罗非鱼感染戴维斯黄杆菌后的载菌量测定研究.结果表明:特异性引物TonB-F/R与不同基因型的黄杆菌及罗非鱼其他常见病原无交叉反应,所建立的绝对定量检测方法是常规PCR检测方法灵敏度的100倍,其重复性和稳定性良好;罗非鱼感染戴维斯黄杆菌后其鳃组织载菌量显著高于其他组织,符合该疾病的侵染特点.综上所述,该实时定量PCR检测方法具有快速、高灵敏度和强特异性等优势,可准确评估戴维斯黄杆菌的感染程度,对柱形病的预防具有重要价值.; 叶小灵许莹萱王世锋王世锋郭伟良周永灿; 关键词：罗非鱼实时定量PCR检测

CHO细胞外源抗体基因拷贝数实时定量PCR检测方法的建立及验证被引量：1: 2024年; 目的采用SYBR GreenⅠ染料建立实时定量PCR法检测CHO细胞外源抗体轻链(light chain,LC)、重链(heavy chain,HC)基因拷贝数,并进行方法的验证及初步应用。方法以CHO细胞中稳定表达的B2m(β2-microglobulin)基因作为内参基因,分别设计适宜的LC和HC基因引物及内参基因引物,确定实时定量PCR方法的反应体系和反应程序。对建立的方法进行特异性、线性、精密性及耐用性验证,并采用建立的方法检测重组细胞株工作细胞库(WCB)及不同传代次数细胞中LC和HC基因拷贝数。结果外源基因与内参基因引物可特异性结合目标片段;B2m、LC、HC基因引物扩增效率分别为106.7%、106.3%和99.1%,线性方程相关系数均大于0.99,具有良好的线性关系;精密性验证的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)均小于1%;短时间内少次冻融对检测结果影响较小。利用建立的方法检测不同代次重组细胞株LC和HC基因拷贝数,未见明显变化。结论成功建立了CHO细胞外源基因拷贝数实时定量PCR检测方法,该方法特异性、线性、精密性及耐用性良好,为其他CHO细胞株表达的外源基因拷贝数检测提供了参考。; 张慧高文丽李凤智胡加亮李剑; 关键词：实时定量PCR CHO细胞轻链重链基因拷贝数

TaqMan多重实时定量PCR快速检测3种常见食源性病原菌被引量：2: 2024年; 建立一种可同时快速检测大肠杆菌O157:H7、单增李斯特菌和蜡样芽孢杆菌的多重实时定量PCR(qPCR)方法。依据大肠杆菌O157:H7 tir基因、单增李斯特菌mpl基因和蜡样芽孢杆菌entFM基因的保守序列分别设计特异性引物和TaqMan探针,建立多重qPCR反应体系,进行灵敏度、特异性和稳定性试验,同步检测人工染菌牛奶样品中的病原菌并与国家标准方法作对比。结果表明,建立的多重qPCR方法灵敏度高,最低检出限为12 CFU/mL;特异性强,只对3种目标菌进行PCR扩增;稳定性好,各重复性试验中Ct值的变异系数<1%;所有受污染样品阳性检出率均为100%,与国家标准方法检测结果一致,且检测周期缩短至6 h。本研究建立的TaqMan多重qPCR方法能同时快速、准确地检测乳品中的大肠杆菌O157:H7、单增李斯特菌和蜡样芽孢杆菌,为食品安全提供技术支撑。; 艾鹏飞王珊高辉明王雁伟庞艳荣张萌; 关键词：TAQMAN探针大肠杆菌O157:H7 单增李斯特菌蜡样芽孢杆菌

多重实时定量PCR技术在口罩致病菌快速检测中的应用研究: 2024年; 目的本研究旨在开发一种基于多重实时定量PCR技术的快速检测方法,用于准确识别并量化口罩中常见致病菌,以评估口罩的卫生状况并控制院内感染。方法采用TaqMan探针法实时荧光定量PCR为核心技术,设计并优化特异性引物和荧光标记探针,通过一管式多重检测来同时定量三种病原菌的特异性基因序列。实验首先从NCBI数据库中筛选特异性靶基因和序列,并设计引物和探针。随后对引物和探针进行质量检测,并通过扩增特异性序列和TA克隆方法制备标准品。最终建立起标准曲线,并对口罩样本进行了检测。结果通过优化实验条件后,成功地建立了一个高效、稳定的多重实时定量PCR检测体系,并在不同浓度梯度下评估了三种病原菌标准品的检测效率。检测数据显示,引物和探针对于目标病原菌具有高度特异性,且扩增效率和信号强度均满足实验要求。在对口罩样本进行检测中,能够准确定量出其中的铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌和溶血性链球菌的基因组DNA拷贝数,并据此评估口罩上的微生物污染程度。结论基于多重实时定量PCR技术的口罩中致病菌快速检测方法具有高敏感性、特异性和快速性,能够为临床和公共卫生监控提供有力的技术支撑。这种方法可以应用于医院环境的卫生监测以及对日常使用口罩的卫生状况进行评估,有助于防止传染病的传播,提升公共卫生安全。; 蒋彦洁张辉应珂凌明; 关键词：口罩微生物污染铜绿假单胞菌

荧光实时定量PCR法检测流感病毒核酸的质控结果分析: 2024年; 目的分析浅析荧光实时定量PCR法检测流感病毒核酸的质控结果。方法在2021年5月至2022年11月期间,120例流感病毒感染样本进行研究。对这些样本的流感病毒RNA进行了核酸抽提,并利用PCR实时荧光定量技术进行检测以评估其效果。结果运用该技术检测到乙型流感病毒44例,甲1型40例,以及甲3型36例。所有检测结果均符合分子生物学操作的质控标准,合格率达到100.0%。结论实时核酸PCR技术在临床流感病毒检测中被广泛应用。PCR实时荧光定量检测法在流感病毒核酸检测中的表现精确且迅速,适宜作为应对突发公共卫生事件的首选检测手段。; 宋广萍; 关键词：荧光实时定量 PCR法检测质控结果

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