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白细胞介素2基因转染细胞因子诱导的杀伤细胞对恶性黑素瘤细胞的杀伤作用: 2017年; 目的探讨白细胞介素2（IL-2）基因转染细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）对恶性黑素瘤的杀伤能力。方法提取小鼠脾细胞，分离淋巴细胞，培养CIK细胞，用携带IL-2的质粒PEGF-N1-IL-2转染CIK细胞，荧光显微镜观察质粒转染情况，反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）鉴定IL-2基因的表达。将效应细胞（CIK细胞或IL-2转染CIK细胞）和靶细胞（B16黑素瘤细胞）分别按照效靶比10∶1、20∶1和40∶1混合培养，采用4 h乳酸脱氢酶释放测定法，检测两种CIK细胞对B16细胞的细胞毒活性。按照效靶比40∶1混合，采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测两种CIK细胞IL-2、干扰素γ（IFN-γ）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平。建立小鼠黑素瘤模型，将28只模型小鼠平均分为4组：对照组（瘤旁注射0.2 ml生理氯化钠溶液）、IL-2组（瘤旁注射100 IU IL-2）、CIK组（瘤旁注射细胞数约1 × 106 CIK细胞悬液）、IL-2转染CIK组（瘤旁注射细胞数约1 × 106 IL-2转染CIK细胞悬液），通过肿瘤形态学和抑瘤率、细胞凋亡率来评价荷瘤小鼠肿瘤生长情况。两组正态分布计量资料的比较行t检验，多组计量资料的比较采用方差分析，两两间多重比较采用LSD-t检验。结果荧光显微镜及RT-PCR均显示IL-2转染CIK细胞成功。效靶比实验显示，40∶1时IL-2转染CIK细胞对B16细胞的毒性最强，IL-2转染CIK细胞组分泌IL-2（1107.26 ± 6.49 pg/ml）、IFN-γ（50.01 ± 3.35 pg/ml）和TNF-α（39.86 ± 3.25 pg/ml）的能力明显高于CIK细胞组（分别为51.09 ± 3.85、32.71 ± 2.43、30.11 ± 3.08 pg/ml），两组比较，t值分别为442.60、14.93和6.89，差异均有统计学意义（P 〈 0.01）。动物实验显示，与干预前相比，干预后对照组小鼠肿瘤体积明显增大（P 〈 0.05），而IL-2组、CIK组和IL-2转染CIK组小鼠肿瘤体积明显减小（P 〈 0.001），且IL-2转染CIK组肿瘤体积显著小于其他3组�; 芦兰谢丛华张浩中许绿叶师幸伟谢君车彪丁雯; 关键词：白细胞介素2 细胞因子诱导杀伤细胞转染黑色素瘤

Lowe综合征八例临床及基因分析及CLCN5突变基因转染细胞实验: 第一部分 Lowe综合征八例临床及基因分析　　目的：分析和总结我院就诊的8例符合Lowe综合征临床诊断的患儿的临床表现及基因型特征，旨在提高对该疾病的认识。　　方法：选择我院2011年11月至2016年6月份收治的临床诊...; 高文超; 关键词：293细胞

外源基因转染细胞技术的研究进展被引量：4: 2016年; 随着基因与蛋白功能研究的深入，目前已建立了许多细胞稳定转染的方法，将外源基因导入细胞内已作为一种专业技术在农业、医学和生物制药等领域展现出巨大的应用前景，在基因治疗层面上，为很多疾病的基础研究和临床治疗提供了有力的保障。; 张克佩王小平朱武洋; 关键词：外源基因电穿孔脂质体慢病毒

人PD-L1基因转染细胞株的构建及其单克隆抗体的研制: PD-L1属于共刺激分子B7家族成员，含有290个氨基酸，是I型跨膜蛋白。PD-L1广泛表达于T细胞、B细胞、树突状细胞、巨噬细胞及一些非造血细胞。PD-L1与其受体PD-1结合后传递抑制信号，在T细胞的活化、耐受和免疫...; 宋莉; 关键词：转染细胞单克隆抗体免疫病理

腺病毒介导的hVEGF基因转染细胞修复大鼠放射性皮肤溃疡的效果研究: 2015年; 目的评价转染人血管内皮生长因子165（hVEGF165）重组腺病毒载体的成纤维细胞体外表达状态及转染细胞修复放射性皮肤溃疡的效果。方法构建hVEGF165基因过表达重组腺病毒载体，转染大鼠原代成纤维细胞，通过荧光定量PCR、免疫细胞化学和Westernblot观察hVEGF165体外过表达状态；清洁级sD雄性大鼠24只，50Gy1射线局部照射，照后7d于受照局部注射转染hVEGF165细胞，通过荧光定量PCR，分析转染基因在注射部位的表达状况，外观观察和组织学观察动物体内转基因细胞对放射性皮肤溃疡愈合效果的影响。结果hVEGF转染组细胞体外实验中hVEGFmRNA表达显著上调，约为空转染组的88373倍，胞质中出现hVEGF蛋白强阳性表达，且于相对分子质量23000附近出现VEGF蛋白的特异性条带；受照后约2周局部出现溃疡，hVEGF转染组平均溃疡面积为40．2mm2，比空转染对照组减少57％，愈合时间缩短约6d，处理后3d、1周皮肤组织中hVEGFmRNA相对表达量分别为空转染组的5．15和4．15倍（t=3．385、3．220，P〈0．05）。结论转染hVEGF165重组腺病毒载体的大鼠成纤维细胞能够在体外过量表达VEGF，且该转染细胞注射体内能够缩短放射性皮肤溃疡的愈合时间，增强损伤的愈合效果。; 董丽马绍英李晶杨凯杨婷陈学英李宝兴; 关键词：放射性皮肤溃疡人血管内皮细胞生长因子转染

人PD-L1基因转染细胞株的构建及其对活化的Jurkat细胞增殖和凋亡的影响被引量：3: 2015年; 目的:构建稳定表达人PD-L1分子的基因转染细胞株,观察其对活化的Jurkat细胞增殖和凋亡的影响。方法:将编码人PD-L1分子的全长c DNA重组入反转录病毒表达载体p EGZ-Term-R,将重组载体p EGZ-Term-R/PD-L1和辅助病毒载体用脂质体法共转染293T细胞,包装具有感染能力的完整病毒;收集含有完整重组反转录病毒的293T细胞培养上清,感染L929细胞,筛选并获得G418抗性的基因转染细胞。采用流式细胞术检测表达PDL1的基因转染细胞,命名为L929/PD-L1。采用PHA活化T细胞系来源的细胞株Jurkat,并将其与丝裂霉素预处理的L929/PD-L1细胞共培养,用细胞计数法观察L929/PD-L1细胞株对活化的Jurkat细胞增殖能力的影响,并检测其凋亡情况。结果:成功获得了稳定表达人PD-L1基因的转染细胞株L929/PD-L1。PHA可诱导Jurkat细胞活化并表达PD-1分子;L929/PD-L1与PHA刺激后的Jurkat细胞共培养,可抑制Jurkat细胞增殖,促进其凋亡。结论:成功构建了稳定表达人PD-L1的细胞株,PD-L1分子抑制活化的Jurkat细胞增殖,促进其凋亡。; 宋莉葛彦曹莎莎徐永芳潘建忠谢炜居颂文居颂光; 关键词：PD-L1 基因转染细胞株 JURKAT细胞

人CD133基因转染细胞株的构建及其单克隆抗体的研制: CD133是一种局限性分布于胞浆膜突出处的5次跨膜糖蛋白,1997年由Yin等首次报道,2000年6月由国际白细胞分化抗原工作组会议(ILDAW)正式命名为CD133。近年来研究发现人CD133分子是分离和鉴定多种干细胞...; 赵娟; 关键词：肿瘤免疫基因转染单克隆抗体蛋白表达

腺相关病毒2-ND4基因转染细胞线粒体的研究被引量：6: 2014年; 背景Leber遗传性视神经病变（LHON）是导致视神经退行性变的线粒体遗传性疾病，主要与线粒体11778位点突变导致ND4蛋白合成异常有关，构建含正常ND4蛋白的载体是基因治疗的关键。由于ND4DNA存在于线粒体，而转染的外源基因只能进入细胞核，不能作用于突变的线粒体DNA。探讨将ND4基因成功转染到线粒体是LHON的基因治疗的关键。目的验证人工合成的ND4基因所构建的重组腺相关病毒（AAV）转染细胞后产生的ND4蛋白能否进入线粒体。方法常规体外培养转染腺病毒E1A基因的人肾上皮细胞系（293细胞），将细胞分为AAV—ND4转染组和单纯AAV转染组，分别将两种转染液加至各组的培养基中，分别于转染后12、24、36和48h用Y03量子点免疫荧光法检测细胞质中ND4的表达，细胞质中绿色荧光为ND4表达阳性。结果培养的293细胞生长良好，达到80％融合。荧光显微镜下显示，AAV-ND4基因转染组293细胞质中可见大量绿色荧光，而单纯AAV转染组仅可见线粒体蛋白红色荧光。结论AAV-ND4基因转染细胞后产生的ND4蛋白能够进入线粒体，为LHON的基因治疗提供了实验依据。; 杨硕刘磊裴晗万幸陆朵朵胡维琨李斌; 关键词：LEBER遗传性视神经病变基因疗法线粒体DNA 转染腺相关病毒

外源基因转染细胞技术的研究进展被引量：19: 2014年; 细胞转染技术是分析细胞内基因及基因产物功能的重要工具。它不仅是基因功能研究、基因免疫的理论和技术基础,也是研究基因表达调控、突变分析等的常规工具。同时也是体内应用的重要过程,比如基因治疗、疫苗接种、药物开发等。在过去的40年里,已开发了多种外源基因转染细胞的方法。主要包括以病毒介导的外源基因转染细胞方法和非病毒介导的细胞转染方法。其具体可细分为三类:即生物学方法、化学方法、物理方法。这些方法的提出使外源分子如DNA、RNA等导入特定细胞并表达目的基因及产生特定功能的蛋白质分子得以实现。理想的细胞转染方法应该具有较好的生物降解性、稳定性、靶向性强、有助于基因的表达并能应用于基因方面疾病的治疗。但每种方法都有自己的优势和不足,应根据具体实验的设计和目的来选择最佳细胞转染方法.; 王月丽魏继楼程红蕾刘芳罗素梅王若雨; 关键词：细胞基因

人LGR5基因克隆及其基因转染细胞株的构建: 2013年; 目的克隆人LGR5分子并构建其稳定表达的基因转染细胞株.方法提取人宫颈癌细胞株HeLa细胞总RNA,通过RT-PCR克隆获得人LGR5全长cDNA,将人LGR5全长cDNA重组入逆转录病毒载体pEGZ-term,通过293T细胞的包装获得具有感染力的完整重组病毒载体,收集培养上清感染L929细胞,筛选构建稳定表达人LGR5分子的基因转染细胞株.结果成功克隆人LGR5全长cDNA和构建pEGZ/LGR5逆转录病毒表达载体,成功获得稳定表达人LGR5的基因转染细胞株L/LGR5.结论成功克隆了人LGR5基因并构建了稳定表达LGR5分子的基因转染细胞株,为进一步研究LGR5分子的生物学功能奠定了基础.; 邓云陆婷葛彦居颂文居颂光; 关键词：LGR5 克隆基因转染细胞株

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